怎么判断差异表达的基因

判断差异表达的基因常用的分析方法有三类，第一类称之为倍数分析，计算每一个基因在两个条件下的 Ratio 值，若大于给定阈值，则为表达差异显著的基因;第二类方法采用统计分析中的 t 检验和方差分析，计算表达差异的置信度，来分析差异是否具有统计显著性;第三类是建模的方法，通过确定两个条件下的模型参数是否相同来判断表达差异的显著性，例如贝叶斯方法。

差异展示［5］是一种方便、快捷，能一一比较多个样品基因表达差异的技术。由于灵敏度极高，发育时期的微小不同步、微量组织细胞不一致等都能造成大量的带纹差异，从而使真正差异表达基因的鉴别非常困难。同时，污染的基因组DNA也能因随机引物的使用在PCR扩增中产生带纹，造成严重的干扰。因此，样品必须用DNA酶处理，以获得高纯度的RNA。

图1是该方法的基本程序。在逆转录酶作用下，用具有两到三个碱基尾端的锚定引物(如T11XY,X=A/C/G;Y=A/C/G/T)合成cDNA，然后用锚定引物和随机引物的组合进行PCR扩增，在序列分析胶上带纹的有无和强弱就是不同材料中基因表达差异的体现。洗脱、再扩增、克隆和测序差异带纹，就能分离出大量差异表达基因的不完整序列并可作为进一步分离基因的探针。在鉴别和分离发育分化相关基因和疾病形成相关基因等方面差异展示获得了极成功的应用。

mRNA差异显示（mRNA：differential：display，DD）PCR法全称为DD-PCR法，其用途和应用目的与构建差示文库大体一致。

mRNA差异显示技术是对组织特异性表达基因进行分离的一种快速有效的方法之一，它是将mRNA反转录与PCR技术结合发展起来的一种RNA指纹图谱技术，利用5′锚定引物oligo（dT）12MN和3′端随机引物对总mRNA进行PCR扩增，以期得到差异表达的条带，并对其差异显示的条带进行回收、克隆。

原文： >

基因的表达是dna-rna-蛋白,期间有转录水平调控、转录后调控、翻译后调控等多种调控机制影响该基因的表达

所以蛋白水平高低的原因就可能是多方面的蛋白表达多,可能是mrna多,也可能mrna变化不大,而是翻译多了；蛋白表达少,原因亦然

从2个水平检测一个基因的表达,可以更全面地了解该基因在该组织某个时期或某种条件下的变化受到什么水平的调控

所谓基因表达,就是从dna到mrna再到蛋白的一个过程,基因表达水平一般是通过该基因转录的mrna的多少来衡量的

每个基因转录产生的mrna的量,是受到时空等多种因素调控的,个体在不同的生长发育阶段,或者不同的组织水平,基因转录出mrna的量都是不一样的

例如,当某种植物长期生长在高盐的环境里,该植物体内与抗盐相关的基因的表达量就会增加,以适应这种高盐环境,是植物能够生存下来,这时植物抗盐相关的基因表达水平就相对高

检测基因表达的方法：

转录水平检测：rt-pcr，real-time pcr，northern blot

翻译水平检测：western blot

还有直接检测，如报告基因、融合荧光蛋白等。

rt-pcr是反转录pcr，是半定量方式。real-time pcr可以精确定量。 二者不同。后者为了区别于rt-pcr，一般不缩写。

各位观众老爷们大家好!我是吆五，打算从今以后不定期分享一些生物类的专业知识。

一方面供自己学习积累，另一方面也希望对大家有所帮助。

生物是很枯燥的呢

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