2019-01-11

多肽物质分离与分析方法研究进展

浏览次数： 47  日期： 2017-05-24 15:17:02

多肽类化合物广泛存在于自然界中，其中对具有一定生物学活性的多肽的研究，一直是药物开发的一个主要方向。生物体内已知的活性多肽主要是从内分泌腺组织器官、分泌细胞和体液中产生或获得的，生命活动中的细胞分化、神经激素递质调节、肿瘤病变、免疫调节等均与活性多肽密切相关。随着现代科技的飞速发展，从天然产物中获得肽类物质的手段也不断得到提高。一些新方法、新思路的应用，不断有新的肽类物质被发现应用于防病治病之中。本文介绍了近几年肽类物质分离、分析的主要方法研究进展。

分离方法

采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括：盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化，同时上述这些方法也是蛋白、多肽类物质分析中常用的手段，如层析、电泳等。

1、 高效液相色谱（HPLC）

HPLC的出现为肽类物质的分离提供了有利的方法手段，因为蛋白质、多肽的HPLC应用与其他化合物相比，在适宜的色谱条件下不仅可以在短时间内完成分离目的，更重要的是HPLC能在制备规模上生产具有生物活性的多肽。因此在寻找多肽类物质分离制备的最佳条件上，不少学者做了大量的工作。如何保持多肽活性、如何选择固定相材料、洗脱液种类、如何分析测定都是目前研究的内容。

1)  反相高效液相色谱（RP-HPLC）

结果与保留值之间的关系：利用RP-HPLC分离多肽首先得确定不同结构的多肽在柱上的保留情况。为了获得一系列的保留系数，Wilce等利用多线性回归方法对2106种肽的保留性质与结构进行分析，得出了不同氨基酸组成对保留系数影响的关系，其中极性氨基酸残基在2～20氨基酸组成的肽中，可减少在柱上的保留时间；在10～60氨基酸组成的肽中，非极性氨基酸较多也可减少在柱上的保留时间。而含5～25个氨基酸的小肽中，非极性氨基酸增加可延长在柱上的保留时间。同时有不少文献报道了肽链长度、氨基酸组成、温度等条件对保留情况的影响，并利用计算机处理分析得到每种多肽的分离提取的最佳条件。

肽图分析(Peptide Mapping):肽图分析是根据蛋白质、多肽的分子量大小以及氨基酸组成特点，使用专一性较强的蛋白水解酶［一般为肽链内切酶（endopeptidase)］作用于特殊的肽链位点将多肽裂解成小片断，通过一定的分离检测手段形成特征性指纹图谱。肽图分析对多肽结构研究和特性鉴别具有重要意义。利用胰蛋白酶能特意性作用于Arg和Lys羧基端的肽链的性质，通过RP-HPLC法采用C18柱检测了重组人生长激素（rhGH）的肽片断，成功获得了人生长激素特征性胰肽图谱。同时胰岛素的肽图经V8酶专一裂解也制得，并可鉴别仅相差一个氨基酸残疾的不同种属来源的胰岛素。人类肿瘤坏死因子的单克隆抗体结构也应用酶解法及在线分析技术确定了肽图，便于鉴定分析。此项技术已经在新药开发中得到广泛应用。

2)  疏水作用色谱(Hydrophobic interaction chromatography，HIC)

HIC是利用多肽中含有疏水基团，可与固定相之间产生疏水作用而达到分离分析的目的，其比RP-HPLC具有较少使多肽变性的特点。利用HIC分离生产激素（GH）产品的结构与活性比RP-HPLC分离的要稳定，活性较稳定。Geng等利用HIC柱的低变性特点，将大肠杆菌表达出的经盐酸胍乙啶变性得到人重组干扰素-γ，通过HIC柱纯化、折叠出高生物活性的产品。不同人尿表皮生长因子（EGF）也利用HIC纯化到了，均具有良好的生物活性。HIC可将未经离子交换柱的样品纯化。而RP-HPLC则不能达到这一要求。

3)  分子排阻色谱(Size-Exclusion chromatography，SEC)

SEC是利用多肽分子大小、形状差异来分离纯化多肽物质，特别对一些较大的聚集态的分子更为方便。如人重组生长激素（hGH)的分离，不同结构、构型的GH在SEC柱上的分离行为完全不同，从而可分离不同构型或在氨基酸序列上有微小差异的变异体。利用SEC研究修饰化的PEG的分离方法，此PEG具有半衰期长、作用强的特点。一些分子量较大的肽或蛋白均可利用此法分离分析。

4)  离子交换色谱(Iron-Exchange chromatography，IEXC)

IEXC可在中性条件下，利用多肽的带电性不同分离纯化具有生物活性的多肽。其可分为阳离子柱与阴离子柱两大类，还有一些新型树脂，如大孔型树脂、均孔型树脂、离子交换纤维素、葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶树脂等。在多肽类物质的分离分析研究中，对多肽的性质、洗脱剂、洗脱条件的研究较多，不同的多肽分离条件有所不同，特别是洗脱剂的离子强度、盐浓度等对纯化影响较大。Wu等报道利用离子交换柱层析法，探讨分离牛碳酸酐酶异构体和牛血清白蛋白、鸡血清白蛋白酶的提取条件，获得了有价值的数据供今后此类物质分离研究。

5)  膜蛋白色谱(Chromatography of Membrane Protein，CMP)

CMP+分离强疏水性蛋白、多肽混合物的层析系统，一般有去垢剂（如，SDS）溶解膜蛋白后形成SDS-融膜蛋白，并由羟基磷灰石为固定相的柱子分离纯化。羟基磷灰石柱具有阴离子磷酸基团（P-端），又具有阳离子钙（C-端），与固定相结合主要决定于膜蛋白的大小、SDS结合量有关。利用原子散射法研究cAMP的分离机制发现，样品与SDS结合后在离子交换柱上存在SDS分子、带电荷氨基酸与固定相中带电离子间的交换，从而达到分级分离的目的。

6)  高效置换色谱(High-Performance Displacement Chromatography，HPDC)

HPDC是利用小分子的高效置换剂来交换色谱柱上的样品，从而达到分离目的。它具有分离组分含量较少成分的特性。利用HPDC鉴定分离了低于总量1％组分的活性人重组生长激素(rHG)。在研究非毒性交换剂时Jayarama发现硫酸化葡聚糖(Detran Sulfate，DS)是对β-乳球蛋白A和B的良好置换剂，一般DS的相对分子质量为1×104和4×104最宜。研究表明置换剂的相对分子质量越低，越易于与固定相结合，因此在分离相对分子质量小的多肽时，需要更小的置换剂才能将其置换纯化出来。

7)  灌注层析(Perfusion Chromatography，PC)

PC是一种基于分子筛原理与高速流动的流动相的层析分离方法，固定相孔径大小及流动相速度直接影响分离效果。试验证明其在生产、制备过程中具有低投入、高产出的特性。目前市场上可供应的PC固定相种类较多，适合于不同分子量的多肽分离使用。

2、 亲和层析(Affinity Chromatography，AC)

AC是利用连接在固定相基质上的配基与可以和其特异性产生作用的配体之间的特异亲合性而分离物质的层析方法。自1968年Cuatrecasas提出亲和层析概念以来，在寻找特异亲和作用物质上发现了许多组合，如，抗原-抗体、酶-催化底物、凝集素-多糖、寡核苷酸与其互补链等。对多肽类物质分离目前主要应用其单抗或生物模拟配基与其亲和，这些配基有天然的，也有根据其结构人工合成的。Patel等人利用一系列亲合柱分离纯化到了组织血浆纤维蛋白酶原激活剂蛋白多肽。

固定金属亲和层析(Immobilized Metal Affinity Chromatography，IMAC)是近年来发展起来的一种亲和方法。其固定相基质上鳌合了一些金属离子，如，Cu2+、Ni2+、Fe3+等，此柱可通过配为键鳌合侧链含有Lys、Met、Asp、Arg、Tyr、Glu和His的多肽，特别是肽序列中含有His-X-X-X-His的结构最易结合到金属离子亲和柱上，纯化效果较好。其中胰岛素样生长因子(Insulin-Like Growth Factor,IGF)、二氢叶酸还原酶融合蛋白等均用此方法分离到纯度较高的产品。

Chaiken等人报道了另一种亲和层析方法，利用反义多肽作为配基，这种多肽是由反义DNA表达产生，其与正链DNA表达产生的肽或蛋白具有一定的亲和性，如，Arg加压素受体复合物，已用此法分离得到。DNA与蛋白、多肽复合物之间的作用也是生物亲和中常用的方法。将人工合成的寡核苷酸结合在固定相基质上，将样品蛋白或多肽从柱中流过，与之结合可达到分离特定结构多肽的目的。

3、 毛细管电泳(Capillary electrophoresis，CE)――分离分析方法：

CE是在传统的电泳技术基础上于本世纪60年代末由Hjerten发明的，其利用小的毛细管代替传统的大电泳槽，使电泳效率提高了几十倍。此技术从80年代以来发展迅速，是生物化学分析工作者与生化学家分离、定性多肽与蛋白类物质的有利工具。CE根据应用原理不同可分为以下几种；毛细管区带电泳(Capillary Zone electrophoresis，CZE)、毛细管等电聚焦电泳(Capillary Isoeletric Focusing，CIEF)、毛细管凝胶电泳(Capillary Gel Electrophoresis，CGE)和胶束电动毛细管层析（Micellar Electrokinetic Electrophoresis Chromatography，MECC)等。

1)  毛细管区带电泳(Capillary Zone electrophoresis，CZE)

CZE分离多肽类物质主要是依据不同组分中的化合物所带电荷不同，且分离效果只由带电性决定，比传统凝胶电泳更准确。目前存在于CZE分离分析多肽物质的主要问题是天然蛋白或肽易与毛吸管硅胶柱上的硅醇发生反应，影响峰形与电泳时间，针对这些问题不少学者做了大量实验进行改进，如，调节电泳液的pH值，使与硅醇反应的极性基团减少；改进毛细管柱材料的组成，针对多肽性质的不同采取不同的CZE柱来分离。Issaq等利用CZE方法研究分离5个含9个氨基酸残基的小肽，确定了小肽分析的基本条件，即在低pH条件下，缓冲液中含有一定浓度的金属离子，如，Zn2＋等，此时分离速度快而且准确。

2)  毛细管等电聚焦电泳(Capillary Isoeletric Focusing，CIEF)

由于不同的蛋白、多肽的等电点（PI）不同，因此在具有不同pH梯度的电泳槽中，其可在等电点pH条件下聚集沉淀下来，而与其他肽分离开来。CIEF在分离、分析混合多肽物质中应用不多，主要应用与不同来源的多肽异构体之间的分离，如对rHG不同异构体分离。由于在CIEF柱表面覆盖物的不稳定性限制了此法的广泛应用。

3)  毛细管凝胶电泳(Capillary Gel Electrophoresis，CGE)

CGE是基于分子筛原理，经十二烷基磺酸钠（SDS）处理的蛋白或多肽在电泳过程中主要靠分子形状、分子量不同而分离。目前，又有一种非交联、线性、疏水多聚凝胶柱被用于多肽类物质的分离分析，此电泳法适于含疏水侧链较多的肽分离。这种凝胶易于灌注，使用寿命长，性质较为稳定。

4)  胶束电动毛细管层析(Micellar Electrokinetic Electrophoresis Chromatography，MECC)

MECC的原理是在电泳液中加入表面活性剂，如，SDS，使一些中性分子带相同电荷分子得以分离。特别对一些小分子肽，阴离子、阳离子表面活性剂的应用都可使之形成带有一定电荷的胶束，从而得到很好的分离效果。有文献报道在电解液中加入环糊精等物质，可使含疏水结构组分的多肽选择性与环糊精的环孔作用，从而利用疏水作用使多肽得到分离。

4、 多肽及蛋白质分离工程的系统应用

以上提到的分离多肽的技术在实际应用过程中多相互结合，根据分离多肽性质的不同，采用不同的分离手段。特别是在后基因组时代，对于蛋白质组深入的研究，人们对于分离多肽及蛋白质的手段不断改进，综合利用了蛋白质和多肽的各种性质，采用包括前面提到的常规蛋白多肽提取方法，同时利用了高效液相色谱，毛细管电泳，2-D电泳等手段分离得到细胞或组织中尽可能多的蛋白多肽。在蛋白质组学研究中系统应用蛋白和多肽分离鉴定的技术是实现蛋白质组计划的关键。其中电泳技术在此项研究中即是分离手段也是分析方法之一。特别是以下提到的质谱技术的发展，大大的提高了蛋白多肽类物质的分析鉴定的效率。

分析方法

1、 质谱分析(Mass Spectrometry，MS)

MS在蛋白、多肽分析中已经得到了广泛应用，特别是在分离纯化后的在线分析中，MS的高灵敏性、快速性特别适合多肽物质分析鉴定。其中连续流快原子轰击质谱(Continuous-Flow Fast Atom Bombardment，cf-FAB)和电雾离子化质谱(Electrospray Ionization，EIS)是近几年发展起来的新方法。

1)  连续流快原子轰击质谱（Continuous-Flow Fast Atom Bombardment，cf-FAB）

cf-FAB是一种弱离子化技术，可将肽类或小分子量蛋白离子化成MH＋或（M-H）形式。主要应用于肽类的分离检测，其具有中等分辨率，精确度大于±02amu，流速一般在05-15μl•mL-1。在测定使流动相需加05％～10％基质，如，甘油和高有机溶剂成分，使样品在检测探针处达到敏感化。cf-FAB常与HPLC、CEZ等方法结合使用达分离、分析目的，许多多肽的cf-FAB分析方法已经建立，并得到很好的应用，如，Hideaki等利用此法研究L-Pro、L-Ala的四肽化合物系列。证明L-Pro在保持小肽构相稳定性，连接分子方面具有重要意义。

2)  电雾离子化质谱(Electrospray Ionization，EIS)

EIS可产生多价离子化的蛋白或多肽，允许相对分子质量达1×105的蛋白进行分析，分辨率在1500～2000amu,精确度在001％左右。EIS更适合相对分子质量大的蛋白质的在线分析，且需要气化或有机溶剂使样品敏感化。利用EIS与HPLC联合分离分析GH和血红蛋白均获成功，其也可与CEZ联合应用。

3)  基质辅助激光解析／离子化——飞行时间质谱(Matrix-associated laser  dissociation/ionization time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF MS)

MALDI-TOF是目前蛋白质鉴定中精确测定相对分子质量的手段，特别适合对混合蛋白多肽类物质的相对分子质量的测定，灵敏度和分辨率均较高。它是目前蛋白质组学研究的必备工具。同时结合液相色谱的联用技术可以高效率的鉴定多肽物质。特别是当各种原理的质谱技术串联应用时，不但可以得到多肽的相对分子质量信息，还可以测定它的序列结构，此项技术将在未来蛋白质组学研究中起到决定性作用。

2、 核磁共振(Nuclear Magnetic Resonance，NMR)

NMR因图谱信号的纯数字化、过度的重叠范围过宽（由于相对分子质量太大）和信号弱等原因，在蛋白、多肽物质的分析中应用一直不多。随着二维、三维以及四维NMR的应用，分子生物学、计算机处理技术的发展，使NMR逐渐成为此类物质分析的主要方法之一。NMR可用于确定氨基酸序列、定量混合物中的各组分组成含量等分析中。但要应用于蛋白质分析中仍有许多问题需要解决，例如，如何使分子量大的蛋白质有特定的形状而便于定量与定性分析，如何减少数据处理的时间问题等。这些问题多有不少学者在进行研究。虽然在蛋白质分析中应用较少，NMR在分析分子中含少于30个氨基酸的小肽时是非常有用的，可以克服上述蛋白质分析中的缺点而达到快速准确分析的目的。

3、 其他

除上述方法之外，氨基酸组成分析、氨基酸序列分析、场解析质谱、IR、UV光谱、CD、圆而色谱、生物鉴定法、放射性同位素标记法及免疫学方法等都已应用于多肽类物质的结果鉴定、分析检测之中。

以上简要的介绍了近几年多肽类物质分离、分析的常用方法及最新研究方向。随着科学技术水平的不断发展，会有许多更新的分离分析手段不断涌现，因此这一领域的研究具有广阔的前景

SDI摄像机理论上是没有压缩的，图像清晰，不延时，不掉包，后端存储比较比网络摄像机还要大。传输距离不能太远，整体项目造价可能会比网络的贵。同时以往模拟监控的改造工程中SDI更具优势。相对远距离传输，对画质要求相对不高的领域IP摄像机更有优势。

网络摄像机主要是可以做远程，但是对网络要求高，相比而言，网络摄像机的布线可能简单点。局域网内比SDI应该有优势点吧。

SDI产品处理的数字信号经过同轴线缆传输，产品的视频接口为BNC口，使用的传输线材就是工程中经常见到的国标“75-5”视频线，由于大多数用户的习惯，很多工程商包括甲方习惯将HD-SDI数字高清叫成“模拟高清”，施工人员和系统 *** 作人员无需培训，更容易上手。SDI摄像机不像IP监控是将视频信号经过压缩和打包后通过网络传输的，它是以未经压缩的数字信号在同轴电缆上高速传输，原始图像不会失真。SDI摄像机监控不受传输网络影响，不会有IP网络监控产生的图像延迟问题，在有实时监控和高清要求的场合。SDI摄像机设备视频输出图像的分辨率为1920×1080，单位面积摄像机布点密度大幅下降。在监控场所提供更多细节上的处理，如看清人脸，看清车牌。而网络IP摄像机需要一定的网络常识，相比之下更便于管理和控制，他需要通过芯片将成像的视频信号转换为网络数据信号，因此同像素的摄像机网络的比SDI的价格高，要达到与SDI同样视频效果的需要解决信号转换芯片的运算速度和网络带宽问题。

以河南用户为例，机顶盒账号和密码通常粘贴于机顶盒右上角、或在业务受理单上显示。 一般账号都是手机号后边加01，密码是10086或手机号后六位，也可以到营业厅持身份z重置机顶盒密码，具体情况可以拨打当地10086进行咨询。

美国HIC前20位的大学如下：

1、University of California at Berkeley

United States, California, BerkeleyInformation Managment and Systems info@simsberkeleyeduMajor areas of study include information organization and retrieval, human-computer interaction and usability, design and implementation of information systems, and information policy and management

2、University of California, Irvine

United States, California, IrvineInformatics at UC Irvine Gillian R HayesInformatics is the primary program for undergraduate and graduate education and research in Human-Computer Interaction at UC Irvine

3、University of California, San Diego

United States, California, La JollaDepartment of Cognitive Science Jim Hollan

4、Stanford University

United States, California, StanfordHuman-Computer Interaction Design Terry Winograd

5、University of Colorado

United States, Colorado, Boulder University of Colorado, Boulder Kenneth M Anderson

6、Nova Southeastern University, School of Computer and Information Sciences

United States, Florida, Fort Lauderdale Information Systems; Computer Science; Computing Technology in Education Laurie Dringus

7、Georgia Institute of Technology

United States, Georgia, Atlanta Georgia Tech MS-HCI Jim Foley foley@ccgatecheduGeorgia Institute of Technology's Master's degree in Human-Computer Interaction

8、Georgia Institute of Technology

United States, Georgia, Atlanta School of Interactive Computing Gregory Abowd

9、Georgia Institute of Technology : School of Literature, Communication and Culture

United States, Georgia, Atlanta Human Computer Interaction MS Janet Murray

10、Columbia College Chicago

United States, Illinois, Chicago Columbia College Chicago - Interactive Multimedia Wade Roberts jbutler@interactivecolumeduInnovative interdisciplinary curriculum leading to a BA, focusing on interactive content and interactive interfaces, with an emphasis on teamwork and collaboration Concentrations include Graphic Design, Animation, Programming, Video, Sound Technology/Design, Management, Photography, Writing, Marketing/Market Research, and Interactive Product Design

11、DePaul University, College of Computing and Digital Media (CDM)

United States, Illinois, Chicago DePaul UniversityBachelor of Science in Human-Computer Interaction; Masters of Science in Human-Computer Interaction

12、Northwestern University

United States, Illinois, Evanston Northwestern's PhD Program in Technology & Social Behavior Darren Gergle dgergle@northwesterneduThe TSB program has a focus on social and collaborative technologies

13、Indiana University

United States, Indiana, Bloomington Masters of Science in HCI Jeffrey Bardzell msiegel@indianaeduMasters degree in HCI offered through the School of Informatics at IU

14、Indiana University School of Informatics, IUPUI

United States, Indiana, Indianapolis New Media - Hypermedia/Multimedia Usability Anthony Faiola afaiola@iupuiedu

15、Purdue University, Psychology

United States, Indiana, West Lafayette Human Factors (PhD, MS) Gavriel Salvendy salvendy@ecnpurdueedu

16、Iowa State University

United States, Iowa, Ames Human Computer Interaction Graduate Program James Oliver oliver@iastateeduThe study of the relationship between humans and computers has quickly become one of the most dynamic and significant fields of technical investigation Iowa State University's graduate program in Human Computer Interaction (HCI) is an established leader in this rapidly changing field, making strategic investments to accelerate research, attract talented students and faculty, and expand the program of study

17、UMBC

United States, Maryland, BaltimoreMS/PhD in HCC @ UMBC Andrew Sears asears@umbceduUMBC offers both an MS and a PhD in Human-Centered Computing

18、UMBC: Information Systems Department

United States, Maryland, BaltimoreUMBC Information Systems Andrew Sears asears@umbcedu

19、Maryland at College Park, University of

United States, Maryland, College ParkHuman-Computer Interaction (HCIL) Allison Druin hcil-info@csumdedu

20、MIT Media Lab

United States, Massachusetts, CambridgeMedia Arts and Sciences

1）HCI类硕士项目非常少，博士项目更是稀少

计算机系、信息学院等个别专业有博士项目，有教授带学生做相关方向的科研。也就是说，学位不叫PhD in HCI，而是作为博士生的毕业论文方向。只有极个别学校，比如CMU、Gatech，有专门的HCI博士，因为太珍稀，录取难度是非常大的。

通常大家说的到美国读HCI专业，都是自费读硕士。那什么样的学校有专门的HCI学位？

首先，排名很低的学校，没有这个专业，因为HCI需要多个领域的知识，设计、心理学、计算机等各个方向，都得有教授上课才可以，很多学校没有这样全面的师资力量，或者尽管有这些专业，但是教授们的科研兴趣没法交叉在一起。

其次，好学校里有HCI方向的，依然很少。Stanford和MIT Media Lab是大牛，其他的学校，主要就是CMU、GaTech、UW、U Mich、IUB、UMD等比较有名了。而且有些学校并没有专门的HCI学位，比如Stanford、Cornell，只是作为CS or IS专业的一个方向（track）开设而已，这样的项目，申请难度自然要按照所在院系来，比如申请stanford CS系的硕士录取，背景如果不是极其彪悍，那就是去给牛人做陪衬的。 另外，不同学校的课程设置侧重点不同，差别很大。

Warald者在这里不打算列举开设HCI专业或者方向的学校，感兴趣的话，得自己去查，一亩三分地里有很多信息。

总的来说，HCI申请，无论背景强弱，大家都不得不申请数目很少的那批学校，就算想降低学校档次申请，或者想去名气更大的学校，也没有别的选择。

2）HCI方向美国求职特点和就业前景

HCI类方向的职位，有以下两个特点

职位少，就业机会不多

公司比较喜欢有经验的人，尤其是设计类的职位，新人入门难，这也意味着经验越丰富就越吃香。

随着apple的成功，越来越多的公司都觉得有必要招人进来提高产品的user experience。其实User Interface Design这类工作，作为小众方向，在软件开发过程中，一直都有人做的，并不新奇。公司新招人进来，是否能人尽其才加以利用，是个问题，在有些公司里，做UX Design的人，比较边缘化。

最近几年是美国就业高峰期，IT行业一般不裁员，但是如果将来经济形势不好，做HCI的人可能会被首先裁掉。其实不光是做HCI的，在IT行业里，做front-end的职位，包括做开发的软件工程师，很多时候都会被“优先”干掉 - 当然，这里比较的是技术类工作，一般最先被裁掉的是非技术工种，比如marketing, sales。

如果有可能，找个很注重HCI的公司，或者所在部门的核心业务就是这方面的，工作会更稳定一些。

3）HCI非常看重作品集Portfolio

首先，无论是申请，还是求职，都需要作出很出色的作品集来展示自己的才能。

其次，口语表达能力、交流能力也非常关键，这类工作，并非埋头写代码，而是要跟别人讨论交流甚至察言观色来合作，如果闷葫芦，或者谈话交流有障碍，最好下大功夫提高一下。

至于学HCI是否要编程这个问题答案是yes。不需要CS那么强的编程功底，将来的工作也不是专职软件开发，但是如果彻底不会计算机编程，连网站都不会做，那作为新人，找工作的难度会陡然加大，其他方面的背景（比如艺术设计），那得相当彪悍才有机会。

4）HCI资源信息

一亩三分地里里有很多学HCI的同学来分享申请经验、介绍学校项目，也有同学在美国找到了工作，回地里分享求职经验。一句话：从申请到就业，全都有。

在地里用免米搜索“HCI"或者"UX Design"这些关键字，可以查到各种申请信息。比如spell同学读书期间，分享的UW HCDE,MSIM12fall申请录取情况和UW-Seattle 2012,2013录取情况及就业RA情况。

关于求职经验，最好的帖子是：《报个Amazon Lab126的UX Designer的offer和用户体验设计师求职的一点总结》。这个帖子对UX求职的关键因素都分析的很到位。招工求职版里，还有其他人的面经。

最后，HCI作为一个小众方向，尽管工作机会不如CS码农多，但是就业前景胜过了绝大多数理工科的专业。对这个方向有热情、激情的同学，欢迎来一亩三分地里跟大家交流申请和就业信息。

PS：如果不知道自己的成绩能申请到那些美国大学的HCI硕士，可以用留学选校系统，输入你的基本成绩情况，就可以知道能申请到什么排名的美国大学的HCI硕士了。

经常在HiC文章中看到TAD边界强度变化图，大体上可以反映TAD之间隔绝情况,绝缘系数越低，TAD之间交互越弱。

如下图：

画图的方法：

注 ： deeptools 默认binsize为 10 bp,得到的矩阵会非常很大(数据为 G 级别)，binsize需要根据自己需要进行修改，一定不要默认参数跑哦。

画图效果如图：

注 ：用bedtools overlap 函数，取bed与bedgraph交集，最终输出结果不是按顺序输出。如下图所示。

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