等电聚焦实验中的marker作用

你想问的是等电聚焦实验中的marker有什么作用这个问题吧。作用如下。

在实验中marker的作用是分子标记。大多数分子标记为共显性，对隐性性状的选择十分便利；

基因组变异极其丰富，分子标记的数量几乎是无限的；在生物发育的不同阶段，不同组织的DNA都可用于标记分析；分子标记揭示来自DNA的变异。

1、双向电泳中的IPG是 immobilized pH gradient的缩写，它的意思是固定化PH梯度。

2、IPG胶条是指双向电泳中的第一向分离场所。

如果你曾经做过普通蛋白质电泳，则可理解IPG胶条中的“胶”字，胶是蛋白质在其中移动和分离的介质。至于“条”字，则是因为双向电泳中一次只处理一个蛋白质样本，不像普通电泳中那样多孔道一起分离。

故而可知IPG的意思主要是说胶条制作成为PH渐变的胶（相对于普通电泳中分离胶一般都按pH88配的），使得蛋白质按照其带电性质分离，而不是按照大小来分离。

双向电泳（two-dimensional electrophoresis,2-DE）是等电聚焦电泳和SDS-PAGE的组合，即先进行等电聚焦电泳（按照pI分离），然后再进行SDS-PAGE（按照分子大小），经染色得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图。

蛋白质组研究的发展以双向电泳技术作为核心，双向电泳由O’Farrell’s于1975年首次建立并成功地分离约1 000个Ecoli蛋白，并表明蛋白质谱不是稳定的，而是随环境而变化。双向电泳原理简明，第一项进行等电聚焦，蛋白质沿pH梯度分离，至各自的等电点；随后，再沿垂直的方向进行分子量的分离。

参考资料:百度百科:双向电泳

等电点是蛋白质的一个重要性质，测定等电点的方法是在不同pH条件下测量蛋白质的电泳迁移率，然后用迁移率对pH作图，对应于迁移率为零的pH就是蛋白质的等电点。按照蛋白质等电点不同而进行分离的电泳方法称为蛋白质等电聚焦电泳。由于其分辨率可达到001pH单位，故特别适用于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。

可通过等电聚焦的方式，利用蛋白的等电点不同进行分离。

等电点聚焦就是在电泳槽中放入载体两性电解质，当通以直流电时，两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度，当蛋白质放进此体系时，不同的蛋白质即移动到或聚焦于与其等电点相当的pH位置上，电聚焦的优点是：有很高的分辨率，可将等电点相差001-002pH单位的蛋白质分开；一般电泳由于受扩散作用的影响，随着时间和所走的距离加长，区带越走越宽，而电聚焦能抵消扩散作用，使区带越走越窄；由于这种电聚焦作用，不管样品加在什么部位，都可聚焦到其电点，很稀的样品也可进行分离；可直接测出蛋白质的等电点，其精确度可达001pH 单位。电聚焦技术的缺点是：一是电聚焦要求用无盐溶液，而在无盐溶液中蛋白质可能发生沉淀，二是样品中的成分必需停留于其等电点，不适用在等电点不溶或发生变性的蛋白质。

（摘自百度词条）

电泳是在电场作用下带电离子根据其迁移率不同进行分离的技术。该技术简单，但却是研究蛋白性质的一个非常有用的手段。蛋折的迁移率与其结构衙环境都有关系，大多数电泳都有固定介质如聚丙烯酰胺胶和琼脂糖胶中完成的，聚丙烯酰胺胶适合蛋白和小的核酸的分离，琼脂糖胶适合大到蛋白复合物的分离。

因为没有一种方法会得到全部的信息，所以根据不同的物理特性，已发展出多种电泳方法。最常用的几种聚丙烯酰胺凝胶电泳技术如下：SDS-PAGE：

在分子筛的凝胶中根据蛋白质的分量进行分离。SDS变性剂与所有蛋白结合，破坏结构、使其变性，所带的负电荷与其大小成正比，因此蛋白的迁移率只与蛋白的分子有关，与电荷和形状无关。Native

PAGE:

在非变性的条件下分离蛋白质，对于任何一种分离介质，迁移率都与蛋白的大小、电荷和形状有关。电泳分离后，可进下步分析蛋白的活性和结构。IEF（等电聚焦）：

在PH梯度胶中根据蛋白质的等电特点进行分离，在蛋白质等电点处，蛋白所带电荷为零。根据后续蛋白的应用，可使用变性或非变性的胶。等电聚焦电泳的分辨率非常高。

IEF测量蛋白质等电点 *** 作时应注意如下：

蛋白质的双向电泳的向为等电聚焦（Isoelectrofocusing，IEF），根据蛋白质的等电点不同进行分离，第二向为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），按亚基分子量大小进行分离。经过电荷和分子量两次分离后，可以得到蛋白质分子的等电点和分子量信息。需要注意：

1、一向聚焦与二向电泳之间需要平衡，时间视蛋白质的性质而定，一般为10min，多不超过15min。

2、过量的上样量会引起双向图形畸形，特别在一向聚焦时，当样品浓度超过5mg时，则蛋白质凝聚和沉淀，使二向时产生水平和垂直条纹。

3、含尿素的试剂均应避免过高的温度处理，一般不要超过30℃，否则尿素分解产生异硫氰酸盐会引起羧基甲酰化而导致电荷不均一性。

4、向中过量的去污剂会严重影响双向电泳图谱，因此聚焦完毕进行平衡前，用双蒸馏水冲洗胶条，以除去残留的去污剂。

5、双向电泳中双向凝胶间的界面紧密接触非常重要，如果接触不好或者两者之间留有气泡，则导致转移时分子扩散。

等电聚焦的优点：

等电点聚焦就是在电泳槽中放入载体两性电解质，当通以直流电时，两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度，当蛋白质放进此体系时，不同的蛋白质即移动到或聚焦于与其等电点相当的pH位置上。

电聚焦的优点：有很高的分辨率，可将等电点相差001-002pH单位的蛋白质分开；一般电泳由于受扩散作用的影响，随着时间和所走的距离加长，区带越走越宽，而电聚焦能抵消扩散作用，使区带越走越窄。

由于这种电聚焦作用，不管样品加在什么部位，都可聚焦到其电点，很稀的样品也可进行分离；可直接测出蛋白质的等电点，其精确度可达001pH 单位。

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