cck8实验步骤及注意事项

步骤：首先制作标准曲线（测定细胞具体数量）；其次进行细胞活性检测；最后进行细胞增殖-毒性检测。注意事项：先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。

一. 制作标准曲线（测定细胞具体数量）

1、首先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞到培养板内。

2、按照比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每个浓度建议3-6个复孔。

3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞的数量（使用此标准曲线的前提是实验的条件必须要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。）

二. 细胞活性检测

1、在96孔板中接种细胞的悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养一段时间（37℃,5% CO2）。

2、向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡）

3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。