PCR引物设计

PCR引物设计 RT-PCR的引物如何设计？pcr引物设计的基本原则有哪些设计PCR引物应遵循哪些原则？如何进行pcr引物设计

原理：PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列，引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。

原则：引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。

产物不能形成二级结构。

引物长度一般在15到30碱基之间。

G加C含量在百分之40到60之间。

碱基要随机分布。

引物自身不能有连续4个碱基的互补。

引物之间不能有连续4个碱基的互补。

引物5撇端可以修饰。

引物3撇端不可修饰。

引物3撇端要避开密码子的第3位。

PCR的引物怎样设计，过程是怎样的？寻求详细答案。谢谢！