内参一般是RT-PCR用的,当底物是cDNA文库这种混合物时,除了扩增目的片段,往往还要扩增一个内参。内参一般选择细胞内的管家基因,表达量不会随着细胞状态而变化的,如U6,GAPDH等。由于PCR定量结果受底物影响较大,q不准或者 *** 作不当带来的很大误差,所以用目的片段的定量结果除以内参的定量结果,就能得到一个相对准确的比值,即相对定量。
marker一般是用在普通pcr之后的跑电泳过程中。marker是一系列确定大小的DNA片段,跑出一个ladder,然后你的扩增片段与ladder比较,就可以知道片段的大概长度,然后判断是不是你要的片段,还是杂带。在Western实验中,蛋白Marker可以监控蛋白质在SDS-PAGE中的迁移,监控蛋白的转膜效率,确定蛋白分子量大小。选择正确的蛋白Marker是western blot实验成功的必备条件之一。
蛋白Marker分为两种:一种是未预染的Marker,即宽分子量蛋白标准,高分子量蛋白标准及低分子量蛋白标准;另一种是预染的Marker,即单色预染和多色预染。
一、未预染蛋白Marker
未预染的蛋白Marker是最简单,也是最准确的一种,由于没有附带染料分子或者标记大小正好是蛋白原本的大小,是精确判断蛋白大小必须的。现在的Marker多数选用预混合的marker,方便不同大小蛋白的比较。
二、预染蛋白Marker
预染蛋白Marker是一些纯化较好的蛋白混合物,通过与染料共价偶联,在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。预染Marker的出现方便了我们的实验,这种蛋白分子量标准可以帮助我们在电泳时,电泳后,以及转膜后检测电泳情况和估计迁移率。值得注意的是预染蛋白Marker与染料共价偶联,所以在不同的缓冲条件下电泳时迁移特性可能会发生某些变化,可能导致一些偏差,所以不太适合精确定位蛋白。
同科生物现货供应即用型的蛋白Marker,无需煮沸可以直接上样,而且条带尖锐,颜色稳定,转膜效率高。
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