wb条带周边发黑中间白

wb条带周边发黑中间白的原因是过高的蛋白上样量或一抗和二抗浓度过高都会促使底物过快的消耗，导致我们在做化学发光检测时，发光底物已经消耗殆尽而形成空斑。

要解决条带中出现整条白色空斑，需要减少蛋白上样量、稀释一抗和二抗的浓度。

如果条带中出现白圈的话，是转膜时候，膜与胶之间有气泡，需要在制作“三明治”时，注意赶走气泡。通常将电转液倒入一个盘子里，液体高度与第一层滤纸齐平，然后往滤纸上浇一些转膜液，把电泳胶用清水清洗后平铺在滤纸上，随后在确认滤纸与胶之间无气泡后，再往胶上浇一些电转液，之后用双手的拇指和食指轻轻夹住PVDF膜两侧中间，使膜成U型，再将U型底部接触到胶的中间，慢慢往两边放下膜，这样可以减少气泡。上层滤纸同样用U型的放置方法，可以用玻璃棒贴实一下，然后盖上海绵垫。

出现两条带是非常正常的现象。抗体的原因：不同厂家的抗体特异性会出现不同的差异，大部分都能检测到目的条带，但是有时能检测到非特异性的条带；蛋白亚型表达的原因：我做了大概两年半的WB，经常会发现，一种蛋白有时检测压型很明显，有时不是很明显。参考了很多文献的结果，均有此种情况出现，即使是大家都觉得很确定的蛋白很多时候也会出现不同的亚型。毕竟对很多蛋白我们的认识有限。这种情况不要怕的，尽管按照真实结果去处理，千万不要为了让结果好看或者符合大家的意思而去做修改。3.实验技术的原因：曝光的时候会有底片轻微移动的现象，出现很接近的两条。4.目的蛋白部分降解，也可能会出现相近的两条带。如何去掉杂带？我觉得你先找找你的目的蛋白的分子量，这样就能分辨出那个条带是你像要的。尽量减少蛋白的降解在样品的处理过程中。杂带：若是多克隆抗体或是抗体浓度过高就可能有杂带。但是目的条带也会在其中，除非你的样品中靶蛋白表达过低才会出现没有目的条带的情况，封闭时间不够也可能出现杂带总之，只要目的条带有出现，或者在附近都是没有问题的。此外，还可以再做mRNA进一步验证。祝您实验顺利。

蛋白丰度值对wb检测的影响主要体现在上样量上

上样量一般根据目的蛋白的丰度会有一个大致的范围，如果上样量太少，wb可能检测不出目的蛋白。上样量也不能太大，会造成样品的浪费，影响效果甚至会超过泳道的负荷。

所以蛋白丰度值对wb检测的影响主要体现在上样量的区别上

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