一、性质不同
1、浓缩胶:在不连续聚丙烯 酰胺凝胶电泳中,同一介质的凝胶浓度分为 两种,负极的加样侧一般浓度为2%〜5%。
2、分离胶:不连续缓冲体系聚丙烯酰胺凝胶电泳中的一部分,其组成、缓冲液pH和凝胶孔径与浓缩凝胶不同。它具有分子筛效应的小孔径凝胶。
二、过程不同
1、浓缩胶过程:由于浓缩胶浓度低、孔径大,分离胶浓度高,孔径小。带电蛋白质或核酸离子在大孔径凝胶中运动时,阻力小,运动速度快。当接近小孔径凝胶时,阻力较大,移动速度减慢,使样品浓缩,形成窄带,减少电泳过程中的带扩散。
2、分离胶过程:蛋白质或核酸在电泳过程中由浓缩胶进入分离胶,由于分子筛的作用,小分子物质容易通过,阻力小,迁移速度快。大分子由于较大的电阻而滞后。因此,即使具有类似净电荷和相等的游泳率的物质,也会根据分子量的不同而通过分子筛效应从凝胶中分离出来。
扩展资料:
浓缩胶的作用有堆积作用,凝胶浓度较小,孔径大。将较细的样品加入到浓缩胶中,通过大孔凝胶的迁移浓缩到窄的区域。当样品液和浓缩胶选pH6.8的TRIS/HCL缓冲液,电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后,HCL解离成氯离子,甘氨酸解离少量甘氨酸自由基离子。
蛋白质带负电,所以它们一起移动到正极。氯离子是最快的,甘氨酸是最慢的,蛋白质在中间。电泳开始时,氯离子游动速率最高,超过蛋白质,在电泳的背面形成一个低电导区,电场强度与低电导区成反比,从而产生较高的电场强度。
使蛋白质和甘氨酸离子快速运动,形成稳定的界面,使蛋白聚集在移动界面附近,浓缩成一中间层。大大提高了电泳的灵敏度。
参考资料来源:百度百科-浓缩胶
参考资料来源:百度百科-分离胶
1、浓缩胶的作用:
有堆积作用,凝胶浓度较小,孔径较大,把较稀的样品加在浓缩胶上,经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带,在电泳的时候可以看到样品被压成一条线。
2、分离胶的作用:
有分离分子的作用,为电荷效用和分子筛效用。当样品从浓缩胶进入分离胶时,由于蛋白的分子量不一样,其在分离胶中的泳动速度不一样,这样就能够分离目的蛋白,蛋白越大,所对应的分离胶浓度应该越小,比如90k以上的蛋白一般用6%的分离胶来分离。
扩展资料:
分离胶和浓缩胶因为浓度不一样导致孔径不一样,蛋白在其中的泳动速度不一样。
浓缩胶的浓度通常为3.9%,浓度比较小;浓缩胶中的孔隙较大,起到的作用是为了让蛋白质混合物在进入分离胶之前都到达同一起跑线,以便在分离胶中更好的分开,因此一定要充分跑完浓缩胶之后再调电压。
分离胶的浓度从6%-15%不等,当样品从浓缩胶进入分离胶时,由于蛋白的分子量不一样,小分子的物质容易通过, 阻力小,迁移速度快;大分子的则受到较大 的阻力而被滞后。这样就能够分离目的蛋白。
参考资料来源:百度百科-浓缩胶
参考资料来源:百度百科-分离胶
欢迎分享,转载请注明来源:内存溢出
评论列表(0条)