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有两种方法:
第一种从cDNA 文库(cDNA library )获得,如厦大韩家淮实验建立的免费cDNA 文库;
第二种从mRNA逆转录获得,在这种情况下,mRNA的cDNA,与原来的基因组DNA相同而且无内含子;相反地,对应于在原来基因中没有的而在mRNA存在的3'末端的poly A序列等的核苷序列上,与外显子序列、先导序列以及后续序列等一起反映出mRNA结构。
真核生物的mRNA或其他RNA的cDNA,在遗传工程方面广为应用。
扩展资料:
cDNA 文库(cDNA library ): 是指某生物某一发育时期所转录的mRNA 全部经反转录形成的cDNA 片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。 cDNA 文库与基因组文库的最主要的区别是,基因组文库含有而cDNA 文库不含非转录的基因组序列(重复序列等)。
与基因组文库- 一样,cDNA 文库也是指一群含重组DNA 的细菌或噬菌体克隆。每个克隆只含一种mRNA 的信息,足够数目克隆的总和包含了细胞的全部mRNA 信息。cDNA 文库便于克隆和大量扩增,可以从中筛选到所需目的基因,并用于表达。
不论是由细胞总DNA 建立的基因组文库,还是由mRNA 逆转录而成的cDNA 建立的cDNA 文库,都是混合物,还要对文库进行筛选,直到获得目的基因。
以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体(常用噬菌体或质粒载体)连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。
cDNA文库特异地反映某种组织或细胞中,在特定发育阶段表达的蛋白质的编码基因,因此cDNA文库具有组织或细胞特异性。
参考资料:
百度百科-cDNA
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