目的基因的获取方法

1、当目的基因的序列已知时：用化学方法合成目的基因，或用聚合酶链式反应（PCR）扩增目的基因。

将含有某种生物的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存。各个受体菌分别含有这种生物不同的基因，称为基因文库。当需要某一片段时，根据目的基因的有关信息来获取目的基因。如根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA，以及基因的表达产物蛋白质等特性来获取目的基因。

2、当目的基因序列未知时：建立一个包括目的基因在内的基因文库，从基因文库中提取目的基因。

3、用PCR技术扩增技术提取。已知目的基因引物的序列，将整个DNA放入合成仪。只有引物中间的目的基因被大量扩增，即被提取出来。

（1）在基因工程中，获取目的基因主要有两大途径，即人工合成和从生物材料中分离，人工合成可通过反转录法或人工化学合成法，从生物材料中分离即通过基因文库法．

（2）由于cDNA文库中只含有叶细胞已转录（或已表达）的基因，而基因组文库中含有该植物的全部基因，故两个文库相比，cDNA文库中含有的基因数目比基因组文库中的少．

（3）基因表达载体的组成包括目的基因+启动子+终止子+标记基因，其中启动子是RNA聚合酶识别并结合的部位；若采用原核生物作为基因表达载体的受体细胞，由于细菌繁殖速度快，故最常用的原核生物是大肠杆菌等细菌．

（4）基因q法是单子叶植物中常用的一种基因转化方法，常用的携带目的基因的金属颗粒有金粉和钨粉颗粒，成本较高．

故答案为：

（1）人工合成 生物材料

（2）cDNA文库中只含有叶细胞已转录（或已表达）的基因，而基因组文库中含有该植物的全部基因

（3）RNA 大肠杆菌（或答细菌）

（4）金粉 钨粉

从基因文库中筛选某一克隆的常用办法是分子杂交。

首先把属于一个文库的细菌或噬菌体以较低密度接种在培养皿上以取得相当分散的菌落或噬菌斑，然后用硝酸纤维滤膜吸印，使培养皿和滤膜的相对应的位置上具有相同的克隆。同时另行制备供分子杂交用的探针。

为了筛选真核生物的某种基因，常从它的转录产物mRNA经反向转录（见中心法则）合成相应的互补 DNA(cDNA)，再加入用32P标记的核苷三磷酸，用DNA多聚酶I切口移位方法制成有同位素标记的探针。把探针 DNA和硝酸纤维滤膜上的菌落或噬菌体分别进行变性处理，然后进行分子杂交。

再将 X光底片覆盖在经过处理的滤膜上以进行放射自显影。在培养皿上找出和 X光底片上的黑点相对应的菌落或噬菌斑，这些菌落或噬菌体中便包含着所需要的基因。经过扩增便能得到大量的细菌或噬菌体，从中可以分离出所需基因的DNA片段。

基因文库包括基因组文库和部分基因文库。将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。

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