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rtpcr 如何分清PCR、qPCR、Real-time PCR、RT-PCR？

我们先来看一下PCR是什么。

PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称。

是一种分子生物学技术，用于扩增特定的DNA片段，可看作生物体外的特殊DNA复制。

原理是利用DNA在体外95℃高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。

最有价值的应用领域就是对感染疾病的诊断。

理论上，只要样本有一个病原体存在，PCR就可以检测到。

qPCR:实现了DNA片段扩增后，如何进行定量分析呢？实时荧光定量PCR （Quantitative Real-time PCR，qPCR）是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。

用TaqMan探针法为例，将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后，完成高温变性，低温复性，适温延伸的热循环，并遵守聚合酶链反应规律，与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断，荧光素游离于反应体系中，在特定光激发下发出荧光，随着循环次数的增加，被扩增的目的基因片段呈指数规律增长，通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度，求得Ct值，同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照，即可得出待测标本目的基因的拷贝数。

Real-time PCR：Real-time PCR 与qPCR基本相同, 是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。

由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。

RT-PCR逆转录PCR或者称反转录PCR（reverse transcription-PCR, RT-PCR），是聚合酶链式反应（PCR）的一种广泛应用的变形，而不是Real-time PCR的缩写。

在RT-PCR中，将 mRNA 反转录合成 cDNA 后再经 PCR 进行大量扩增，人们将这种偶联称为反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）。

RT-PCR 实质上是对 mRNA 的扩增，我们常利用此技术克隆 cDNA或分析某一特异基因在组织细胞中的表达情况。