NGS007 华大MGI测序

NGS006 illumina测序

华大智造基因测序仪采用先进的DNBSEQTM测序核心技术，主要包括:DNA单链环化，DNB制备，规则阵列芯片（Patterned Array），DNB加载，cPAS（combinatorial Probe Anchor Synthesis联合探针锚定聚合测序法）,双端测序技术，CoolMPS，以及配合的流体和光学检测技术和碱基识别算法等。

以单链环状DNA为模板，在DNA聚合酶作用下进行滚环扩增（Rolling circle amplification, RCA），将单链环状DNA扩增到约500拷贝扩增产物称为DNB。基于RCA的线性扩增技术，每次扩增都是以原始的DNA单链环为模板，使用保真性极高的聚合酶（phi29 DNA polymerase），使得在DNB的所有拷贝的同一个位置上出同样的错的几率几乎是零。RCA扩增技术有效的避免了PCR扩增错误指数积累的问题，从而大大提高测序的准确性

将带有接头序列的双链DNA（double-stranded DNA，dsDNA），通过高温变性形成单链DNA （single-stranded DNA，ssDNA），环化引物与ssDNA的两端互补配对，在连接酶的催化下，ssDNA的首尾相连接，形成单链环状DNA。

通过RCA扩增，可以将1copies原始ssCirDNA文库分子扩增得到约500copies

采用先进的半导体精密加工工艺，在经过修饰的硅片表面形成结合位点阵列（spot直径约200nm），实现DNA纳米球（约220-240nm）的规则排列吸附。阵列芯片修饰位点的间距均一（约700nm），每个位点只固定一个DNB，可保证不同纳米球的光信号不会互相干扰，这不仅保证了测序准确度，而且提高了测序芯片的利用效率

DNB在酸性条件下带负电，在表面活化剂的辅助下，通过正负电荷的相互作用，被加载到芯片中有正电荷修饰的活化位点（直径约200nm）的过程，称为DNB加载。DNB直径略大于芯片上活化位点的直径，避免了多个DNB结合到同一个位点的情况

DNB含有约500 DNA fragment copies，也即可以与500条Read1引物退火结合，进行一链cPAS测序。

以华大测序反应通用试剂盒为例（环化部分）

使用 Qubit® dsDNA HS Assay Kit或 Quant-iT PicoGreen® dsDNA Assay Kit等双链 DNA荧光定量，按照定量的 *** 作说明对 PCR纯化后产物进行定量。要求最终 PCR产 物的摩尔量≥1 pmol，请参照如下公式 1进行计算，例如 ：主带 300 bp的打断产物 ，PCR产物主片段大小产物主片段大小 384 bp，其产量应达到产量应达到 250 ng。如需将多个样本混合测序，建议根据 MGIEasy DNA Adapters说明书使用规则设计混合方案（参照附录 B），在定量后进行不同 Adapters样本混合，样本混合后总量为 1 pmol，总体积 ≤48 μL。

1 pmol PCR产物对应的质量（ng）=（DNA主片段大小/bp）/1000bp×660ng

通过 Bioanalyzer、Tapestation (Agilent Technologies)；LabChip® GX、GXII、GX Touch

(PerkinElmer)；Fragment AnalyzerTM (Advanced Analytical)等基于电泳分离原理的设备对 PCR 纯化后产物进行片段分布检测。

-在步骤 3.10.3 反应时，提前在冰上配制酶切消化反应液

使用 Qubit® ssDNA Assay Kit 荧光定量试剂盒，按照定量试剂盒的 *** 作说明对酶切消化纯化后产物进行定量。最终要求酶切消化产物产量（ssDNA）/ PCR 投入量（dsDNA）≥7%。例如：主带 300 bp 的打断产物，PCR 产物主片段大小为 384 bp，投入 250 ng 进行环化，其酶切消化产物产量应不少于 17.5 ng。

-初始文库 DNA 浓度≥ 2fmol/µL，文库需用 Qubit® ssDNA HS Assay Kit 和 Qubit® Fluorometer定量，根据定量的结果计算投入量。

-注：投入体积 V（μL）=N×330 g/mol×40 fmol/(1000×1000×C)

-N 表示核苷酸数目（文库总片段长度），C 表文库浓度ng/μL

Illumina公司的Solexa测序平台，目前主流的型号的HiSeq-2500，以及Hiseq-2000，数据通量在每张Flow cell 300G数据，每次最多可以上2张Flow cell，单张Flow cell运行时间大约在11天左右。读长通常是100BP，据说近期有了长度上的突破。还有一个型号是MiSeq，该机器运行通量较小，但是读长大约在150BP以上，常用于微生物检测，而且该型号获得FDA认证，可以进行临床样本的检测。Solexa的错误类型主要是颠换。

罗氏454平台，主要特点是测序长度很长，目前大于1K的测序没有什么难度了，比较适合基因组测序，用于搭建基因组框架，也常用于微生物基因组测序。该平台主要的错误类型是插入缺失。

ABI的SoLID平台，听说该平台不在维护了，故而不再描述。

Life的Ion torrent平台，目前主要有2种型号，较早的一个型号是PGM，该测序仪原理类似于454测序，与454不同的是，454是化学反应发光进行检测，而PGM是半导体测序，检测H离子，如果发生了碱基互补配对，那么高能磷酸键就会释放H离子，导致电位变化，从而根据已知加入的碱基，就可以判断待测序列是否与已知加入的碱基发生互补，从而达到测序目的，测序长度可以达到400BP，主要用于微生物的检测，错误类型也是插入缺失错误。最新的型号是IonProton，该机器与PGM测序原理一致，但是测序通量由PGM的1G数据上升至10G数据，测序精度也较PGM有大幅度提升，测序时间大约是1天。

PacBio的单分子三代测序，该测序仪最大的特点就是测序长度比454更长，更加有利于基因组的拼接工作，有些较小的微生物可以直接将基因组测通成环状。

中国的激光武器排名全球第一名，中国激光武器领先世界十年以上。 激光制盲卫星(美军多颗间谍卫星在去年拍射我基地时被制盲半小时左右)，击穿战机导d等武器，并且天上还有反射激光的卫星(使激光变向)，激光发射器已按装在军用卡车上便于机动和提高二次打击能力(该车已装备)十大激光器排名如下：1、得力。得力集团有限公司，于1988年开始成立。主要是以文具用品知名品牌，在浙江省著名商标。是浙江省名牌，高新技术企业，国内较大的综合文具供应商。集生产与销售为—体的大型文具企业集团。2、深达威。深达威品牌隶属于东莞市森威电子有限公司，于2010年创立。多年来一直从事手持式激光测距仪、环境测量仪器，无损检测仪器的研发、生产、销售和服务工作。深达威公司自主品牌“深达威”系列手持激光测距仪是中国市场最受欢迎的激光测距仪，并且深达威品牌的营销网络遍及全国五金工具，仪器仪表，测绘，家装建材等各行业。3、博世。博世公司主要是以汽车配件、制动液知名品牌、机油滤清器知名品牌。于1886年在德国创立，是世界著名品牌。其行业影响力品牌，全球领先的电动工具及附件生产商，世界500强企业旗下品牌。4、优利德。优利德集团有限公司，远红外测温仪知名品牌，于1988年在香港创立。是广东省名牌产品，中国测试仪表市场著名品牌，测试仪表市场领先品牌，亚洲最具规模的仪器仪表公司之—。5、铂典。铂典是广州永和电子有限公司于2013年8月20日成立。主要是以开发、生产、运营、销售、配送“铂典”自主品牌的数码产品的电子商务公司。铂典公司始终坚持“品质、创新、服务、敬业、感恩”的理念。其企业内部也传承着“家”文化和“狼”文化的工作作风，永和团队年轻而富有朝气，是年轻的电商运营团队之—。 　6、霍尼韦尔。全球财富是全球100强企业，是世界最大及最富经验的电子保安系列产品制造商之—。主要数以航空产品和服务、楼宇、家庭和工业控制技术、汽车产品、涡轮增压器、以及特殊材料。其中还包括视频监控系统、门禁控制系统、防盗报警系统、住宅行业产品等。7、迈测。深圳市迈测科技有限公司于2005年成立。其中在高端的激光测距仪领域，已经发展成为集研发、制造、销售为—体的高科技企业。同时还建立了一支高效专业且具开拓精神的研发团队，得到深圳市、南山区、宝安区等各级政府的重点扶持。8、影巨人。上海伴日数码科技发展有限公司，主要是专注于影音类时尚数码领域的著名品牌，艺术相框概念的倡导者和推动者，集研发、生产、销售为—体的高科技企业。9、诺为。上海诺为电子科技有限公司是业界第—个推出智能断电功能产品的企业。同时也是业界第一个推出绿光激光无线演示器的企业。并且还通过了美国FCC、欧盟CE和RoHS环保材料认证，无线演示器在国内处于领跑者地位。10、彩艺。彩艺品牌于

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