BED线有3个要求的字段和9个额外的字段。每条线的字段数目必须是任意单条数据的在注释上一致。可选字段的序试结合低数字的字段必须流行如果高位字段被使用。
首先是三个要求的BED字段:
1.chrom, 染色体或scafflold 的名字(eg chr3, chrY, chr2_random, scaffold0671 ).
2.chromStart 染色体和scaffold的起始位置,第一个染色体的位置是0.
3.chromEn 染色体和scaffold的结束位置,染色体的末端位置没有包含到显示信息里面。例如,首先得100个碱基的染色体定义为chromStart =0 . chromEnd=100, 碱基的数目是0-99
9 个额外的可选BED 字段是:
1. name 定义BED 的名字
2. score 0到1000的分值,如果track线在注释时属性设置为1,那么这个分值会决定现示灰度水平,数字越大,灰度越高。下面的这个表格显示Genome Browser
3. strand 定义链的''+” 或者”-”
4. thickStart 开始的位置,这个特征是画thickly(例如,在开始的编码显示基因的显示
5. thickEnd 结束的位置,这个特征是画thickly例如,在结束的编码显示基因的显示
6. itemRGB An AGB 值的形式, R, G, B (eg. 255, 0, 0), 如果track line itemRgb属性是设置为'On”, 这个RBG 值将决定数据的显示的颜色在BED 线。注意,它推荐简单的颜色方案(eight color or less )是用作这个属性避免颜色资源在基因组浏览器上过多
7. blockCount BED线在exon 的block数目
8. blockSize 用逗号分割block size, 这个item的列表对应于BlockCount
9. blockStarts- 用逗号分割的列表, 所有的blockStart位置应该被计算相关于chromStart, 这个数字的项应该对应于blockCount
将可以拼接的片段经过重叠拼接后形成contigs,若干的contigs根据另外的酶切信息或其他可以作为“路标”的标记信息而拼接,可以形成各个contig在染色体上的线性排列或是相对位置关系,这样的排列就形成了scaffold. 换言之,scaffold是众多的contig拼接结果。输入文件有:物种基因组序列文件、物种基因组注释文件、转录本比对后的BAM文件;
以斑胸草雀为例:
-基因组注释文件: GCF_003957565.2_bTaeGut1.4.pri_genomic.gtf
-基因组序列文件: GCF_003957565.2_bTaeGut1.4.pri_genomic.fna
-转录本比对文件: myBAMfile.bam
文件内容一览:
samtools view myBAMfile.bam | less -S 查看BAM文件内容
如果要查看所有转录本的比对情况基本是不现实的(一般上百G),受限于电脑性能无法加载这么大的bam文件,所以查看reads的比对情况一般通过提取出map到基因组的其中一个Scaffold的所有reads的bam文件。
示例从BAM文件提取斑胸草雀转录本比对到Scaffold NC_007897.1 的所有reads
打开IGV浏览器,首先载入基因组文件,点击Genomes选择加载本地基因组,导入GCF_003957565.2_bTaeGut1.4.pri_genomic.fna文件
然后选择File点击Load from file选择加载本地gtf文件,导入GCF_003957565.2_bTaeGut1.4.pri_genomic.gtf
加载BAM文件
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