携程是一个在线票务服务公司，创立于1999年，总部设在中国上海。携程旅行网拥有国内外六十余万家会员酒店可供预订，是中国领先的酒店预订服务中心。
携程旅行网已在北京、天津、广州、深圳、成都、杭州、厦门、青岛、沈阳、南京、武汉、南通、三亚等17个城市设立分公司，员工超过25000人。
2003年12月，携程旅行网在美国纳斯达克成功上市。2018年3月21日，携程发布定制师认证体系，国内首张定制师上岗证出炉 [1] 。2019年10月29日，携程宣布英文名称正式更名为“Tripcom Group” [4] 。2021年4月16日报道，携程集团于4月19日正式于港交所挂牌上市
网站文化编辑 播报
运营原则
秉持“以客户为中心”的原则，以团队间紧密无缝的合作机制，以一丝不苟的敬业精神、真实诚信的合作理念，创造"多赢"伙伴式合作体系，从而共同创造最大价值。
Customer ——客户（以客户为中心）
Teamwork ——团队（紧密无缝的合作机制）
Responsibility ——敬业（一丝不苟的敬业精神）
Integrity ——诚信（ 真实诚信的合作理念)
Partner——伙伴(伙伴式共赢合作体系)
产品logo
象征便捷、灵活的海豚
2012年6月，携程发布新Logo，以海豚图案为主，由海豚轮廓改变称为蓝色实心，加上眼睛和嘴巴的海豚图案，整体尺寸上有所缩小，主色调则保持原来的蓝橙两色。携程方面解释新logo体现了携程在移动互联网nag的便捷、灵活、智能和创新。 [28]
网站理念
取之于社会，用之于社会。
产品服务编辑 播报
旅游度假产品
携程度假提供数百条度假产品线路，包括“三亚”、“云南”、“港澳”、“泰国”、“欧洲”“名山”、“都市”、“自驾游”等20余个度假专卖店，每个“专卖店”内拥有不同产品组合线路多条。客人可选择由北京、上海、广州、深圳、杭州、成都、沈阳、南京、青岛、厦门、武汉十一地出发。
携程旅游—黄山风景区
携程旅游—黄山风景区 [29]
此外，旅游还详细分成了主题旅游，周边旅游，境内旅游，港澳台旅游等多种不同形式旅游。在每一种形式中，内容详尽丰富，可适合客人做不同选择。 [30]
私人向导平台
携程旅游私人向导平台有近500名导游加入。 [31] 导游发布的服务在国内是徒步向导,包括9小时每天的讲解和向导服务。 [31] 游客可以通过平台完成服务预订和交易全过程:游客可在平台上根据向导的年龄、性别、价格、服务次数、点评等选择自己心仪的导游。选择后,还可与导游沟通初步确定需求。在出行前,导游也会对游客的需求定制个性化的游玩线路。确定行程后,游客即可在平台上确认合同、在线支付。 [31]
2017年，与庄宏宇工作室携手合作 [32] ，打造明星旅游品牌 [32] 。
2020年2月19日，携程宣布发起“景区云旅游”活动，联合8家供应商，免费开放超过3000家景区的近7000条语音导览产品 [33] 。
携程顾问
是携程旅行网基础于2016年倾力推出的全新的“B2C2C”个人旅游分享经济服务模式。
携程顾问借助携程品牌和产品库为客人提供旅游咨询和预定服务。使用携程顾问APP，携程顾问可以给想要旅游咨询和预订服务的消费者提供最有效的帮助。 [34]
酒店预订服务
携程旅行网拥有中国领先的酒店预订服务中心，为会员提供即时预订服务，合作酒店超过32000家，遍布全球138个国家和地区的5900余个城市，有2000余家酒店保留房。
高铁代购服务与国内火车服务
携程于2011年7月5日推出高铁频道，为消费者提供高铁和动车的预订服务，“暂只提供上海市、江苏省、浙江省、安徽省配送服务。暂提供7天内的高铁及动车票的代购服务。”
携程秉着为客户服务原则，提供近三个月火车票（含高铁、动车）售票服务，提供改签与退票服务。另在手机移动端可进行小程序购票。
携程租车服务
携程租车打通从金融服务商，汽车厂商，到租车供应商，再到用户的全生态链 [13] 。
携程xyk
功能与服务
金穗携程旅行xyk是中国农业银行股份有限公司（以下简称：中国农业银行）与携程旅行网合作发行的金穗系列品牌贷记卡，该卡集金穗贷记卡金融功能以及携程VIP会员卡功能于一体，秉承中国农业银行与携程旅行网的优质服务。
主要特点
1金穗携程旅行xyk，即是携程VIP会员卡，又是农行金穗贷记卡。在携程旅行网消费既可累积携程积分，同时还可以累积xyk积分（其中“携程积分”为：电话或网上预订积分系数为1，无线预订积分系数为2 ）。
2使用金穗携程旅行xyk，即可享有“金融账户+银行积分+携程积分+旅行储备金”4个专享账户。
3持金穗携程旅行xyk，即可预订全球134个国家的28000余家2-5星级酒店。
4持金穗携程旅行xyk，即可实现国内、国际航线机票信息查询；异地出发，本地订票、取票。更可以享受携程独家推出的电子机票服务。
5凭此卡即可享受携程VIP会员各种优惠礼遇，专享酒店折扣、机票折扣、度假折扣，其中包括千余条度假、旅游优惠线路以及全国3000余家特约商户专享餐饮娱乐高额消费折扣。
携程礼品卡
携程旅行网自2011年推出代号为“游票”的预付卡产品，并逐步深度优化产品的用户体验及支付范围，2013年，正式定名“携程礼品卡”。已有“任我行”、“任我游”两类产品供选择。
携程礼品卡—城市地标
除此之外，礼品卡可分成节假日祝福，实体经典，商务答谢，城市地标等种类，可供用户选择。儿化”是现代汉语语音系统中存在的一种突出现象，也是广大北方方言中普遍存在的语音现象之一。赵元任认为“儿”是唯一不成音节的后缀，吕叔湘说：“[后缀]加在名词性成分或其他成分后面，构成名词。读时与前面合成一个音节，叫做‘儿化’”。这是当今语言界上公认的一种说法。但是这种说法也不是很正确：1、既然认为“儿化”中的“儿”是一个后缀语素，那么它就应该具有一定的语音形式，既是是一个音节或一个语素，并且具有一个一致的构词能力，但是回答是否定的。2、把“儿化”中的“儿”看作是一个后缀语素，大都是因为历史的或是方言的影响造成的，不考虑时地因素就违背了语言研究的基本规律。在汉语史上，从“儿尾”到“儿化”是一个本质的变化， 而这种质变早在几百年前就已经在北方话中完成了。在现代方言中“儿尾”与“儿化”并存，应当区别对待。如果说现代汉语中仍有部分证据说明“儿”是一个后缀语素，那也只能算是一些特殊情况，不足以概括“儿化”的性质。
二、儿化的定义
词尾“儿”本是一个独立的音节，由于它在口语中处于轻读的地位，长期与前面的音节流利地连读而产生音变，“儿”失去了独立性，“化”到前一个音节，只保留一个卷舌动作，使两个音节融合成为一个音节，前面音节里的韵母发生了或多或少的变化。这种现象就是“儿化”。
儿化是韵母的音变结果，是伴随脱落、增音、更换和同化的现象。音变主要表现在韵尾，其次是韵腹，对韵头声母没有影响。
三、“儿”的语素身份
3．1、“儿”是最小的音义结合体。“儿”的语音形式是不足一个音节的卷舌动作，它可以结合所附着的语言成分增加“小”、“喜爱”、“随意”等附加意义，可见“儿”是音义结合体；而且“儿”也不可再分割，显然符合语素的两个条件——音义结合体和不可分割，应该将“儿”看作语素。
汉语的语素以单音节为主，因此，汉语的绝大多数语素与音节对应，即一个语素就是一个音节。汉语语素也有与音节不对应的现象，这有两种情况。一种情况是一个语素对应不止一个音节，这又分联绵词、音译外来词两类。联绵词包括双声、叠韵、非双声叠韵、叠音几类，如“仿佛”、“伶俐”、“徘徊”、“彷徨”、“潇洒”、“犹豫”、“奶奶”、“太太”等；音译外来词如“英特纳雄耐尔”、“奥林匹克”、“吐鲁番”、“克隆”等。几个音节合起来表示一个语素，分割开来则每个音节都没有意义，此时语素的语音形式大于音节。另一种情况是一个语素不足一个音节，合音词中的语素即属此类现象。合音词是由语流中两个相邻的词并合而成，并合后的词包含两个语素，比如“俩”是“两”和“个”的并合，不考虑语体因素，则“俩”出现的地方“两个”都可以出现，反之亦然。“俩”是两个语素对应着一个音节，此时语素的语音形式不足一个音节。其他的合音词还有“仨”、“甭”、“孬”、“啦”、“喽”等。
3．2、“儿”是构词要素。从在词中所起的作用来看，“儿”也应该看作语素。
3．2．1、把现成的词变成另一个新词。如：
（1）动词儿化后转化为名词。如：吃→吃儿、盖→盖儿、垫→垫儿
在汉语中，动词要转化为名词，可以直接由行为或过程范畴转换为事物或实体范畴，也可以通过其他两种方法：一种是与另一个词根语素组合成复合词，如“铺盖”、“扮相”；另一种则是与后缀语素组合成派生词，比如，“盖子”、“盖头”。由以上例子可以看出，“儿”与“子”、“头”的作用是相同的。
（2）形容词儿化后转化为名词。如：干→干儿、短→短儿、弯→弯儿
由一个名词通过儿化转化为另一个名词的情况相对来说少一些，更为常见的是一个多义词儿化后一个义项衍生出另一个义项，不同的义项之间尽管存在着渊源上的联系，但所表达的概念是不同的，宽泛一点说，这也相当于由一个词转化为另一个词。例如： 道～道儿、胆～胆儿、地～地儿、里～里儿、门～门儿
（3）名词儿化后转化为另一个名词。如：豆→豆儿、白果→白果儿
（4）量词儿化后转化为名词。如：个→个儿、块→块儿、袋→袋儿
（5）动词、名词儿化后转化为量词。如：拨→拨儿、过→过儿、串→串儿
（6）名词性短语儿化后转化为名词。如：白粉→白粉儿、小鞋→小写儿
（7）动词儿化后转化为另一个动词。如：颠→颠儿
把现成的词或短语变成新的词或短语，除了上述几种类型外，还有其他的一些情况，如 “吃喝～吃喝儿、扳不倒～扳不倒儿”是动词短语儿化后转化为名词，“倍～倍儿”是量词儿化后转化为副词，“八成～八成儿”是数量短语儿化转换为副词。儿化后的成分还可以作为构词成分构成另一个词或短语，例如，名词“刺”儿化后作为构词成分可与其他语素组合构成新词“刺儿话”、“刺儿头”等；形容词“干”儿化后可与“白”、“瓜”构成名词“白干儿、瓜干儿”等。
3．2．2、把不成词的语素变成词。其中“儿”和名词性语素组合构成名词的情况比较多。如：伴→伴儿、脖→脖儿、柜→柜儿
3．2．3、儿化后语言成分的理性意义不变，增加或改变了附加意义。也就是说，改变了“小”、“喜爱”、“亲切”等的意义或者改变语体色彩。如： 刀→刀儿、鸡→鸡儿、字→字儿
3．2．4、把一个词转化为另一个词，把不成词的语素或语素组变成词。
四、儿化的作用
4．1、表示喜爱或亲切的感情色彩。如：鲜花儿 女孩儿 脸蛋儿
4．2、形容细小或轻微的情态。如：一点儿 针尖儿 冰棍儿 红头绳儿
4．3、改变词性，连词义也有所改变。主要是指“儿”与动词性、形容词性、数量词性和各种短语性词根构成各类名词。与动词性词根构成的名词，有的表示动作行为所凭借的工具。如：盖儿、垫儿、铲儿；有的可以表示与词根意义相当的名词，如：唱儿、开儿、闷儿。“儿”有形容词性词根构成的名词，有的具有词根的性状，如：圆儿、黄儿、干儿；有的具有词根的属性，如：短儿、亮儿、准儿。“儿”与数词性词根构成少数表示小孩乳名的名称，如：三儿、五儿。“儿”与量词性词根构成表示事物的具体名词，如：粒儿、块儿、本儿。“儿”与短语性词根构成表示事物的名词，往往带有形象色彩，如：把手儿、铜板儿、围脖儿。
4．4、不改变词性，但有辨义作用。主要是“儿“与名词性词根构成新词表示事物，由于事物间往往有某点相似，通过人们联想，利用儿化构成表示联想物的名称。如： 头（脑袋）——头儿（带头的人） 门（房门）——门儿（门径，办法） 眼（眼睛）——眼儿（小洞） 白面（面粉）——白面儿（毒品）
4．5、习惯读“儿化”的词语。如： 好玩儿 聊天儿 纳闷儿 快板儿
五、 儿化韵音变规则
51、 儿化音变是从从后向前使韵腹（主要元音）、韵尾（尾音）发生变化，对声母和韵头i-、ü-没有影响。
52、丢掉韵尾-i、-n、 -ng。
53、在主要元音上（主要元音是 i、 ü时除外）加卷舌动作。这些主要元音大多数变为带有卷舌色彩的中央元音ar和er。
54、在主要元音 i、 ü后面加上er[ r ]。包括原形韵母5个： i、in、 ing、 ü、ün。另外，儿化时舌尖元音-i[ ]和[ ]后加上一个er，实际读音是用[ ]替换了原来的韵母。
55、后鼻尾音韵母儿化时，除丢掉韵尾 -ng外，往往使主要元音鼻化。
普通话39个韵母，除本身已是卷舌韵母的er外，理论上都可以儿化，但口语中韵母e^、ou、 eng（把bo、po、mo、fo后 o看作是uo的省略。认为“瓮”可以儿化比较勉强）未见儿化词，实际只是35个韵母可以儿化。
六、儿化韵的读音规律
61、以a、o、ê、e、u（包括ao、eao中的o）作韵尾的韵母作儿化处理时，其读音变化不太大，卷舌动作与其本身的发音冲突不大，所以儿化时直接带上卷舌音色彩即可。其中，e的舌位稍稍后移一点，a的舌位略微升高一点即可。如：
a→ar：哪儿nǎr 、手把儿shǒubàr
ia→iar：叶芽儿yièyár、 钱夹儿qiánjiár
ua→uar：画儿huàr 、浪花儿lànghuār
o→ou：粉末儿fěnmòr 、竹膜儿zhúmór
uo→ror：眼窝儿yǎnwōr 、大伙儿dàhuǒr
e→er：小盒儿xiǎohér、 硬壳儿yìngkér
ue→uer：主角儿zhǔjuér、 木橛儿mùjuér
ie→ier：石阶儿shíjiēr 、字帖儿zìtiěr
u→ur：泪珠儿lèizhūr、 离谱儿lípǔr
ao→aor：小道儿xiǎodàor 、荷包儿hébāor
ou→our：老头儿lǎotóur、 路口儿lùkǒur
iao→iaor：小调儿xiǎodiàor、 嘴角儿zuǐjiǎor
iou→iour：小球儿xiǎoqiúr 、顶牛儿dǐngniúr
62、韵尾音素以i、ü为主要元音的韵母作儿化处理时，因i、ü开口度较小，舌高点靠前，i、ü此时又是韵腹不能丢去，故与卷动作有冲突。处理的方法是先增加一个舌面、央、中、中圆唇元音，再在此基础上卷舌。如：
i→ier：锅底儿guōdǐr 、柳丝儿liǔsīr 、玩意儿wányìr
ü→üer:ih 小曲儿xiǎoqǔr、 毛驴儿máolǘr、 有趣儿yǒuqǔr
63、韵尾音素为I的韵母作儿化处理时，因I的发动作与卷舌有所冲突，儿化时韵尾I丢失，在主要元音的基础上卷舌。舌位在有的主要元音，由于受卷舌动作的影响，舌位向央、中方向后移。如：
ai→ar大牌儿dàpáir 、窗台儿chuāngtáir
ei→er：同辈儿tóngbèir 、宝贝儿bǎobèir
uai→uar：糖块儿tángkuàir 、一块儿yīkuàir
uei→uer：口味儿kǒuwèir 、一对儿yīduìr
64、韵尾音素为n的韵母作儿化处理时，因为n的发音妨碍了卷舌动作，所以儿化的韵尾n音要丢失，在主要元音基础上卷舌。原来舌位在前的主要元音，儿化后其音的舌位向央、中方向后移，主要元音妨碍卷舌的i、ü时，要增加一个舌面、央、中、不圆唇元音，再在此基础上卷舌。如：
an→ar：顶班儿dǐngbānr、 传单儿chuándānr
en→er：亏本儿kuīběnr 、命极儿mìnggēnr
ian→iar：鸡眼儿jīyǎnr 、路边儿lùbiānr
in→iar：用劲儿yòngjìnr、 手印儿shǒuyìnr
uan→uar：好玩儿hǎowánr、 拐弯儿guǎiwānr
uen→uer：皱纹儿zhòuwénr 、开春儿kāichūnr
üan→üar：圆圈儿yuǎnquānr 、手绢儿shǒujuànr
ün→üer：合群儿héqúnr 、花裙儿huāqúnr
65、以舌尖前元音－I或舌尖后元音－I作韵尾的韵母作儿化处理时，因其发音的开口度小，且舌尖已接近齿背或前硬腭，已妨碍了卷舌动作，故儿化时应将其变为舌面、央、中、不圆唇元音，再在此基础上进行卷舌。如：
－i→er：找刺儿zhǎocìr、 柳丝儿liǔsīr
－i→er：树枝儿shùzhīr、 找事儿zhǎoshìr
66、以nag为韵尾音素的韵母作儿化处理时，nag的发音部位在后（并不妨碍卷舌动作），但由于nag是鼻音，发音时口腔中没有气流通过，所以卷舌时就不能形成卷舌特点。故作儿化处理时要将nag音完全丢失，再在主要元音的基础上卷舌。若主要元音妨碍了卷舌动作的话，就增加一个鼻化的舌面、央、中、不圆唇元音，再在此基础上卷舌。如：
ang→angr：茶缸儿chágāngr、 药方儿yàofāngr
iang→ iangr:小羊儿xiǎoyángr、 菜秧儿càiyāngr
uang→uangr：竹筐儿zhúkuāngr、 门窗儿ménchuāngr
eng→（e上面小波浪）r：跳绳儿tiàoshéngr、竹凳儿zhúdèngr 、裤缝儿kùfèngr
ong→ongr：小洞儿xiǎodòngr 、抽空儿chōukòngr 、酒盅儿jiǔzhōngr
iong→iongr：小熊儿xiǎoxióngr
七、“儿化”的结构分析
7．1、把普通话中“儿化”作为一种“音变”的语音现象来认识，这是正确的，但这并不意味着不能对它们进行音节分析。
7．2、汉语音节结构分析中已经有了对卷舌元音成音节的结构分析。
7．3、虽然儿化音节目前缺乏规范，但从来没有取消过儿化音节，而且很明确的作为一个音节的“儿化音节”概念，有音节而无音节分析，一般很难说的过去。另外，在书面上很少有儿化音节，但确实存在不少能区别词性和意义，在书面上也要使用的儿化音节词。
7．4、分析儿化音节结构确实比较复杂困难。因为儿化音节中存在大量的音变现象，但这只是技术问题，不能作为回避的理由。相反，正因为它复杂困难，在更必要深入研究分析。
7．5、更重要的一点是通过对儿化音节的分析，可以澄清对儿化音节错误的认识和模糊不清的表述。
八、结语
“儿化”是现代汉语语音系统中存在的一种突出现象，也是广大北方方言中普遍存在的语音现象之一。从现代汉语中“儿化”的语素身份、作用、音变规则及结构分析，简单的讨论了现代汉语中的一些现象及问题。“儿化”是现代汉语语音中一种突出的现象，有很多作用，是人们不能忽视的一种语音现象。
[参考文献]
⑴朱德熙 《语法讲义》 商务印书馆 1984
⑵吕叔湘 《吕叔湘语文近著》 商务印书馆 1982
⑶吕叔湘 《中国文法要略》 商务印书馆 1982
⑷赵元任 《汉语口语语法》 商务印书馆 1979
⑸鲁允中 《儿化现象一例》 《中国语文》 1985 6
⑹李延瑞 《“儿化”性质及普通话儿化韵的发展趋势》
⑺李立成 《“儿化”的性质新探》 《杭州大学学报》 1994 9
⑻刘雪春 《儿化的语言性质》 《语言文字应用》 2003 8
⑼宋玉柱 《关于“-儿”的语法性质》 《语文月刊》 1991 2
⑽林 焘 《北京话二话韵个人读音差异问题》 《语文研究》 1982 2
⑾张学涛 《普通话“儿化”音变韵复的趋变规律》
三级淋巴结构（TLS，也称为异位淋巴组织/器官）是在非淋巴组织中发现的淋巴组织结构。TLS可在炎症组织中发生，并与慢性炎症性疾病、自身免疫性疾病和癌症有关。因此，TLS作为肿瘤免疫调节和肿瘤治疗的有利手段，受到了肿瘤患者的关注。
三级淋巴结构可以看成是一个在架构在成纤维细胞网络上的淋巴细胞聚集体，包含两个重要的结构区域—T细胞区和（滤泡）B细胞区。成熟的三级淋巴结构被定义为存在有生发中心（Germinal centre，GC），GC内含有T滤泡辅助细胞和滤泡状树突细胞，并且与B细胞紧密联系。
异位淋巴组织生成的起始阶段是由一种局部炎症微环境驱动的，主要参与的免疫细胞包括：分泌IL-17的CD4+细胞，、NK细胞、中性粒细胞、γδT细胞和ILC3等。
这些免疫细胞与成纤维细胞、血管周围成纤维细胞、间充质细胞和间质细胞形成紧密连接，释放细胞因子如IFN-γ、IL-1β、TNF等。这些细胞因子促进粘附分子表达以及趋化因子（即CXCL12、CXCL13、CCL19和CCL21）释放，创建淋巴结构形成的基础空间环境。
释放的趋化因子，招募趋化T细胞，B细胞等更多的免疫细胞至炎症局部三级淋巴器官形成空间，基质细胞等持续释放淋巴细胞存活细胞因子等（BAFF，IL-7，CXCL12），支持迁移过来的淋巴细胞持续存活，活化，增殖形成异位淋巴器官。
激活的B细胞和T细胞释放LTα1β2，驻留的间质细胞、浸润巨噬细胞、树突状细胞和其他实质细胞产生的趋化因子（CCL19/21，CXCL12/13），FDCs促进生发中心形成，高亲和力抗体产生。B细胞也产生FDCs分化需要的 LTα1β2。
B细胞、T细胞和树突状细胞向三级巴组织的募集，激活内皮细胞的高内皮微静脉样表型。
在胚胎和新生儿时期，高内皮微静脉在所有次级淋巴器官中发育，对启动和维持免疫反应至关重要，因为它们从血液中提取幼稚和记忆淋巴细胞，并将它们输送到淋巴结内的抗原呈递细胞。
这些有助于淋巴细胞存活和/或增殖的细胞因子，自身抗体（Auto-Abs）等，为异位第三淋巴器官的维持创造一个生态位。
肿瘤内三级淋巴结构 (TLS) 的存在与积极的临床结果和对癌症免疫治疗的反应有关 。在这里，使用 空间转录组学来检查肾细胞癌 (RCC) 中 TLS 内 B 细胞反应的性质 。 B 细胞在 TLS区域中富集，在研究中可以识别所有 B 细胞成熟阶段朝向浆细胞 (PC) 的形成 。 B 细胞 repertoire 分析揭示了 在TLS 中的B细胞的克隆多样化、选择、扩增以及远处完全成熟的克隆型的存在。在 TLS+ 肿瘤中， 产生 IgG 和 IgA 的 PC 沿着成纤维细胞空间分布迁移到肿瘤bed中 。 TLS+ 肿瘤表现出高频率的产生 IgG 的 PC 和 IgG 染色和凋亡的恶性细胞，这表明具有抗肿瘤效应活性。Therapeutic responses and progression-free survival correlated with IgG-stained tumor cells in RCC patients treated with immune checkpoint inhibitors。因此， 肿瘤内 TLS 维持与免疫治疗反应相关的 B 细胞成熟和抗体产生，可能通过直接的抗肿瘤作用 。
在自身免疫性疾病、慢性感染、移植排斥和癌症中遭受慢性炎症和抗原持久性的组织中发现了三级淋巴结构 (TLS)。 肿瘤内 TLS 的存在和密度与许多癌症类型的良好预后相关
TLS 是在成纤维细胞网络上形成的有组织的淋巴样聚集体，包括一个 T 细胞区，其中成熟的树突细胞与 T 细胞接触，以及一个滤泡性 B 细胞区 。 成熟 TLS 的定义是存在包含 T 滤泡辅助 (Tfh) 细胞和与 B 细胞紧密接触的滤泡树突状细胞的生发中心 (GC) 。最近的证据支持这样的结论，即含有 GC 的成熟 TLS，而不是没有 GC 的早期 TLS，与肝细胞癌、肺鳞状细胞癌、结直肠癌和胰腺癌的临床益处相关。 GC的主要功能是产生记忆B细胞和分泌高亲和力抗体的 long-lived 浆细胞(PC) 。 B 细胞和 PC 转录组特征的高表达水平和高 PC 密度与几种癌症类型的较长存活率相关。在软组织肉瘤、黑色素瘤、肾细胞癌、非小细胞肺癌、尿路上皮癌和其他肿瘤中， B 细胞和成熟 TLS 的存在比 T 细胞更准确地预测了对免疫检查点抑制剂 (ICI) 的治疗反应和存活率癌症类型 。 B 细胞和 PC 影响临床结果和对 ICI 反应的机制尚不清楚。尽管一些研究显示肿瘤内 B 细胞可以在某些癌症中产生针对肿瘤相关抗原的 IgG 和 IgA 抗体，但没有证据表明它们起源于肿瘤内发生的 B 细胞分化，特别是在 TLS 部位。
在目前的工作中， 解决了 TLS 作为 B 细胞原位成熟驱动因素、产生抗体的 PC 的作用以及它们对 ICI 反应的影响的问题 。 研究了肿瘤的空间分辨转录组结构透明细胞肾细胞癌 (ccRCC) 原发性肿瘤的微环境 (TME) 。通过关注 TLS 及其附近，展示了 B 细胞在不同成熟阶段的存在，支持 B 细胞反应的产生。分析证明了 B 细胞的体细胞超突变、克隆选择和扩增，以及 PC 产生的免疫球蛋白，表明肿瘤内部产生了完整的 B 细胞反应。此外， 发现 IgG 和 IgA 阳性 PC 沿着 CXCL12 阳性成纤维细胞轨道在肿瘤内迁移 。显示抗体（主要是 IgG）与肿瘤细胞结合，并且它们的存在与半胱天冬酶依赖性肿瘤细胞凋亡有关。在 IgG 染色的肿瘤细胞附近检测到呈现 caspase 3 活化的巨噬细胞表明它们可能是通过诱导 IgG 介导的肿瘤细胞死亡的效应物。最后，具有大量 IgG 阳性肿瘤细胞的患者对 ICI 反应表现出高反应率和更长的 PFS。
为了分析 TLS 对 TME 结构的影响，使用了 10X Genomics 的 Visium 空间转录组学技术。 它使用位于直径为 55 um 的点中的空间条形码寡核苷酸以空间分辨率测量完整的转录组。 这允许在多达 5,000 个spot中量化空间基因表达。
使用冷冻（n = 12）和 FFPE 切片（n = 12）对 24 个 ccRCC 原发性肿瘤进行空间转录组学 。在对切片进行 H&E 染色后，经验丰富的病理学家 (VV) 对每个肿瘤的整体组织以及 TLS 的存在和定位进行了注释 。下图显示了一个 TLS+ 冷冻切片肿瘤、一个 TLS+ FFPE 肿瘤和一个 TLS- 冷冻切片肿瘤。 碳酸酐酶9（蛋白质名称：CAIX，基因名称：Ca9）是ccRCC肿瘤细胞的标志物，在大多数ccRCC肿瘤中的表达与23/24肿瘤中的表达一致，并且在肿瘤切片中分布均匀 。使用微环境populations (MCP)-counter评估 TME 的免疫和基质细胞群的分布， 该counter从转录组谱估计细胞类型丰度 。在下图所示的 TLS+ 肿瘤中，B 细胞谱系（包含识别从幼稚细胞到 PC 的所有成熟步骤的基因）和 T 细胞（识别不同的 T 细胞群）基因特征优先在位于TLS 区域中表达 。这些肿瘤表现出 CD8 T 细胞特征的低表达，在 TLS 区域略有富集（p = 0017）。 TLS 中的单核细胞谱系特征略高（分别为 p = 000081 和 p = 0035），而 NK 细胞更广泛地分布在整个肿瘤切片中。内皮细胞和中性粒细胞均匀分布，在 TLS 内得分较低）， 而在 TLS 区域发现成纤维细胞特征的高表达 。 TLS 肿瘤没有显示出这种有组织的模式，MCP counter 分析显示 B 谱系评分非常低且分散分布，以及其他免疫和基质特征的分散定位。这些不同的 TME 空间组织模式在 8 个 TLS+ 和 4 个 TLS- 冷冻切片肿瘤以及 10 个 TLS+ 和 2 个 TLS- FFPE 肿瘤中始终可以识别，这表明 TLS 与 B 谱系、T 细胞和成纤维细胞特征的表达有关
为了确定 TLS 在肿瘤中的转录组学印记， 在冷冻切片的连续载玻片上通过三重 IF 标记 (CD20/CD3/PD-1) 确认了 H&E 定义的 TLS 位置，表达分析IHC 对 FFPE 样品进行切片和 CD3/CD20 标记后，在 TLS 和肿瘤区域之间进行了差异基因 。通过留一法交叉验证对 4 个冷冻的 TLS+ 肿瘤进行了 TLS 印记markers的研究， 这是一种通过识别来自 3 个肿瘤的基因并在第四个肿瘤上验证它们来执行顺序排列的方法 。平均倍数变化超过 2 且调整后的 p 值低于 005（Bonferroni 校正）的基因被考虑用于分析。在signature中选择了在至少 3 个 TLS+ 肿瘤中分别达到 07 曲线下面积 (AUC) 的基因，这导致了 29 个基因的 TLS imprint signature。该特征包括 12 个免疫球蛋白基因（IGHA1、IGHG1、IGHG2、IGHG3、IGHG4、IGHGP、IGHM、IGKC、IGLC1、IGLC2、IGLC3 和 JCHAIN）、5 个 B 细胞标志物（CD79A、FCRL5、MZB1、SSR4 和 XBP1）， 2 个 T 细胞标志物（TRBC2 和 IL7R）、2 个成纤维细胞标志物（CXCL12、LUM）、2 个补体蛋白编码基因（C1QA 和 C7），以及 CD52、APOE、PTLP、PTGDS、PIM2 和 DERL3 基因。这 29 个基因特征是 TLS imprint的标志物，在发现冷冻 TLS+ 肿瘤时的 AUC 范围为 089 至 097，而在其余冷冻 TLS+ 肿瘤的验证中，其 AUC 范围为 077 至 094。该特征在 9/10 TLS+ 肿瘤中 AUC 范围为 075 至 093 的 12 个 FFPE 肿瘤上得到进一步验证，但一个样本的 AUC 为 062 且 TLS 印记特征表达较弱。发现该肿瘤缺乏 TLS 成熟度标志物，例如 CD23 和 BCL6，以及外周淋巴结寻址素阳性 (PNAd+) 高内皮小静脉 (HEV)。在 4 个冷冻和 2 个 FFPE TLS 肿瘤中仅观察到印迹特征的稀疏表达，除了一个肿瘤，其中基因特征识别出表达 MZB1 PC 相关基因和 IGHG1 的小区域，尽管没有 TLS通过 H&E 染色和 CD3-CD20 IF 标记观察。
Ig 和 B 细胞相关基因在 TLS 印记特征中的显著富集促使研究关注 B 细胞 。首先旨在精确定位与 TLS 相关的转录不同的 B 细胞亚型。使用稳健的细胞类型分解 ( RCTD，大家可以参考文章 10X单细胞空间联合分析之十（RCTD） ) 对扁桃体 B 细胞单细胞分析中定义的 B 细胞亚群进行空间映射，发现幼稚 B 细胞相关基因的表达稀少，尽管与 TLS 显著相关，并且与 FCRL4+ 记忆 B 细胞密切相关、GC B 细胞 (p = 00087) 和具有 TLS 的浆细胞特征。 PC 相关基因 MZB1 的表达在 TLS 中高，而在冷冻切片肿瘤的肿瘤区域中总体低 。在 FFPE 肿瘤中发现了类似的结果。然而，在肿瘤内的不同位置检测到许多分散的、远离 TLS 的 MZB1 表达点。 MZB1 是浆母细胞特征的一部分，在 PC 中高度表达。由于浆母细胞仅限于 TLS 区域，并且在 TLS 外发现 MZB1 的高表达，因此表达 MZB1 的 PC 可能不仅存在于 TLS 中，而且存在于肿瘤bed中。 由于 PC 的主要功能是产生抗体，于是分析了免疫球蛋白基因的空间表达 。 IGHM 几乎只在 TLS 区域表达，增强了 TLS 内非转换 B 细胞的存在，而 IGHG1、IGHA1 和 pan Ig（IGKC 和 JCHAIN 的几何平均值）基因在 TLS 区域高度表达，but also at distance in the tumors。 IGHG1 和 IGHA1 的分散表达表明同种型转换的 PC 已在 TLS 中形成并在远处迁移 。
值得注意的是，在与泛 Ig 基因（IGKC、JCHAIN）、IGHG1 和 IGHA1 基因相同的位置发现了泛成纤维细胞标记 COL1A1 的高表达以及 MCP-counter 成纤维细胞特征。 由于据报道 CXCL12 与位于骨髓、淋巴结髓索和慢性炎症组织中的 PC 生态位中的 PC 迁移和滞留有关，我们分析了 CXCL12 的表达，发现它与 MZB1 的表达共定位 。
为了进一步评估这些不同特征之间的空间协同定位，每个特征的表达被二分法，使用中值作为截止点，为每个spot定义“高”或“低”表达类别 。 当一个基因被两个特征共享时，它会从其中一个特征中删除，以避免其对统计分析的影响 。因此，当分析 TLS 和 CXCL12 基因表达之间的重叠时，从 TLS imprint signature 中删除了 MZB1 以分析 TLS/MZB1 重叠和 CXCL12。然后通过计算两个特征之间的卡方检验来评估有意义的重叠，并用突出显示分类为“高/高”的点。 该分析不仅证实了 TLS 特征与 MZB1、成纤维细胞和 CXCL12 的共定位，而且还证实了成纤维细胞与 CXCL12、MZB1 与成纤维细胞以及 MZB1 与 CXCL12 在距 TLS 一定距离处的共定位 。 这些共定位在其他 TLS+ 肿瘤中得到证实，而在 TLS-肿瘤中观察到轻微或无关联 。总体而言，得出结论， 在 TLS+ 肿瘤中，表达 IGHG1 和 IGHA1 的 PC 存在于 TLS 附近，并且可能与成纤维细胞相关地在肿瘤内迁移 。
TLS 中 B 细胞成熟亚型和 PC 的共定位暗示了原位 B 细胞适应性免疫的产生。在此过程中，B 细胞会突变其 B 细胞受体 (BCR) 序列，并选择和扩增最亲和的克隆 。为了证明这些事件，有必要研究 BCR 的核苷酸序列。 Visium 空间技术基于条形码转录本的 RNA 测序，这能够访问原始转录本并执行空间 BCR repertoire 分析。 使用了公开可用的实施 MiXCR，这是一种旨在从 50 个 RNA 测序数据中识别 BCR IgL 和 IgH 克隆型及其种系体细胞超突变的工具，以及 30 Frozen Visium 试剂盒，它使我们能够获得足够长度的 mRNA 转录物捕获大多数 IGL 和一些 IGH 序列的完整互补决定区 (CDR)3 区域 。通过 3 倍推荐深度（每个点 150,000 个读数，相当于每个样本 225 亿个读数）的测序促进了这种捕获。MiXCR 鉴定了许多独特的克隆型：总共 3,015 个 λ 轻链、3,084 个 kappa 轻链和325 重链。 在 TLS+ 肿瘤中发现了最多的独特克隆型和总 Ig 计数。在 TLS 区域也发现了数量最多的独特轻链克隆型 。 通过测量 Ig 轻链序列的 V 区的突变计数与映射的 V 种系基因进行比较来评估 B 细胞成熟 。中位 V 基因突变计数在 TLS 区域中显示低至中位水平，并且引人注目的是， 在肿瘤区域中远离 TLS 的大部分是高度突变的序列 。尽管如此， 在 TLS 区域测量了全范围的突变，包括高度突变的序列，而距 TLS 一定距离的大多数 Ig 转录物富含高度突变的序列，表明体细胞超突变发生在 TLS 中，并表明突变的 PC 在整个肿瘤中迁移 研究了来自 47 个 ccRCC 肿瘤（包括 Visium 分析的 12 个冷冻肿瘤）的bulk 50 个 RNA-seq 中的轻链和重链突变计数，这些肿瘤使用 TLS 印记特征的中值表达被分类为 TLS 高或低。对于 VL（中位 TLS 高 = 12 个突变，中位 TLS 低 = 8 个突变，p = 00163）和 VH 基因（中位 TLS 高 = 19）， TLS 高与 TLS 低肿瘤的总体体细胞超突变水平显着更高突变，中位 TLS 低 = 135 个突变，p = 00227） 。为了确定体细胞超突变是否伴随着克隆型选择，研究了bulk 50 RNA-seq 数据的 IgH 库。 高 TLS 样本的所有样本都表现出大量的总克隆型计数以及计数超过 100 次的更高比例的克隆型 。事实上，30% 的 TLS 高肿瘤库被识别超过 100 次的克隆型占据，而 TLS 低肿瘤中这一比例为 1% (p = 10e-7)，揭示了 TLS 高样本中持续的免疫反应。相反，TLS-low 样本显示出较少的多样性，计数较低，大多数被测量不到 10 次，除了一个肿瘤有 123 个 IgH 克隆型，只有 2 个被计数超过 100 次。
最后，为了确定扩增的 IgH 克隆型的克隆关系和位置，对 30 个 RNA-seq 空间数据进行了克隆性评估。 克隆性由相同的 VH 基因家族、相同的 JH 基因和相同的 CDR3 长度以及 VH 序列之间的 CDR3 核苷酸序列的最大差异为 15% 来定义 。为了可视化这些关系， 计算了每个 VH CDR3 序列之间的 Levenshtein 距离，并用 TLS+ 肿瘤的圆形树表示它 。总共确定了 31 个具有 2 至 16 个独特成员的克隆家族。在一个家族中，一些克隆可以在多达 20 个不同的空间位置被检测到多达 80 次。 IgH 克隆型在 Visiumslide 上的定位证明了同一家族的克隆型聚集在 TLS 附近并在远处稀疏迁移。一些克隆型甚至可以在距它们所在的 TLS 区域高达 3 mm 处检测到可能已经生成。为了证实这些结果，在从配对的bulk 50 RNA-seq 推断的克隆型中寻找从空间 30 RNA 转录组学鉴定的克隆型的 CDR3 核苷酸序列。克隆家族 1 的 CDR3 序列 CATYNAGEGGRGYW 的克隆型也在bulk 50 个 RNA-seq 数据中发现，从而证实了分析的结果。 此外，这些克隆型位于 TLS 内部和远离 TLS 的位置，表明相应 B 细胞克隆的迁移 。
为了分析肿瘤内 PCs 和成纤维细胞的位置以及原位 CXCL12 的表达，使用多发性骨髓瘤癌基因 1 (MUM1) (IRF4) 作为 PCs 和 COL1 (Col1a) 的特异性标志物对 FFPE 肿瘤切片进行多重 IF 标记) 用于成纤维细胞 。在 TLS 区域内检测到双阳性 MUM1+ IgG+ PC 和一些 MUM1+ IgA+ PC，由连续载玻片上的显色 CD3/CD20 标记定义。在这些区域观察到 COL1+/CXCL12+ 成纤维细胞与 MUM1+ PC 并列。此外， 在远离 TLS 的地方证明了 PC 沿着成纤维细胞轨道排列，嵌入在密集的 COL1+ CXCL12+ 成纤维细胞网络中，从而证明它们在肿瘤床中的迁移 。为了定量评估 PC 和成纤维细胞之间的空间关系，对 DAPI/MUM1/IgG/IgA IF 染色样品上的成纤维细胞核进行了 AI 检测。如下图所示， 成纤维细胞核的检测映射了 COL1+ 成纤维细胞轨迹 。绝大多数 PC 与成纤维细胞核非常接近，两个肿瘤的平均距离分别为 175 和 19 mm，其距离分布下图所示。在 44 个肿瘤样本上测得的平均距离为 257 mm。总而言之， 这些数据概括了 Ig 和成纤维细胞转录物的共表达，以及成纤维细胞转录物和 CXCL12 的共表达，并验证了 PC 在 TLS 内的位置以及空间转录组学确定的成纤维细胞网状细胞 (FRC) 空间上的位置 。值得注意的是， 在被 MUM1+ IgG+ 成纤维细胞轨道包围的肿瘤巢中检测到与肿瘤细胞结合的 IgG 。
为了进一步研究 TLS、肿瘤内 PC 和 Ig 染色之间的联系，首先分析了 TLS 成熟度。 成熟 TLS 的特点是 GC 包含一个被 T 细胞区包围的 B 细胞区，其中存在 CD4+PD1+ T 细胞、CD4+ PD1+CXCR5+ Tfh 细胞和产生 CXCL13 的细胞 。 GC 区的特点是在外围检测到 CD23+ 滤泡树突细胞 (FDC)、BCL6+ CD20+ B 细胞和 PNAd+ HEV 网络。 研究了 103 个肿瘤中 TLS 的存在与 PC 密度之间的相关性。 观察到 TLS 的存在与 MUM1+ IgG+ 细胞和 MUM1+ IgA 细胞的密度之间存在显著关联。 进一步研究了 57 个 TLS+ 样本上 TLS 成熟度标记与 MUM1+IgG+ 和 MUM1+IgA+ PCs 密度的相关性。 发现含有 CD23+ FDC 网络、BCL6+ 细胞和 PNAd+ HEV 的 TLS 与 MUM1+IgG+ PC 和 MUM1+IgA+ PC 密度之间存在很强的相关性。
在肿瘤巢周围检测到高密度的产生 Ig 的 PC 和在肿瘤巢中观察到 IgG 促使研究抗肿瘤抗体的存在 。 值得注意的是，如在 TLS+ 肿瘤中所示， a bright labeling of CAIX+ tumor cell membrane，by conjugated anti-human IgG was observed as illustrated in a TLS+ tumor, whereas no labeling was observed in a TLS- tumor 。 随后对 103 个肿瘤的量化显示 IgG 阳性率很高，与 TLS- 肿瘤相比，TLS+ 中的肿瘤细胞高达 100%（中位数分别为 70% 和 30%，p = 00046）。 在 TLS+ 和 TLS- 肿瘤中均观察到弱 IgA 标记。 此外，发现肿瘤细胞上的 IgG 标记与 MUM1+ IgG+ PC 的肿瘤浸润之间存在显著关联（MUM1+IgG+ 高肿瘤的中位 IgG 标记 = 80%，MUM1+IgG+ 低肿瘤的中位 IgG 标记 = 40%，p = 0000195） , IgA 标记非常低。
为了揭示肿瘤结合 IgG 抗体的潜在功能，使用检测切割的半胱天冬酶 3 的抗体搜索肿瘤细胞中发生的细胞凋亡迹象，通过其典型的大细胞核和透明细胞表型鉴定 。下图说明了切割半胱天冬酶 3 在 一个 TLS+ 和一个 TLS- 肿瘤。 在 IgG 染色高于 60%（这是区分两个肿瘤群的最佳平均值）的肿瘤中，裂解的 caspase 3+ 肿瘤细胞的密度显着高于 IgG+ 肿瘤细胞低于 60% 的肿瘤（中位数：127 个细胞/ mm2 和 72 个细胞/mm2，p = 00255）。
这里解决了可能在诱导肿瘤细胞凋亡中起作用的机制的问题。 由于巨噬细胞和 NK 细胞是抗体依赖性细胞毒性 (ADCC) 的主要效应物，分别评估了 76 和 98 个肿瘤上 CD68+ 巨噬细胞和 NKp46+NK 细胞的总密度，found no correlation with the density of cleaved caspase-3+ tumor cells 。然而， 发现具有大量凋亡细胞和高百分比 IgG 染色肿瘤细胞的肿瘤比具有大量凋亡细胞但低百分比 IgG 染色肿瘤细胞的肿瘤更容易被 CD68+ 巨噬细胞浸润 （p = 00054 ）。接近性评估证明 14 个肿瘤上 CD68+ 巨噬细胞和裂解的 caspase 3+ 肿瘤细胞呈正相关，凋亡细胞数量多，IgG 染色肿瘤细胞百分比高。NK 细胞的密度低于巨噬细胞，并没有表现出这种相关性。此外， 发现 136% 的凋亡肿瘤细胞位于小于 25 mm 的巨噬细胞处，而没有观察到 NK 细胞和凋亡肿瘤细胞之间的紧密接近 （中位数 = 05%）。
为了评估 IgG 肿瘤染色对 ICI 治疗患者的影响，我们评估了来自 NI 治疗患者的 35 个肿瘤和来自 Nivolumab 治疗患者的 16 个肿瘤（一名 Nivolumab 治疗患者的 IgG 肿瘤染色不可评估，一名患者缺少临床信息） 我们选择平均 IgG 肿瘤染色 (60%) 作为截止值，因为它区分了最好的两个肿瘤群体。对于 NI 治疗的患者，证明了 IgG 肿瘤细胞标记高于平均值的患者的治疗反应与 62% 的客观反应（OR：完全和部分反应）之间存在显著关联，而 IgG 肿瘤细胞标记低于平均值的患者为 18% OR (p = 00384)，以及与低 IgG 肿瘤细胞染色相比，高 IgG 肿瘤细胞染色患者的 PFS 显著延长（中位 PFS = 163 个月对 64 个月，p = 0039）。仅接受 Nivolumab 治疗的患者队列太小，无法进行统计分析。然而，在接受 ICI 治疗的 51 名患者中，无论是单用 Nivolumab 还是 NI，对于肿瘤染色高的患者（未达到与 64 个月，p = 0019）相比，观察到 PFS 显著延长，并且 OR 数量呈增加趋势（58% 对 32%）。
Our study has several limitations Spatial transcriptomic analyses reveal the architecture of a limited part of a tumor and do not take into consideration potential 3D tumor heterogeneity This limitation is inherent to this type of analysis。
生活很好，有你更好
关于印度与亚洲大陆之间的碰撞与拼合，国内外地学工作者已作过不少的研究工作，并有诸多成果得到发表。然而，尽管人们对碰撞的时间给予充足的兴趣与重视，但对于碰撞起始时间的把握仍十分不确切，且得出的解释往往大相径庭。造成这种情况的原因，一方面是由于人们所用来确定碰撞时间的方法各不相同；另一方面是由于人们对于大陆碰撞与拼合不同阶段的理解存有差异所至。
现将目前人们用来确定印度与亚洲碰撞时间的方法及所得出的结果概述如下：
一、古地磁方法
1）有人（Bulter，1995）认为：洋底的地磁倒转类型记录了印度洋张开的历史，据此可再造印度大陆在历史时期的位置。对印度洋新生代磁异常的分析表明，在约50 Ma，印度板块和欧亚板块之间的相对速度从约15～25 cm/a迅速减少到约13～18 cm/a。板块会聚速率的突然减少被当作是指示印度板块与亚洲板块碰撞的初始时代（Patriat等，1984）。从印度洋90°E洋脊的沉积岩古地磁结果，可类似地说明，在约55 Ma，印度板块的向北运动表现为一个显著的减速（从18～19 cm/a降到45 cm/a）（Klootwijk等，1992），Klootwijk等（1992，1994）将这种运动速率的变化解释为印度板块和亚洲板块之间缝合作用的完成，并据此推断印度板块与亚洲板块初次接触的时间要早于55 Ma。会聚速度的降低代表着漂移陆壳对俯冲带的阻塞作用，因而可用最初的减速来确定碰撞开始的时间。但目前尚难确定是否是由于漂浮的印度大陆边缘和亚洲板块的接触产生的构造阻力的增加导致印度板块与亚洲板块之间的会聚慢下来，或者，是否仅仅反映在约50～55 Ma沿印度洋中脊扩张速度会突然减慢（尹安，2001）。青藏高原综合地质考察队（1990）所做的古地磁研究表明（图7-1）：在印度与亚洲两大板块碰撞之前，印度板块向北漂移的速率大约为16 cm/a。碰撞以后印度板块并没有停止移动，仅减慢而已，接近5～6 cm/a。
图7-1 青藏高原各地体（现在东经90°）相对于印度和安加拉克拉通纬度变化的立体图解
2）印度与亚洲之间相对运动发生一个大的变化的时间（40 Ma）被认为反映了印度与亚洲碰撞的开始（Molner 和Tapponnier，1975）。这种变化经过校正的测定数据为50 Ma（Patriat and Achache，1984；Besse等，1984）。对印度最边缘和喜马拉雅北部晚古新世沉积中磁化作用的原始和次生成分的联合分析，亦导致一个碰撞时间为50 Ma这样一个结论（Besse等，1984）。正如Jaeger等（1989）所指出的，在那次分析中使用的地层事实上是较老的，约在60～56 Ma之间，所以，印度板块与亚洲板块碰撞的时代可能早于60 Ma。
二、古生物方法
在Nagpard的Taki组熔岩流间的沉积中发现Pelobatid蛙类（Salnil，1982）。Takli组的时代为根据倒转时带29R而得出的Maastrichtian早期。因此，漂移的印度板块与欧亚大陆之间陆生动物群之间的交流必定发生在Maastrichtian期之前。印度与亚洲之间陆生动物群的相似，加之动物群中缺乏任何特征明显的土著分子，使我们可以推测印度与亚洲之间的碰撞大约发生在K/E之交而比一般认定的时间要早。
三、地层学与沉积学方法
印度板块与亚洲板块开始碰撞的时间受喜马拉雅被动大陆边缘地层学和沉积学演化的约束。
1）利用两个大陆之间缝合带的地质演化特征来确定大陆碰撞的时间。Bulter（1995）在喜马拉雅区内两套时代资料相当贫乏的岩套中，依据①位于缝合带处的陆相沉积与②从与俯冲带有关的幔源花岗岩到源于陆壳加厚的花岗岩的区域性变化，识别出碰撞的大致时限为始新世（50 Ma）。
2）有人认为碰撞发生的表现是海水全部退出和陆相沉积的出现。Rowley（1996）通过对喜马拉雅地区最高海相层现有资料的综合分析认为：板块碰撞在喜马拉雅境内不同地区是不同时，在西侧Zanskar-Hazara地区能够将碰撞的起始时间很好地限定在Ypresian晚期（约52 Ma）；至东侧珠穆朗玛峰东北部的古近纪的地层剖面中，正常海相陆架型碳酸盐岩可延伸到Lutetian阶顶部，沉积类型没有变化的迹象，故碰撞的起始时间一定更年轻。沿印度河-雅鲁藏布江缝合线一带，源于喜马拉雅-西藏体系剥蚀作用的巨厚海相三角洲-扇杂岩提供了与穿时碰撞相一致的独立的推算：这种穿时碰撞在西部开始于大致发生在Ypresian晚期，向东逐渐推进，在东部也许穿过Lutetian期。沿缝合线北侧的地层和岩浆岩史可与这样一种穿时史对比。
3）Searle等（1987）认为：标志着特提斯闭合的两个大陆板块之间碰撞的时间可根据“印度河-雅江缝合带内，沉积由海相类型（类复理石）向陆相类型（类磨拉石）的转变”来确定。
4）Beck等（1995）指出，沿巴基斯坦西北缘，亚洲板块的南部边界的柱状增生楔和海沟地层（66 Ma之后，55 Ma之前）逆冲到印度板块的被动大陆边缘之上。基于这种关系推测，印度板块与亚洲板块之间大洋岩石圈的消失必定出现在55 Ma之前，与初始碰撞有关的较早逆冲事件的印度板块被动大陆边缘可能在55 Ma之前已经俯冲到亚洲板块之下。这意味着55 Ma是巴基斯坦西北部印度板块与亚洲板块最初碰撞的最小年龄。
5）藏南岗巴-定日地区，在露头连续的上白垩统—下古近系印度板块被动大陆边缘海相地层序列中，马斯特里赫特早—中期（约70 Ma）的沉积相和沉积模式发生急剧变化。在不整合面之上，马斯特里赫特中期地层具有从泥灰质砂岩到硅质碎屑浊积岩突然转变的特征。下古新统（65～64 Ma）直接覆盖在马斯特里赫特期地层之上，浅水碎屑岩的再沉积作用被发现。这种70～64 Ma间沿印度板块被动大陆边缘沉积模式的变化，被Willems等（1996）解释为印度板块和亚洲板块之间最初接触的指示。Shi等（1996）得到相似的结论，他将晚白垩世（约80 Ma）和古近纪早期（约59 Ma）之间碳酸盐台地的广泛中断解释为印度板块与亚洲板块碰撞的最初时限。这个岩石学的年龄和Willems等（1996）的深水数据被Rowley（1998）用于构筑遮普惹山地区100～46 Ma之间的沉降历史。Rowley（1998）的沉降曲线显示出约70 Ma构造沉降速率急速增加，其可能反映了亚洲板块的增生边缘加载在印度板块被动大陆边缘之上（尹安，2001）。
6）万晓樵等（2001）对碰撞起始时间的理解是“陆壳的完全拼接和挤压并伴随深海洋盆的消失，这时会出现磨拉石的堆积”，并认为：在西藏仲巴地区，白垩系／古近系界线位于曲贝亚组与曲下组之间。在这一界面上，古新统磨拉石直接不整合于上白垩统陆棚碳酸盐岩沉积之上，浅海相动物群在冈底斯南缘与印度北缘最初显示同一生物区系特征，表明印度与亚洲板块之间的起始碰撞发生在白垩纪／古近纪之交。
四、冈底斯岩基的最年轻年龄
虽然冈底斯岩基曾被作为印度板块与亚洲板块之间最初碰撞时间的定年途径（Dewley等，1988；Le Fort，1996），但是冈底斯岩基的年龄在约120～30 Ma之间变化（Xu等，1985；Harrison等，2000）。最年轻的年龄在45～30 Ma之间（Honegger等，1982；Schärer等，1984；Harrison等，1999），明显滞后于印度板块与亚洲板块之间最初的时间，因为与碰撞有关的Sm-Nd变质年龄在喜马拉雅地区是（49±5）Ma（Tonarini等，1993）。这些年龄的差异说明，冈底斯岩基最年轻的年龄可能对印度大陆北部的大洋岩石圈俯冲终止缺乏代表性（尹安，2001）。
笔者认为：印度板块与亚洲板块在喜马拉雅境内的碰撞，符合通行的陆—陆碰撞的模式，是一种各地不等时的斜向式的碰撞。最高海相层的含义具有浓厚的地域色彩，是指该区内海相沉积类型的终结，其上再未出现海相沉积。最高海相层只能反映残留海盆的终结，即特提斯洋在该区的最终封闭——碰撞起始年龄的下限（即最年轻的年龄），而不能作为大陆之间碰撞发生的起始时间的判别依据，因为印度板块被动大陆边缘的大部分（500～1000 km）可能已经俯冲到亚洲板块之下了（Patriat等，1984；Matte等，1997），碰撞早期记录可能已消失了（尹安，2001）。碰撞作用在某一地区发生的起始时间的标志应是该区沉积类型首次由类复理石向类磨拉石的转变，该区在碰撞发生之后完全有可能再次接受海相沉积。
西藏地区内，印度与亚洲之间的碰撞最初发生的时间可能是白垩纪／古近纪之交，作为这一事件的标志：仲巴地区古新统磨拉石直接不整合于上白垩统陆棚碳酸盐沉积之上（万晓樵等，2001）。在岗巴地区，古新统粗碎屑含砾沉积不整合于上白垩统浅海碳酸盐岩沉积之上，其间可见以薄层粘土为标志的古风化壳，代表一次重大沉积转变和构造运动。印度大陆北缘与冈底斯南缘直至白垩纪末均具有明显的生物分区现象，其间被深海盆地所阻隔。古新世开始浅海相动物群在该区显示同一生物地理区系特征，说明两大陆已完全拼合，南北生物地理区同归于一残留海盆。地层与古生物特征为印度与亚洲板块碰撞起始时间的确定提供了基础性依据。据此推测大陆早期碰撞发生在白垩纪／古近纪之交（65 Ma）。古新世中—晚期直至始新世早期残余海盆内碳酸盐台地遭受持续的挤压变形，进一步说明大陆的碰撞在古新世初就已发生。沉积地层的破碎变形和滑塌堆积是持续碰撞与挤压的结果。藏南前陆盆地的形成演化史也表明了这一点。
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取之于社会，用之于社会。白带的清洁度分4度，1为干净，最不干净是4度。具体如下： 1度--杂菌无或极少 正常 2度--杂菌少量 亦属正常 3度--杂菌较多 提示BV是指一类在细菌学上表现为生殖道正常菌群（产H202乳杆菌）数量减少，代之以一组厌氧菌群（类杆菌属族、加得纳菌、莫比伦氏菌属、人型支原体属和消化链球菌属等）数量增加的临床症状。BV阳性为“细菌性阴道病”有炎症 4度--大量杂菌 多见于严重的阴道炎 给你参考，现在没什么大问题了。你好，一般的正常情况下白带是呈乳白色、透明、无味的。常见的异常白带如下：1、无色透明粘性白带 与鸡蛋清相似，或稍有混浊，但除白带增多外，很少有其他症状，这种白带多见于慢性宫颈炎、颈管炎以及应用雌激素后。2、泡沫状白带 在公共浴池洗澡，或使用过公用的浴巾、浴盆后，出现灰白或灰**泡沫状白带，且有酸臭味，应想到是否传染上了滴虫性阴道炎。 3、豆腐渣样白带 为霉菌性阴道炎特有。外阴和阴道壁常覆盖一层白膜状物，擦出后露出红肿粘膜面，易感染霉菌，常伴有外阴瘙痒及烧灼样疼痛感。4、**白带 大多为细菌感染引起。淋球菌、结核菌等都可能成为病因，梅毒螺旋体也会引起阴道的化脓性感染。当患者从阴道排出大量有特殊味的白带时，应怀疑是否有异物存在于阴道内，从而引起白带增多，严重感染。5、水样白带 恶性肿瘤或子宫癌、输卵管癌等在早期会出现白带增多的现象。6、血性白带 即白带中混有血液。出现此白带应警惕恶性肿瘤的可能，如宫颈癌、宫体癌、阴道肿瘤等。有些良性病变也可出现此白带，如老年性阴道炎、子宫颈糜烂等。7、**粘液性白带 见于宫颈糜烂、慢性宫颈炎等，它是轻度感染引起的。8、白色粘液性白带 性状与正常相同，量增多，这种白带见于使用雌激素之后或盆腔充血时，它是宫颈腺体和阴道粘膜分泌增多引起的。建议根据情况给自己诊断，祝你健康通常阴道内分泌物呈弱酸性，可防止致病菌在阴道内繁殖。PH值表示阴道的酸碱度，正常值为45，患有滴虫性或细菌性阴道炎时白带的PH值上升，可大于5－6。● 阴道清洁度分为4级： Ⅰ－Ⅱ度属正常，Ⅲ－Ⅳ度为异常白带，意味着有阴道炎症。Ⅰ度：显微镜下见到大量阴道上皮细胞和大量阴道杆菌。Ⅱ度：镜下见有阴道上皮细胞，少量白细胞，有部分阴道杆菌，可有少许杂菌或脓细胞。Ⅲ度：镜下见有少量阴道杆菌，有大量脓细胞与杂菌。Ⅳ度：镜下未见到阴道杆菌，除少量上皮细胞外主要是脓细胞与杂菌。●霉菌与滴虫：“＋”号说明你可能感染了滴虫或霉菌。白带经过处理后在显微镜下可以根据其形态发现有无滴虫或霉菌，如存在滴虫或霉菌不论其数量多寡均用“＋”来表示，但“＋”这一符号只说明你感染了滴虫或霉菌，并不说明你感染的严重程度。定期做T C T宫颈检查：T C T是液基薄层制片定性分析诊断的一种最新、最先进的宫颈脱落细胞检查方法。是目前国内外替代传统宫颈涂片检测宫颈癌的最准确的检测技术。这种方法能发现尚未发生形态学改变的早期癌变细胞，比常规巴氏方法更客观、更准确而且没有人为误差，能做到真正的早期诊断，诊断率高达90%以上 白带多、白色或淡**，质稠、无臭味。症状1：白带多、白色或淡**，质稠、无臭味。中医诊断：脾虚带下，由饮食不节、过于疲劳、思虑过度所致。食疗秘方：白果鸡蛋。原料：白果肉4粒，鸡蛋1枚。方法：白果去皮、心，鸡蛋小头打一洞口，将白果肉塞入，用湿纸糊好洞口，煮熟鸡蛋即可食用。每日早起吃一个，连服5－10天，病程长者可服20天。症状2白带量多、色黄、黏腻、有臭味、或白带如豆渣样、有臭味、阴道瘙痒、尿频尿痛。中医诊断：湿热带下，是由经期、产后或手术后感染所致。食疗秘方：车前草炖猪小肚。原料：鲜车前草60－90克（干车前草20－30克）、猪小肚2具（约200克）。方法：将车前草、猪小肚洗净，小肚切成小块，加水、少量盐，炖半小时即可，饮汤吃猪肚。每日一次，连服数日。症状3带下呈赤白色、或如脓样、腐臭难闻、小腹疼痛、 发热不退、尿黄便秘。中医诊断：热毒带下，此病要及时到医院诊治，可配合清热解毒膳食，同时要多喝水。食疗秘方：萆银花绿豆汤。原料：萆30克、银花30克、绿豆30－60克。方法：先将萆、银花洗净煎水，取汁加绿豆共煮成粥，加适量白糖，每日一次，连服3－5日。症状4：白带清稀、量多、腰酸肢冷。中医诊断：肾虚带下，是由先天肾气不足、失血伤阴、房劳多产所致。可分为肾阳虚与肾阴虚两种。食疗秘方：肾阳虚多吃金樱子膏。原料：金樱子200克，蜂蜜200克。方法：金樱子剖开去核，洗净，水煮2次，合并煎液，浓缩至膏状，加入蜂蜜，煮沸即可。每服1015克，日2次，开水冲服。白带检查介绍：白带检查是对阴道分泌的白带进行常规的检查，包括阴道 PH 值，阴道清洁度，微生物检查，胺试验，线索细胞的检查。白带检查正常值：阴道 PH 值：正常阴道 PH 值在 4--45 之间。阴道清洁度Ⅰ～Ⅱ度属正常。微生物检查阴性胺试验阴性。线索细胞检查阴性。白带检查临床意义：异常结果：阴道 PH 值：正常阴道 PH 值在 4--45 之间，呈弱酸性，可防止致病菌在阴道内繁殖，念珠菌性阴道炎 PH 值可以在此范围，患有滴虫性或细菌性阴道炎时白带的 pH 值上升，可大于 5 ～ 6 。阴道清洁度：一般分为四度，一般Ⅰ、Ⅱ度为正常的，Ⅲ、Ⅳ度提示有阴道炎，即分泌物上可以看到多量白细胞或杂菌。微生物检查：一般会有真菌、滴虫、淋病奈涩菌等项，如果有，则在结果上表示是“+”。胺试验：患细菌性阴道病的白带可发出鱼腥味，它是由存在于白带中的胺通过氢氧化钾碱化后挥发出来所致。线索细胞：线索细胞是细菌性阴道病的最敏感最特异的体征，临床医生根据胺试验阳性及有线索细胞即可做出细菌性阴道病的诊断。需要检查的人群：有无色浆糊样白带，豆渣样白带，泡沫样的白带，脓性白带，水样白带的妇女。 白带是阴道粘膜渗出物、宫颈管及子宫内膜腺体分泌物等混合组成，其形成与雌激素的作用有关。一般的白带化验单怎么看呢，通常我们分为5个检测项目。1、pH值：正常pH值为45左右。阴道内呈弱酸性，这是阴道的自净作用，可以防止致病菌繁殖。如果患有滴虫性或细菌性阴道炎时，pH值上升，可大于5～6。2、阴道清洁度：分为四度，Ⅰ～Ⅱ度属正常，Ⅲ～Ⅳ度为异常白带，表示阴道有炎症。3 、霉菌与滴虫：白带经过处理后在显微镜下可以发现有无滴虫或霉菌，如存在滴虫或霉菌均用“＋”来表示。这一符号只说明你已经感染了滴虫或霉菌，并不说明感染的严重程度。4、胺试验：检查细菌性阴道病的方法。通过对白带中的胺试验反应阳性，可以做出诊断。5、线索细胞：检查细菌性阴道病的方法。很多细菌凝聚在阴道上皮细胞周围，使它边缘模糊不清，这就是线索细胞，是细菌性阴道病最敏感最特异的体征最好给我图解看看
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