1 病毒的分离鉴定
无菌采集病料经处理后接种9－11日龄鸡胚，收取尿囊液测定血凝活性。若为阴性则应继续盲传2－3代。对具有血凝活性的尿囊液需先用新城疫(ND)抗血清做血凝抑制(HI)试验!以排除ND感染。然后用免疫扩散等方法来检测特异核心抗原，核糖蛋白(NP)或基质蛋白(MP)，再用血凝抑制试验和神经氨酸酶抑制试验鉴定A型流感病毒亚型。分离鉴定的同时进行致病力试验，确定毒力强弱。但是流感病毒“O”相毒株不凝集鸡红细胞，故近来在流感病毒鉴定中常用豚鼠或人红细胞来代替。然而，该两种细胞无细胞核，沉积慢，一般在红细胞凝集及凝集抑制测定中需60分钟才能观察结果，同时在“U”型孔板中，很难沉积成像眼泪样的点即当中常有小空[1]。
病毒的分离鉴定对禽流感的诊断比较确实,但 *** 作程序繁琐、费用多、耗时费力。
2 血清学诊断技术
21 琼脂扩散(AGP)试验
进行病毒抗原型特异性鉴定即用已知阳性血清和末知抗原进行AGP试验。
受检样品是具有血凝素活性的鸡胚尿囊液。AGP是用来检测A型流感病毒群特异性血清抗体，即抗核糖蛋白(RNP)和基质蛋白(MP)抗体，因而适用于鉴定流感病毒 。1979年Beard首次将AGP用于禽流感抗体检测[2]。
此法虽简单易行，但是敏感性较差，易出现假阳性。AGP最常用的是免疫双扩散，赵增连、陈海燕等分别开展了禽流感病毒快速定型双扩散法的研究，不仅提高了其敏感度，且快速省时，在此方法基础上建立的AGP诊断技术及其诊断试剂盒，在全国范围内得到推广应用，并取得良好的效果。
22 血凝(HA)和血凝抑制试验(HI)
一般情况下，新分离毒株要先鉴定出特异性NP或MP抗原型(用AGP)确定禽流感病毒，再做HA亚型的鉴定[3]。
现已有人采用改进HA试验方法，称为HA加敏法。该法测抗体效价比常规性高2－4倍，若抗原用乙醚裂解其敏感性比常规法高4－6倍，但观察时以30min内为好，否则易出现假阳性。另外，还应注意在HI试验时，应先除去特异性凝集反应。许多禽类血清都含有非特异性因子，能和红细胞表面受体竞争性地作用于病毒表面的血凝素而发生非特异性凝集反应。通常用受体破坏酶(RED)即霍乱菌培养液处理法或高碘酸钠法制备血清[4]。
HA、HI 特异性好，是亚型鉴定的常用方法，但其 *** 作过程繁琐费时，并且由于用已知HA亚型的抗血清不能检出新的HA亚型的禽流感病毒，所以用该方法鉴定不如琼脂扩散实验简便和快捷。
23 神经氨酸酶抑制试验(NIT)
根据A 型流感病毒的表面抗原特性,特别是血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)特性，不仅可通过HI试验对病毒进行坚定，而且可通过NI试验进行鉴定。1983 RAVanDensen介绍了NI试验的一种改进法－平板微量NI试验，此法虽不能提供常量法的定量，但却是A型流感病毒的病毒分类和抗体检测的快捷方法， 试验证明微量NI试验能对分离物做出准确鉴定而常量NI试验检测亚型混合物似更敏感[5]。
目前国家兽医实验所已将微量NI试验列为流感病毒分离物定型及筛选畜禽血清9型NA抗体的常规方法，诊断中也已广泛采用此法特别是美国在80年代火鸡发生流感病毒期间，每次流行所得的血清样本用微量NI试验所作出的A型流感病毒亚型鉴定结果已为病毒分离、疫苗接种和流行病学资料所证实。这种方法已被证明是快速的且成本较低和有可重复性。这种技术的可靠性将导致NI试验的广泛应用。
24 中和试验(NT)
病毒中和实验技术是反映机体抵抗特定病毒感染能力的最可靠方法。流感病毒中和实验技术有以下优点：（1）由于中和抗体作用于流感病毒表面血凝素蛋白（HA），使流感病毒失去感染能力，因此，流感病毒中和实验主要用于检测血清中的特异性抗血凝素蛋白抗体。（2）流感病毒中和实验既能检测病毒株的功能性变化，又能反映机体的抗病毒水平。（3）该方法主要使用感染性病毒，不需要进行病毒或病毒蛋白的纯化，因此，可以被迅速用于检测新病毒或人群免疫状态[6]。
以中和试验(NT)来鉴定或滴定流感病毒时常用鸡胚或组织培养细胞， *** 作方法与其他病毒(如NDV)的中和试验相同。病毒中和实验技术是一个相当复杂的过程，参与中和反应的因素有病毒、抗血清和宿主细胞。这些因素的变化都会影响中和实验的结果。因此，对中和实验的整个过程进行严格的质量控制。每次测定必须设立阳性和阴性血清对照，阳性和阴性细胞对照，以及对病毒使用剂量进行滴定。
NT试验是最敏感而特异的血清学方法，只有抗体与病毒颗粒上的表面抗原相对应，特别是与吸咐到宿主细胞上的病毒表面抗原相对应，才能在实验中取得满意的显示效果。 因此，某一个血清型的中和试验抗体只与同组内地其他病原表现出有限的交叉反应。病毒中和试验 *** 作繁琐耗时费料，临床上几乎不用。但作为经典方法在病毒鉴定中起着重要作用，许多新的检测方都要与之为标准进行比较[7]。
25免疫荧光技术(IFT)
免疫荧光技术就是荧光抗体技术(FAT)。 IFT早在1961年就开始用于人类流感的快速诊断。1984年滨西法尼亚州爆发禽流感时，Skeeles将IFT首次用于AIV的检测。IFT最早用于病毒的鉴定和定位病毒感染细胞中特异性抗原。主要是核内荧光:用MP抗原的荧光抗体主要出现胞质荧光，核内也有部分荧光[8]。
用于禽流感病毒的诊断常用直接荧光抗体法即在组织触片上直接染色，以荧光显微镜检查荧光 。一种AIV的荧光抗体可用来检测不同亚型的其他病毒。
IFT用于诊断具有快速、简便、敏感性好的特点，而且费用较低，其敏感度同病毒的分离鉴定相当，有时高于用鸡胚进行的病毒分离。但是需要注意的是如何避免和降低标本中出现的假阳性(非特异性荧光)问题。
对一株杂交瘤细胞分泌的流感病毒的单克隆抗体进行检测时，发现间接固相免疫荧光技术的敏感性比HI 高40－150倍。间接免疫荧光技术也可以用来检测核蛋白(NP)基质蛋的(MP)抗原与抗体的反应，其敏感性很高。但对抗原制备要求较高，需用非离子型去污剂对纯化的病毒粒子进行裂解[9]。
26 酶联免疫吸附法(ELISA)
ELISA的基本原理是：酶结合物与相应抗体或抗原特异性结合，再遇酶底物时，在酶的强烈催化下使原来无色的底物产生化学反应，即形成有色的产物，便可用肉眼或分光光度计定量检测其含量。该方法具有特异性、敏感性、快速性和简易性等优点。在流感病毒微量中和实验中，酶结合物（HRP标记的羊抗鼠IgG抗体）与存在于MDCK细胞膜上的病毒核蛋白抗原-核蛋白单克隆抗体复合物结合，HRP酶催化OPD，使无色底物形成橙化合物，再由ELISA检测仪测定吸光度值，从而获得中和抗体滴度[11]。
1974年Jenning等首先用ELISA对注射流感病毒所产生的抗体消长规律进行了检测。Lanbre认为ELISA的敏感性远高于HI补给结合反应 。Meulemans(1987)对ELISA、AGP、HI检测AIV抗体进行了比较研究。发现AGP和ELISA一样均能检测型特异性抗原(抗体)，但敏感性远低于ELISA，HI适用于亚型的检测，其敏感性不如ELISA。1993 年Shodihall用混合纤维素脂膜或硝酸纤维素膜代替微量反应板，建立了快速诊断的DAS－ELISA大大缩短了诊断时间，并可保留ELISA的特异性、敏感性，其结果又不需要特殊仪器分析、可用肉眼判定。
随着分子生物技术的发展，中国农业科学院哈尔滨兽研所的李海燕等用表达禽流感病毒核蛋白的杆状病毒感染S9昆虫细胞，以其表达产物制备抗原，建立了以杆状病毒系统表达的AIV核蛋白为抗原的禽流感间接(重组核蛋白)ELISA诊断技术(rNP－ELISA)确定了其最适工作条件，并对3138份鸡血清进行了检测。实验证明rNP－ELISA与全病毒间接ELISA(AIV－ELISA)，AGP及HI的符合率分别为999%、978%、988%，并能100%检出AGP阳性及疑似HI阳性的血清样品。 这证明了rNP－ELISA是检测A型禽流感病毒血清特异性抗体的一种特异、敏感、微量、快捷、经济的血清学诊断技术[11]。
ELISA方法的敏感性和特异性与抗原的纯度直接相关 。1984年Abraham等报道了抗原快速提纯法，所需时间比常规法缩短10倍，并且研究结果表明应用提纯抗原几乎全部排除了假阳性反应。
目前美国Kiregard Reery和Labortories有试剂盒出售。ELISA成为AI流行病学普查及早期快速诊的最有效和最实用的方法。
3 分子生物学技术
近年来，随着现代生物技术的发展，分子生物技术已被大量应用于禽流感的快速诊断。
31聚合酶链反应(PCR)及反转录---聚合酶链反应(RT—PCR)
PCR是近来发展成熟起来的一种体外基因扩增技术，能在数小时内使DNA呈指数增加。已成功地用于多种病毒的基因检测和分子流行病学调查等其检测原理为：寻找传染性因子的特异DNA序列。对待测样品进行PCR扩增， 如果检测出了相应的扩增带，则判为阳性反应；反之，无扩增带则为阴性反应。
鉴于引起致病的禽流感病毒多是H5和H9血清亚型，在PCR技术的基础上，崔尚金等(1998)建立了一种直接检测禽粪样和鸡胚尿囊液中AIV—H9亚型RNA的RT－PCR反应，并将此法与AGP和电镜技术作了比较，结果表明引物的特异性决定了产物的特异性，并且该方法灵敏度高，检测过程仅需8h左右，并且大大缩短了感染后的检出时间。
应用毛细管PCR(15min30个循环)代替常规PCR(25个小时30个循环)以进一步缩短检测时间的研究也已展开并进入更深入的领域，以期用于不同样品(组织、组织液、分泌液、粪便等)的检测，区分高致病力毒株和低致病力毒株与非致病力毒株，从而深入探讨该方法在AIV的临床早期诊断，流行病学调查及发病机制中的应用价值，为我国制定AIV的综合防制措施做出贡献[12]。
32 核酸探针技术/核酸分子杂交技术
这项技术是目前生物化学和分子生物学研究应用最广泛的技术之一，是定性和定量检测特异DNA或RNA的有力工具。
核酸探针技术的原理，在进行杂交时，用一种预先分离纯化的已知DNA或RNA序列片段去检测末知的核酸样品，对作检测用的已知DNA或RNA序列片段加以标记的片段就称为核酸探针。作为核酸探针的DNA或RNA是各种病原微生物基因的一部分。 在变性分开的待检DNA或RNA单链中加入与其有互补作用的核酸探针。探针在一定条件下就能与原来变性分开的DNA或RNA单链上的互补区段形成氢键，从而结合成杂交双链，通过洗涤，除去未杂交上的标记物，然后进行放射自显影，即可确定原待检样品有无与探针互补的DNA或RNA序列。
Bashiruddin等(1991)报道了扩增HA基因来分析致病毒株与非致病毒株的差异，证实了致病毒株与非致病毒株氨基酸的差异，显示了本方法的应用前景[13]。
33荧光PCR法
利用生物学手段，用荧光PCR方法快速检测禽流感病毒的方法已在北京通过专家鉴定，这一研究成果不仅在国内属于首次，而且在国际上也属于先进水平。它与国际标准方法鸡胚病毒分离相比，不仅无需做鸡胚病毒分离培养，而且时间也由原来最短的21d缩短为4h。
4 电镜技术
由于流感病毒为正粘病毒，属于形态特征性强的病毒,因而可用电镜技术来诊断。为提高禽流感的检出率，除样品制备技术外，取病料的部位和时间也是获得准确检验结果的关键。病料的采集部位及取材时间应根据禽流感病毒在动物体内分布特征及其感染特性而定[15]。
5 流感实验室检测中应注意的若干问题（高致病性流感病毒）
（1）禁止在同一实验室，更不应在同一接种柜中，同时处理接种未知临床标本、已知阳性标本
（2）禁止在同一实验室，同一时间处理，接种采自不同动物的标本；动物标本（如禽、猪等）必须与人的标本分别保存。
（3）接种后剩余原始标本，尤其分离出病毒的标本需暂时冻存，有条件的应置-70℃或以下保存，以便需要时可进行复查，待分离物经国家流感中心鉴定完后方可处理掉。分离阴性的标本应随时弃之。
（4）严禁实验室交叉污染：在病毒分离时严禁设阳性对照及 *** 作在人群中已消失的流感病毒。
（5）向国家流感中心送毒株时，量至少需5 ml，同时需自己保存一些，以便寄送过程发生意外时可继续补送。
（6）流感病毒在-20℃～-40℃ 时不稳定，故不宜在此温度下长期保存。
（7）鸡胚中分离出的流感病毒，应尽量别在MDCK细胞上传代。因当今国内所用的MDCK细胞属肿瘤细胞系，一旦病毒通过它传代就无法用于疫苗制备。
（8）寄送毒株时一定需附上送检表。寄送毒株需及时，尤其鉴定不出的，异常的毒株应尽快向国家流感中心寄送。寄送时用快速直送国家流感中心[16]。
总结
使用常规方法检测禽流感及其抗体仍是目前世界上普遍接受的方法。这些方法包括病毒的分离、琼脂扩散实验鉴定病毒和测定特异性的血清抗体，血细胞凝集及其抑制试验鉴定病毒或血清抗体亚型。 采用鸡胚中和试验来鉴定病毒或血清抗体亚型也是一种可以接受的方法，但相对血凝抑制试验较为麻烦。随着科学技术的发展，检测该病毒和血清的方法出现了免疫光法和ELISA法，这些方都有快捷的特点，特别是日益完善并趋向成熟的ELISA检测方法,因其简捷、敏感、特异性强等优点而越来越得到广泛的重视和应用。随着分子生物学的发展，核酸序列分析法越来越可能成为一种更准确可行的方法,特别是它能从分子生物学的发展，核酸序列分析法越来越可能成为一种更准确可行的方法，特别是它能从分子水平揭示HPAIV甚至潜在HPAIV毒株。这种方法虽然在一般实验室还不能应用,但RT－PCR技术为从基因水平检测禽流感病毒RNA提供了灵敏、特异和快捷准确的方法。正在进行的应用毛细管PCR代替常规PCR，以进一步缩短检测时间的研究和根据禽流感NP的高度保守性而建立的rNP－ELISA检测法，不仅具有与AGP、HI同样的特异性，而且具有更高的灵敏性，可在微克水平上进行检测!都是很有前途的方法。将rNP－ELISA检测技术及其成套的成品试剂组装成诊断试剂盒，也取得了很好的实验效果。
在以上各种检测方法及科学技术发展的基础上，将PCR技术与ELISA技术结合起来，建立一种新的实验室检测AIV的方法，将有较大的研究价值其实。其实验原理（以此类方法中最简单的双引物双标记法为例）如下：
PCR的一对引物中!其中一种引物用生物素标记，另一种引物用地高辛标记，酶标微孔板上用生物素的亲和素包被(生物素的亲和素与生物素特异的结合)。PCR扩增后纯化片段加入微孔板中。此时，微孔板上包被的生物素亲和素将与引物上的生物素结合而捕捉了PCR片段，再在微孔板中加入辣根过氧化物酶标记的抗地高辛抗体，该抗体将与另一引物上的地高辛结合，从而形成生物素亲和素－生物素－PCR片段地－高辛－抗地高辛－酶的复合物。加入酶的相应底物进行显色，便可判断PCR扩增的有无。由于该方法是PCR技术和ELISA技术的结合，所以它是一种两级放大系统,即PCR放大和ELISA放大。故而它的灵敏度更高，同时这种方法避免了PCR产物分析时的电极及染色过程，所以更为快捷、简便、灵敏。问题一：怎么看肝功能化验单 主要指标编辑
一、
肝功能化验单[1]
谷丙转氨酶（ALT）：0～40μ/L
二、谷草转氨酶（AST）：0～40μ/L
三、碱性磷酸酶（ALP）：30-90u/L
四、谷氨酰转移酶（GGT）：小于40单位
五、总蛋白（TP）：60-80克/L；白蛋白（A）：40-55克/L；球蛋白（G）：20-30克/L；白蛋白（A）/球蛋白（G）：15-25：1
六、总胆红素：171－171μmol/L(1－10mg/L)；间接胆红素17-137μmol/L；直接胆红素：171－7μmol/L(1－4mg/L)
七、甲胎蛋白(AFP)：
主要在胎儿肝中合成，分子量69万，在胎儿13周AFP占血浆蛋白总量的1/3。在妊娠30周达最高峰，以后逐渐下降，出生时血浆中浓度为高峰期的1%左右，约40mg/L，在周岁时接近成人水平（低于30μmg/L）[2]。
2化验说明编辑
肝功能检查是通过各种生化实验方法监测与肝脏功能代谢有关的各项指标，以反映肝脏的功能基本状况。不肝功能化验单是对肝功能化验结果的显示，医生通过对肝功能化验单的查看，可以很好的判断出一个人肝脏的情况，如果出现病变的话，医生可以根据患者的检查结果得出相应的结论。以此作为参考的依据。对于不同的医院来说，其肝功能化验单的所显示的结果的参考值可能会存在这差别，这是由不同的医院自行决定的。
在肝功能的化验单中显示了包括对转氨酶，像谷丙转氨酶、谷草转氨酶，白蛋白，球蛋白，白球比值，胆红素，胆汁酸等多项检查结果的显示。每一项检查结果显示的内容所代表的意思不尽相同，通过对肝功能化验单所显示的分析，再和参考值结果对比分析，可以判断出一个人的肝脏是否出现了问题，或者是问题的严重程度，不过很多人看不懂肝功能化验单，因此说学会看肝功能化验单[3]很重要。
3基本项目编辑
(1)反映肝实质损害的指标
主要包括丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)等，其中ALT是最常用的敏感指标，1%的肝细胞发生坏死时，血清ALT水平即可升高1倍。AST持续升高，数值超过ALT往往提示肝实质损害严重，是慢性化程度加重的标志。
(2)反映胆红素代谢及胆汁淤积的指标
主要包括总胆红素(TBil)、直间接胆红素、尿胆红素、尿胆原、血胆汁酸(TBA)、γ―谷氨酰转肽酶(γ―GT)及碱性磷酸酶(ALP)等。肝细胞变性坏死，胆红素代谢障碍或者肝内胆汁淤积时，可以出现上述指标升高。溶血性黄疸时，可以出现间接胆红素升高。
(3)反映肝脏合成功能的指标
主要包括白蛋白、前白蛋白、胆碱脂酶及凝血酶原时间和活动度等，长期白蛋白、胆碱脂酶降低，凝血酶原活动度下降，补充维生素K不能纠正时，说明正常肝细胞逐渐减少，肝细胞合成蛋白、凝血因子功能差，肝脏储备功能减退，预后不良。
(4)反映肝纤维化的指标
主要包括Ⅲ型前胶原(PⅢP)、Ⅳ型胶原(C―Ⅳ)、透明质酸(HA)、层连蛋白(LN)等，这些指标可以协助诊断肝纤维化和早期肝硬化。
(5)肝脏凝血功能的检测指标
肝脏能合成Ⅲ及因子a链以外的全部凝血因子，在维持正常凝血机能中起重要作用。肝病患者的凝血因子合成均减少，临床可出现牙龈、鼻黏膜出血，皮肤淤斑，严重者可出现消化道出血。一般，最早出现、减少最多的因子Ⅶ，其次是因子Ⅱ和Ⅹ，最后出现，减少最少的是因子Ⅴ。
A、凝血酶原时间（PT）
正常值为11～15秒，较正常对照延长3秒以上有意义。急性肝炎及轻型慢>>
问题二：肝功能化验单如何看 很多人拿到肝功能化验单之后并不知道那些指标都代表这什么，今天民众体检中心的专家就来给大家讲解一下，以及肝功能化验单上的一些指标的含义。由于每家医院的实验室条件、 *** 作人员、检测方法的不同，因此不同医院提供的肝功能检验正常值参考范围一般也不相同。在这里我们不再罗列每个项目的正常值参考范围，只就每个项目的中文名称、英文代码及有何主要临床意义作一介绍。：在肝功能化验单上反映肝细胞损伤的项目以血清酶检测常用，包括丙氨酸氨基转移酶(俗称谷丙转氨酶AL T)、门冬氨酸氨基转移酶(俗称谷草转氨酶AST )、碱性磷酸酶(AL P)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT或GGT )等。在各种酶试验中，ALT 和AST 能敏感地反映肝细胞损伤与否及损伤程度。各种急性病毒性肝炎、药物或酒精引起急性肝细胞损伤时，血清ALT 最敏感，在临床症状如黄疸出现之前ALT 就急剧升高，同时AST 也升高，但是AST 升高程度不如ALT而在慢性肝炎和肝硬化时，AST 升高程度超过ALT ，因此AST 主要反映的是肝脏损伤程度。在重症肝炎时，由于大量肝细胞坏死，肝功能化验会出现，血中ALT 逐渐下降，而此时胆红素却进行性升高，即出现“胆酶分离”现象，这常常是肝坏死的前兆。在急性肝炎恢复期，如果出现ALT 正常而γ-GT持续升高，常常提示肝炎慢性化。患慢性肝炎时如果肝功能化验单上γ-GT持续超过正常参考值，提示慢性肝炎处于活动期。在肝功能化验单上，反映肝脏分泌和排泄功能的项目包括总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)、总胆汁酸(TBA )等的测定。当患有病毒性肝炎、药物或酒精引起的中毒性肝炎、溶血性黄疸、恶性贫血、阵发性血红蛋白尿症及新生儿黄疸、内出血等时，都可以出现总胆红素升高。直接胆红素是指经过肝脏处理后，总胆红素中与葡萄糖醛酸基结合的部分。直接胆红素升高说明肝细胞处理胆红素后的排出发生障碍，即发生胆道梗阻。如果同时测定TBil和DBil，可以鉴别诊断溶血性、肝细胞性和梗阻性黄疸。溶血性黄疸：一般TB il 35%;阻塞性黄疸：一般TBil>340 μmol /L ，直接胆红素/总胆红素>60%。另外γ-GT、ALP 、5 '-核苷酸(5 '-NT)也是很敏感的反映胆汁淤积的酶类，它们的升高主要提示可能出现了胆道阻塞方面的疾病。在肝功能化验单上，反映肝脏合成贮备功能的项目包括前白蛋白(PA)、白蛋白(Alb )、胆碱酯酶(CHE )和凝血酶原时间(PT)等。它们是通过检测肝脏合成功能来反映其贮备能力的常规试验。前白蛋白、白蛋白下降提示肝脏合成蛋白质的能力减弱。当患各种肝病时，病情越重，血清胆碱酯酶活性越低。如果胆碱酯酶活性持续降低且无回升迹象，多提示预后不良。肝胆疾病时ALT 和GGT 均升高，如果同时CHE 降低者为肝脏疾患，而正常者多为胆道疾病。另外CHE 增高可见于甲亢、糖尿病、肾病综合征及脂肪肝。凝血酶原时间(PT)延长揭示肝脏合成各种凝血因子的能力降低。在肝功能化验单上，反映肝脏纤维化和肝硬化的项目包括白蛋白(Alb )、总胆红素(TBil)、单胺氧化酶(MAO )、血清蛋白电泳等。当病人患有肝脏纤维化或肝硬化时，会出现血清白蛋白和总胆红素降低，同时伴有单胺氧化酶升高。血清蛋白电泳中γ球蛋白增高的程度可评价慢性肝病的演变和预后，提示枯否氏细胞功能减退>>
问题三：如何看懂肝功能化验单呢 临床上肝功能检查的主要项目包括:蛋白代谢检查糖代谢检查脂类检查胆红素代谢检查血清酶学检查等常见以下几种酶:谷丙转氨酶(英文简写为ALT或GPT)谷草转氨酶(AST或GOT)碱性磷酸酶(英文简写为ALP)γ-氨酰转肽酶(英文简写为γ-GT)胆碱酯酶(英文简写为CHE)它们的正常值一般在化验单上标示出来如果采取的化验方法不同各种酶的值也就不同通常的参考值是:ALT>
问题四：肝功能报告表怎么看 鉴于大家都不看不明白肝功能化验单，因此我们做了下面的肝功能化验单对照表，里面包含了肝功能检查项目、肝功能指标的正常值、肝功能指标的意义等。
项目 缩写 正常值 肝功能检查项目的意义(偏高的意义)
谷丙转氨酶 ALT 0~40 谷丙转氨酶偏高可能是肝脏受到损害造成的，如患慢性肝炎、肝硬化肝癌等。
谷草转氨酶 AST 0~40 肝功能检查中谷草转氨酶升高意味着肝脏损害严重。
谷草/谷丙 AST/ALT 080~15 谷草/谷丙比值偏高说明肝存在实质的损害
谷氨酰转移酶 GGP 7~32 当肝内合成亢进或胆汁排出受阻时，血清中GGT增高。
碱性磷酸酶 ALP 53~128 常见于骨病、肝病
总胆红素 TBILI 51~190 肝脏发生炎症、坏死、中毒等损害时均可以引起胆红素偏高
直接胆红素 DBILI 00~51 肝内及肝外阻塞性黄疸，胰头癌，毛细胆管型肝炎及其他胆汁瘀滞综合征等。
间接胆红素 IBILI 50~120 衰老红细胞被破坏后产生出来的血红蛋白衍化而成
总蛋白 TP 60~80 主要是血清中水分减少，使总蛋白浓度相对增高，如呕吐、大量出汗
白蛋白 ALB 35~55 主要由于血液浓缩而致相对性增高，如严重脱水和休克。
球蛋白
GLB 150~350 球蛋白是机体免疫器官制造的, 当体内存在病毒等抗原（敌人）时,球蛋白就会升高。
白球比 ALB/GLB 100~200 白球比值偏低、倒置，可能有慢性肝实质性损害，预后较差
总胆固醇 CHOL 335~645 见于高脂血症、动脉粥样硬化、糖尿病、肾病综合征、胆总管阻塞、高血压等。
甘油三酯 TRIG 048~117 甲状腺功能亢进，肾上腺皮质机能减退，肝功能严重低下。
尿酸 UA 202~416 常见于痛风、白血病、恶心肿瘤等。
问题五：肝功能化验单怎么看 很多人都不知道，实际上解读一张肝功能化验单并没有想象中的那样困难。下面就请肝病专家教大家，让大家更加深刻的理解肝功能化验单上各个指标都有什么含义。肝功能生化学指标中的转氨酶、胆红素、球蛋白的水平在检查时如果数值越高，说明肝脏的病情越重，而有肝脏合成的白蛋白指标检查结果越低，说明肝脏受损程度越深。患者只要结合个人实际的检查数值和医院的正常值对比就可获知自己的每个指标是高还是低。推荐阅读》》》肝功能检查注意事项 肝功能五项指标一般的，在肝功能生化学指标检查后，如果确定了肝功能异常，还要进行乙肝五项病毒指标的检查，通过hbsag（表面抗原）、hbsab（表面抗体）、h罚eag（e抗原）、hbeab（e抗体）、hbcab（核心抗体）的检查，了解是否是因为感染了乙肝病毒导致，同过这五项的检查再结合hbvdna的定量分析，就可以了解病毒数量，结合转氨酶的变化，就可以确定最佳的治疗时机。当然除了自己要了解以外，找一家正规专科医院治疗是非常关键的。在这里为大家推荐国内最好的肝病医院--北京肝病医院，该院拥有国内先进的肝病诊疗设备，其中高速螺旋CT、核磁共振、乙肝病毒HBV基因检测系统、肝脏B超等一批高精端医疗设备达国内一流水平，这为精确诊断提供了最科学的依据。
问题六：如何看肝功化验单 很多朋友不知道肝功能化验单怎么看,所以有很多贻误病情的例子所以,我们要学会自己分析肝功能化验单,检查自己是否感染病毒
肝功能化验单之胆红素定量试验：
用这种试验了解病人有无黄疸及黄疸的深浅情况胆红素的正常值是100毫升的血清含量不超过1毫克含量超过1毫克的为异常,表明有黄疸；胆红素含量越高,表明黄疸程度越深
肝功能化验单之麝香草酚浊度试验（也称TTT）：
用这种试验了解肝细胞损害的程度,正常数值为0－6单位；如果超出6单位为不正常还有一种类似的试验方法是硫酸锌浊度试验,正常值为12单位以下
肝功能化验单之丙氨酸转氨酶活性试验（ALT)
旧称谷一丙转氨酶活性试验（也称GPT）；肝细胞里含有很多丙氨酸转氨酶,当肝细胞受到损害时,这种酶就会从肝细胞里释放出来,进入血液里,使血液里的丙氨酸转氨酶浓度增高ALT正常范围是赖氏比色法：
问题七：如何看肝功能化验单 10分 您好！
1、你是乙肝大三阳，谷丙转氨酶42稍高2个，你的HBV―DNA 403乘以十的供次方，病毒量403000000，病毒处于复制中，最好进行抗病毒治疗，服用贺普丁，1片/次/日，至少连服1年，三个月或者半年检测一次B超、肝功和HBV-DNA，如果病毒停止复制，转氨酶自然复原；
2、如乙肝病毒不再复制，贺普丁减量服用，但不可马上停药，防止乙肝病毒反d，直至贺普丁减量至最小量方可停服，如果肝功检验正常，HBV-DNA检验呈阴性，且有抗病毒治疗一年以上，可以循序渐进地停止抗病毒治疗，与乙肝病毒和平共处；
3、饮食上多食用菌类食品，如木耳、香菇、蘑菇等，能提高免疫力，鱼类含有丰富的蛋白质且易消化，多吃新鲜蔬菜和水果，增加VC含量，不吸烟、不饮酒，减少肝脏负担，少食用和不食用油炸、腌制、油腻太大、辛辣带有 性的食品，以清淡饮食为宜。
问题八：肝功能化验单和乙肝化验单怎么看？ 诊断：病毒性肝炎（乙型），提示“大三阳”，具有较强传染性。
但目前肝功能（ALT、AST）未见明显异常，未进入失代偿期，比较理想。
积极治疗乙型肝炎病毒，同时加强护肝，定期复查肝功能。
图顶部的“+”和“-”分别代表是否表达载体蛋白以及载体蛋白的相关信息；
一般标有"TCL" "WCL" "Lysates"或"IB:"代表了对相对应过表达载体的表达情况的检测（如果没有表达那么免疫沉淀就白做了）"Anti-"和"IB:"里的“”则是显出条带的抗体，一般与过表达载体的标签对应，比如“HA”或者“Myc”，“GFP”等等，比如第一个图中，用HA的抗体显出了1、3、4泳道带HA标签的ROCK2，说明ROCK2有表达；
最重要的就是剩下的IP图了，IP图一般都有两个，一个用来说明沉淀下来了蛋白1，另一个图用来说明沉淀下来了与蛋白1存在相互作用的蛋白2。以第一个图说明，“IP:Anti-Myc”是说沉淀蛋白1用的抗体是“Myc”，因此带myc标签的mDpr2作为蛋白1被沉淀下来，跑胶后用myc的抗体显出了条带，同一块胶转的膜再用HA的抗体可显出与蛋白1有相互作用，一同被沉淀下来的蛋白2，因此图1表示ROCK2与mDpr2存在相互作用。
有什么不懂的还可以问我，谢谢！
1,要有合理的试验或抽样设计,保证试验结果的可靠、正确、且处理间要有可比性。 2,选用的假设检验方法应符合其应用条件3,要正确理解差异显著或极显著的统计意义
4,合理建立统计假设,正确计算检验统计数 “差异不显著”:有两种可能:一:它们所在的总体平均数不相同,但被试验误差所掩盖,表现不 出差异的显著性 二:它们所在的总体平均数的确无差异
“差异显著”或:“差异极显著” : 表面上如此差异的不同样本来自同一总体的可能性小于 005 或
001 ,已到达了可以认为它们所在的总体平均数不相同的显著水平。但有些试验结果虽然差异大, 但误差大,也许得不出“差异显著”的结论,而有些试验结果虽然差异小,但由于试验误差小,反 而可能推断为“差异显著“您好，你检查报告上的“HA”是不是“HBsAg” 如表面抗原阳性属乙肝感染早期，病毒携带者。 肝科疾病一般不会造成月经改变，月经有血块可能是经血不畅，气滞血淤引起，可来我院妇科检查治疗。采用中药调理，效果明显，无副作用。
随着养殖业的飞速发展和广大养殖户科学意识的不断提高，人们普遍认识到实验室检测技术在临床应用的重要性，发病率越来越高。下面我为大家整理了关于血凝的实验报告，希望对你有锁帮助！
篇一：禽流感血凝和血凝抑制试验
禽流感血凝-血凝抑制试验 *** 作方法及注意事项
禽流感血凝和血凝抑制试验可用于血清中抗体水平的监测，也可用于判断未使用疫苗群体的感染状态等。该试验是目前世界卫生组织和国际动物健康组织进行全球流感监测所普遍采用的方法，而且因其具有经济、快速、可靠、 *** 作简便、能够处理大量的样品，并能在短时间内报告禽流感抗体水平等优点，已经成为当前基层兽医实验室禽流感疫病监测和免疫抗体检测中最为常用的方法。但因该试验受人为 *** 作影响较大，经常因 *** 作不规范、不严谨等造成结果偏差大、重复性差等问题，现根据几年来的工作经验对该试验过程中应注意的事项做一探讨。
一、 血凝试验 *** 作程序
1、取96孔90°V形酶标板，用微量移液器在第一至第五排的1~12孔每孔加25 μL PBS液。
2、吸取25 μL标准禽流感抗原加入到第一排第1孔中充分混匀。
3、从第1孔吸取25 μL混匀后的抗原液加到第2孔中，混匀后吸取25μL加入到第3孔中，依次进行倍比稀释至第二排最后一孔即第24孔，最后弃去25 μL。第三排孔至第四排孔同上 *** 作。
4、依次向第一至第五排孔的每孔中加入25 μL 1%的鸡红细胞悬液。
5、将酶标板置于微量振荡器上振荡10秒，室温（20-25℃）静置30 min观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下）。
6、结果判定：将板作45°倾斜，观察红细胞是否呈泪滴状流淌。以完全凝集（不流淌）的抗原或病毒最高稀释倍数为1个血凝单位（HAU）
二、血凝抑制试验 *** 作程序
1、根据血凝试验结果配制4HAU抗原。（即1HAU抗原除以4）
2、取96孔V形酶标板，用移液器在第1~12孔各加入25 μL PBS。
3、在第1孔加入25 μL被检血清，充分混匀后移出25 μL加至第2孔，依次类推，倍比稀释至第12孔，弃去25 μL。
4、按以上步骤加入阳性血清和阴性血清（各做两份），作对照孔。
5、在第1~12孔各加入25 μL 4单位抗原，置于微量振荡器上轻轻混匀，室温20-25℃下静置30 min。
6、每孔加入25 μL 1%的鸡红细胞悬液。置于微量振荡器上轻轻混匀，室温（20-25℃）静置40 min后观察结果，若环境温度过高，可于4℃条件下进行，红细胞将呈明显的纽扣状沉到孔底。
7、结果判定：只有阴性对照孔血清滴度不大于2 log2，阳性对照孔误差不超过1个滴度，试验结果才有效。 将酶标板作45°倾斜，以完全抑制红细胞凝集的最大稀释倍数判为该血清的血凝抑制滴度。当被检血清效价大于等于4log2，判为禽流感抗体阳性。
三、试验过程中的注意事项
1样品的保存及试验前处理
11 采集的血液样品应及时分离血清，最好分装至离心管中，标记清楚，离心后吸出血清，对应编号冷藏送检，并禁止运输过程中剧烈震动。
12 一般情况下，在5天内检测的样品可放置在4℃的冰箱中冷藏，否则低温冷冻保存。
13 在检测前血清样品应充分混匀，混匀时采用上下缓慢颠倒几次的方法即可，切忌剧烈振荡而引起产生气泡及血清中蛋白变性。
14 对出现胶冻状的血清样品，可采用反复搅动几下再离心的方法有助于缓解该状态。胶状物是含纤维蛋白和纤维蛋白原的血清，可能是由于放置时间不够造成的血清未完全析出状态。不建议直接吸取其中少量的清亮血清。
15 水禽等样品为排除非特异性反应，还应相应进行灭能反应。具体 *** 作方法：56℃水浴锅30min或加等量10%鸡红细胞，轻摇后静置30分钟，离心，收集上清液即可。
2器材的选择
21 酶标板的选择：
建议使用96孔90°V型板进行试验，通过反复试验证明：90°V型板相对于110°板及130°板来讲，具有红细胞沉降速度快，产生的凝集图像清晰、结果容易判定等优点。
22 移液q的选择及使用：
①单道、多道可调微量移液q应选择合适的量程，以便精确度的提高。
②使用时应采用一档吸液二档排液的方法。吸取液体时，q头要深入液下缓慢平稳吸液。加缓冲液时
应加在板孔底部。倍比稀释血清时，应每孔至少反复吹吸6次，以便混合均匀，还应注意尽量避免产生泡沫引起混合不均。加抗原及红细胞时应在板内液面上方加样，以免交叉污染，影响试验结果。
③加样、倍比稀释时应高度集中注意力，以免漏加、重复加样等。
3试剂的保存及配置
31 禽流感血凝抑制试验所用的抗原、阳性血清应严格按照说明书的要求进行保存和配置，试验前应提前将其恢复至室内温。抗原的保存温度为-20℃，反复冻融会降低抗原的滴度，应避免反复冻融。
32 PH72、001mol/L的PBS液的制备
①应尽量现用现配
②每次使用前应测PH值，以免时间过长而导致PH值发生改变。
③由于PH试纸跨度范围偏大，PH值不易准确介定，因此最好采用酸度计准确测量PH值，以提高试验的精确度。
④全部试验均采用同一种稀释液。
33 1%红细胞的制备
①为避免有些鸡只的红细胞有自凝现象，因此配制1%红细胞悬液时应最好选择采取2-3只SPF鸡或未进行过任何免疫过的成年公鸡血液。当然采血的前提条件是要按十分之一采血量比例在一次性注射器中加入抗凝剂，如肝素、枸椽酸钠、柠檬酸钠等。
②采血完毕后最好分装至2ml容量的圆底离心管中，因为通过2ml与15ml两种容量离心管相比较，放入15ml尖底离心管中的话，离心后，离心管底部红细胞不易与加入的PBS液混匀，易沉积在管底部，达不到洗脱干净的目的。
③经2000~3000r/min，5~10min，弃去上液和红细胞上层的白细胞薄膜，再加入十倍以上血量的PBS液，上下缓慢颠倒（切忌用力过大使红细胞破裂），使其充分混匀，再离心弃去上清液，反复几次直至上清液清亮透明为止。
④在加红细胞过程中还须不断轻摇以确保红细胞均匀，使其每孔加入相同数量的红细胞。
⑤制备好的红细胞液如果放置后上清液变红，说明有溶血，不可再使用。
34抗原液的配制
①先做血凝试验测定效价，以抗原与红细胞完全凝集的孔为1HUA抗原，配制4HUA抗原应往前推算两孔，即除以4后的值。
②每次做试验前，必须重新检测禽流感抗原的血凝效价，以免效价发生改变而导致抗原稀释倍数不准确，从而导致试验结果不准确。
③为保证配制的抗原准确，还要进行抗原回滴试验。具体方法：做二排抗原回滴，在两排的第1~8孔各加25微升PBS，取4HAU抗原25微升加在两排的第1、第2孔，混匀，从第2孔倍比稀释至第4孔，弃去25微升，另一排同样。从第2至第8孔补25微升PBS，以保持75微升总量不变，另一排同样。两排的第1至第8孔各加25微升1%红细胞，震荡10秒钟。静置30分钟观察结果。这样在第1孔为4HAU抗原，第2孔为2HAU抗原，第3孔为1HAU抗原，第4孔为1/2HAU抗原，均为75微升总量，第5至第8孔为空白对照。如果抗原回滴试验不成立，应相应调整抗原浓度直至回滴试验成立。因为如果抗原浓度过高，则所测定的抗体效价水平偏低，如果抗原浓度过低，则所测定的效价偏高。所以不调整抗原浓度至实验成立的话会对结果有很大影响。
4结果的判定
每次试验必须设阳性及阴性（空白）对照血清，判别试验是否成立。判读结果时，将酶标板倾斜45°，以孔底沉淀的红细胞流动性好，呈泪珠样流淌，边缘无凝集颗粒为凝集完全抑制。
5试验器具的清洗
每次试验完毕后，应将酶标板中液体甩净，然后用自来水反复冲净每个孔，再放入3%NaOH中4小时，清水反复冲净，再放入3%Hcl中4小时，清水反复冲净，再用蒸馏水反复冲洗几次，甩干水份，入干燥箱中干燥备用。实验用烧杯、加样槽、量筒等也应充分洗净、干燥。以免器具内有杂物、污物以及残留物从而影响试验结果。
四、小结
在进行禽流感血凝抑制试验时，应充分考虑到各方面的影响因素，提供的检测结果才会真实可靠，准确掌握禽类的'免疫抗体水平，进而为科学防控禽流感提供理论依据。
篇二：血凝抑制试验
血凝抑制（HI）试验简介
（以禽流感病毒为例）
一、原理
流感病毒颗粒表面的血凝素（HA）蛋白，具有识别并吸附于红细胞表面受体的结构，HA试验由此得名。HA蛋白的抗体与受体的特异性结合能够干扰HA蛋白与红细胞受体的结合从而出现抑制现象。
二、应用
该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。可用于流感病毒分离株HA亚型的鉴定，也可用来检测禽血清中是否有与抗原亚型一致的感染或免疫抗体。
三、缺点
只有当抗原和抗体HA亚型相一致时才能出现HI现象，各亚型间无明显交叉反应；除鸡血清以外，用鸡红细胞检测哺乳动物和水禽的血清时需要除去存在于血清中的非特异凝集素；需要在每次试验时进行抗原标准化；需要正确判读的技能。
四、试验步骤
1 阿氏（Alsevers）液配制
称量葡萄糖205g、柠檬酸钠08g、柠檬酸0055g、氯化钠042g，加蒸馏水至100mL，散热溶解后调pH值至61，
69kPa 15min高压灭菌，4℃保存备用。（38%枸橼酸钠（38g枸橼酸钠，100ml超纯水），101 kPa,20min高压灭菌，4℃保存备用,保存期1个月）。
2 10%和1%鸡红细胞液的制备
21采血
用注射器吸取阿氏液约1mL（38%枸橼酸钠），取至少2只SPF鸡（如果没有SPF鸡，可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡），采血约2～4mL，与阿氏液混合（38%枸橼酸钠），放入装10mL阿氏液（生理盐水）的离心管中混匀。
22 洗涤鸡红细胞
将离心管中的血液经1500～1800 r/min 离心8分钟，弃上清液，沉淀物加入阿氏液（生理盐水），轻轻混合，再经1500～1800 r/min离心8分钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复2次以上过程后，加入阿氏液20 mL（生理盐水），轻轻混合成红细胞悬液，4℃保存备用，不超过5天。
23 10%鸡红细胞悬液
取阿氏液保存不超过5天的红细胞，在锥形刻度离心管中离心1500～1800 r/min 8分钟，弃去上清液，准确观察刻度离心管中红细胞体积(mL)，加入9倍体积(mL)的生理盐水，用吸管反复吹吸使生理盐水与红细胞混合均匀。（此步
可省略，直接配制1%红细胞）
24 1%鸡红细胞液
取混合均匀的10%鸡红细胞悬液1 mL，加入9 mL生理盐水，混合均匀即可。（根据检测血清的数量，估算一下需要的1%鸡红细胞量，可按03ml/每份血清）
3 抗原血凝效价测定（HA试验，微量法）
31 在微量反应板的1孔～12孔均加入25μl PBS（生理盐水），换滴头。
32吸取25μl抗原加入第l孔，混匀。
33从第1孔吸取25μl，病毒液加入第2孔，混匀后吸取25μl加入第3孔，如此进行倍比稀释至第11孔，从第11孔吸取25μl弃之，换滴头。
34每孔再加入25μl PBS（生理盐水）。
35每孔均加入25μl 体积分数为1%鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入）。
36振荡混匀，在室温（20～25℃）下静置40min后观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下反应1小时）。对照孔红细胞将呈明显的钮扣状沉到孔底。
37结果判定 将板倾斜，观察血凝板，判读结果（见下表）。
表1：血凝试验结果判读标准
能使红细胞完全凝集（100%凝集，++++）的抗原最高稀释度为该抗原的血凝效价，此效价为1个血凝单位（HAU）。注意对照孔应呈现完全不凝集（-），否则此次检验无效。
4 血凝抑制（HI）试验（微量法）
41 根据3的试验结果配制4HAU的病毒抗原。以完全血凝的病毒最高稀释倍数作为终点，终点稀释倍数除以4即为含4HAU的抗原的稀释倍数。例如，如果血凝的终点滴度为1:256，则4HAU抗原的稀释倍数应是1:64（256除以4）。
42 在微量反应板的1孔～11孔加入25μl PBS（生理盐水），第12孔加入50μl PBS（生理盐水）。
43 吸取25μl血清加入第1孔内，充分混匀后吸25μl于第2孔，依次倍比稀释至第10孔，从第10孔吸取25μl弃去。
44 1孔～11孔均加入含4HAU抗原25μl，室温（约20℃）静置至少30min。
45 每孔加入25μl 1%的鸡红细胞悬液混匀，轻轻混匀，静置约40min（室温约20℃，若环境温度太高可置4℃条件
下进行），对照红细胞将呈现钮扣状沉于孔底。
46 结果判定
试验成立的条件：只有阴性对照孔血清滴度不大于21og2，阳性对照孔血清误差不超过1个滴度，试验结果才有效。
以完全抑制4HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。
HI价小于或等于31og2判定HI试验阴性；HI价大于或等于41og2为阳性。
五、HI试验注意事项
1、合理选择抗原和对照阳性血清。针对Re-4和Re-5株疫苗免疫采用相应抗原和对照阳性血清。
同一亚型的禽流感病毒制成的抗原，如果毒株来源不同，则可能会存在抗原性差异，从而使检测同一血清的结果有差别。一般来讲，疫苗种毒株如果与抗原所用毒株相同时，则所测得的HI效价较高。
2、合理使用和保存抗原。反应试剂要按规定保存和使用，冻干的试剂应按照说明中规定的体积重新溶解并保存。要避免杂菌污染，因为污染所造成的非流感起源的凝集素也可与所有抗血清发生非特异反应。为避免反复冻融和细菌污染，可以无菌 *** 作将试剂分装成小包装。
3、反应温度不能太高。若在37℃ （如温箱）下进行。
篇三：血凝和血凝抑制试验
随着养殖业的飞速发展和广大养殖户科学意识的不断提高，人们普遍认识到实验室检测技术在临床应用的重要性。下面简单介绍一下鸡新城疫微量血凝试验和血凝抑制试验的注意事项及 *** 作方法。
应用：
用于新城疫、产蛋下降综合征和传梁性支气管炎等的母源抗体的检测、雏鸡首免日龄的确定、疫苗免疫后的免疫应答的监测、临床鸡病的鉴别诊断等。
下面以新城疫病毒为例，介绍血凝和血凝抑制试验的方法：
注意事项：
一、样本要具有代表性：所采样本要能代表整体，通常采用四角加中间的随机取样法，并且确定适当的样品数量，一般1000只以下的鸡群采样率在2～5%；5000只以下1～2%；5000只以上05～1%。对产蛋期间的鸡群可采鸡蛋；对雏鸡或青年鸡，可采血。方法是：取青霉素小瓶，洗净后用蒸馏水冲洗、控干水分，并注意不要用消毒剂，以免影响结果。每只鸡采血量在1ml左右，最好不低于1ml，在室温下静置至血清自然析出。
二、四单位抗原的准确性：要获得准确的监测效果，先做红血球的凝集试验，即测得抗原的血凝价，尔后前移2孔作为四单位抗原的稀释度。
三、红血球洗脱的充分性：原则上，新城疫检测所用的红血球应来源于非疫苗免疫过的健康公鸡，但实际上却多采用免疫过疫苗的健康公鸡，有时甚至是病鸡。因此，对红血球的洗脱的次数要多、要充分，并注意转速和时间，通常采用五次变速离心法：前四次为每分钟1500转，每次5分钟，最后一次为每分钟3000转，持续7～8分钟。另外，洗红血球过程中，应注意动作要轻，玻璃仪器之间尽量减少碰撞，以免造成红血球破裂而影响结果。
四、结果判定的及时性：检测中，每次试验均应设抗原与生理盐水对照，加入红血球后，每隔5分钟观察一次，一旦两列对照孔图像清晰地显示出来时，应立即对样本进行结果判定，过早过晚都会影响判定结果的准确性。
血凝与血凝抑制试验的 *** 作方法
一、材料与仪器：新城疫抗原、1%鸡红血球、抗凝剂、生理盐水、被检血清、离心机、吸管、滴管、洗耳球、烧杯、量筒、注射器、长针头、96孔V型医用血凝板、微量移液器、微量振荡器、恒温培养箱、冰箱等。
二、方法：
1%鸡红血球的制备：
1用长针刺入鸡心脏或翅下静脉，采血，采血量视用量而定，5%抗凝剂与全血的比例为1∶3～4。
2洗血球：共洗4～5次，每次5～8分钟，红血球与生理盐水的比例至少为1∶2～3。离心机转速为每分钟1500～3000转，最后倾去上清。
3吸红血球泥1ml加生理盐水99ml，配成1%红血球备用。
三、血凝试验：
1血凝板上12个孔内全部加入生理盐水，每孔005ml，吸等量新城疫抗原于第一孔内，混匀后吸出同量于第二孔内混匀，以此类推稀释至第11孔，并弃去005ml，留第12孔作为生理盐水对照，然后全部孔内加入1%鸡红血球。
2将血凝板置于振荡器上振荡1～2分钟，使材料充分混均，放入恒温培养箱，每5分钟观察一次，至10～15分钟取出，一般以生理盐水对照孔的图象清析地出现为准。
3结果判定：红血球在反应板底部全部均匀铺开为完全凝集（++++），在血凝板底部集为一小红点为沉淀（－），如底部为一小红点，四周为凝集的红细胞，则为不完全凝集（++）。
4出现完全凝集的抗原的最高稀释度，即为该抗原的凝集价。
5四单位抗原的制备：血凝试验的结果如为28（256），则前移2孔即26（64），作为四单位抗原的稀释度。即：63ml生理盐水+1ml抗原即为四单位抗原。
四血凝抑制试验：
1血凝板上1～11孔全部加入005ml的生理盐水，于第一孔内加入等量的被检抗体，稀释至第10孔，弃去005ml，再加入等量的4单位新城疫抗原至第11孔，第11孔为抗原对照，12孔为生理盐水对照。在振荡器上振荡1～2分钟，放置室温约20分钟，然后加入等量的1%鸡红血球，振荡后放入恒温培养箱大约10～15分钟后进行结果判定。
2结果：能完全抑制红细胞凝集的被检抗体的最高稀释度为该被检抗体的血凝抑制滴度。
注：1、HI价在23～24时免疫可产生良好的免疫应答，如在疫区可提高到24～25免疫。
2、24～25<HI<210时为最好。3、如HI价高于211则为强毒污染。
注：#为完全抑制，++为不完全抑制，－为不抑制。
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