锚喷支护的 *** 作要点

A、 施工工艺及 *** 作要点

1、 原材料备制

①锚杆材料：锚杆材料采用20锰硅钢筋或注浆锚杆，钢筋直径Φ22㎜，按设计要求规定的材质、规格备料，并进行调直、除锈、除油，以保证砂浆锚杆的施工质量和施工的顺利进行。

②水泥；普通水泥砂浆选用普通硅酸盐水泥，在自稳时间短的围岩条件下，宜用早强水泥砂浆锚杆。

③砂：宜采用清洁、坚硬的中细砂，粒径值不宜大于3㎜，使用前应过筛。

④配合比：普通水泥砂浆的配合比：水泥：砂宜为1：1~ 1：15（重量比），水灰比宜为045~050；

⑤砂浆备制：砂浆应拌合均匀，随拌随用。一次拌和的砂浆应在初凝前用完，并严防石块杂物混入，主要为了保证砂浆本身的质量及砂浆与锚杆杆体、砂浆与孔壁的粘结强度，也就是为了保证锚杆的锚固力和锚固效果。

2、 锚杆孔的施工

①孔位布置：孔位应根据设计要求和围岩情况布孔并标记，偏差不得大于20㎝；

②锚杆孔径：砂浆锚杆的锚杆孔径应大于锚杆体直径15㎜；

③钻孔方向：锚杆孔宜沿隧道周边径向钻孔，但钻孔不宜平行岩面；

④钻孔深度：砂浆锚杆孔深误差不应大于±10㎝；

⑤锚杆孔应保持直线；

⑥灌浆前清孔：钻孔内若残存有积水、岩粉、碎悄或其它杂物，会影响灌浆质量和妨碍锚杆杆体插入，也影响锚杆效果。因此，锚杆安装前，必须采用人工或高压风、水清除孔内积水和岩粉、碎悄等杂物。

3、 锚杆安装

①砂浆：砂浆锚杆孔内的砂浆也应采用灌浆罐和注浆管进行注浆。注浆开始或中途停止超过30min时应用水润滑灌浆罐及其管路，注浆孔口压力不得大于04MPa,注浆时应堵塞孔口。注浆管应插至距孔底5~10㎝处，随水泥砂浆的注入缓慢匀速拔出，并用手将水泥纸堵住孔口。

②锚杆安装：锚杆头就位孔口后，将堵塞孔口水泥纸掀开，随即迅速将杆体插入并安装到位。若孔口无水泥砂浆溢出，说明注入砂浆不足，应将杆体拔出重新灌注后再安装锚杆；锚杆杆体插入孔内的长度不宜小于设计规定。锚杆安设值，不得随意敲击，三天内不得悬挂重物。

③钻孔注浆的饱满程度，是确保安装质量的关键，工艺要求注浆管插到距孔底5~10㎝，并随砂浆的注入而缓慢匀速拔出，就是为了避免拔管过快而造成孔内砂浆脱节。砂浆不足时应重注砂浆。这都是为了保证锚杆全长为足够饱满的砂浆所握裹，保证其锚固效果。

④普通砂浆锚杆安装后不久，随意敲击杆体将影响砂浆与锚杆杆体、砂浆与孔壁的粘结强度，降低锚杆的锚固力。普通砂浆三天所能达到的强度为28天强度的40%左右，因此，规定三天内不得悬挂重物，不但是为了保证锚固质量，也是为了防止发生安全事故。

砂浆锚杆施工工艺流程图

4、 需注意事项

砂浆锚杆作业是注浆，后放锚杆（注浆锚杆作业是先放锚杆后注浆）。

具体 *** 作是：

先将水注入牛角泵内，水占泵体积的2/3，并倒入少量砂浆，初压水和稀浆湿润管路，然后再将已调好的砂浆倒入泵内，将注浆管插至锚孔眼底，将泵盖压紧密封，一切就绪后，慢慢打开风阀开始注浆，在气压推动下，水在前，砂浆在后，水湿润泵体和管路，引导砂浆进入锚孔中。随着砂浆不断压入眼底，注浆管跟着用推和锤击的方法，把锚杆插入眼底，然后用木楔堵塞眼口，防止砂浆流失。

注浆压力不宜过大，保持在2㎏/㎝2为好；

压注砂浆时，必须密切注意压力表，发现压力过高，须立即停风，排除堵塞；

注浆管不准对人放置，注浆管在未打开风阀前，不准搬动，关闭密封盖，以防高压喷出物射击伤人。

掺速凝剂砂浆时，一次拌制砂浆数量不应多于三个孔，以免时间过长使砂浆在泵管中凝结。

锚注完成后，及时清洗机具。

B、 挂钢筋网施工

钢筋网使用Φ65，（III类围岩仰拱采用Φ16钢筋网15×15㎝），网格为20㎝×20㎝，固结在锚杆端头上。

钢筋须调直除锈，按规定长度下料、安扎、焊、顺序堆放在工作面上使用。

钢筋必须安装顺直，紧贴初喷砼表面，钢筋网成形后，每根钢筋都应绑扎，在二次喷砼时，钢筋极少颤动。

在有钢筋的工作面上复喷砼，其喷射作业与无钢筋情况要求不同，前者要求将钢筋背后喷护密实，钢筋表面不残留回d物，以使钢筋有较大的握着力，有钢筋时，如果对着直喷，反而加大回d量，因此在钢筋网外喷护，喷砂应保持一个角度，既能使钢筋背后勤部密实充填，又可使回d减少。

钢筋网表面保护层厚度不小于2㎝，不允许将锚杆、钢筋头外露。

钢筋网的铺设应设在第一次喷射砼和锚杆施工后进行。

钢筋网应随喷射砼面的起伏进行铺设。钢筋网现场绑扎，可以利用单根钢筋挠度大，当有格栅拱时，应与格栅拱联接牢固。

C、 格栅拱（钢拱架）施工

格栅拱是具有结构简单、用钢量少、受力结构条件好、加工制造方便、架设工艺简单等优点，对于隧道软弱破碎围岩加强地段的施工和处理险情、坍方处理都是一种能应急而有效的施工措施和手段。

格栅拱架设应做到：

1、 按设计位置安设，一般在第一次喷射砼后进行。对局部欠挖部位应予凿除，以保证格栅拱施工位置和结构尺寸的正确性；

2、 格栅拱应垂直于隧道中丝。上下、左右偏差应小于±5㎝，钢架倾斜度小于2○。

3、 格栅拱之间必须按设计要求进行纵向联接。以保证格栅拱之间处于良好的联合受力状态，采用格栅拱加强地段，一次使用格栅拱的数量不应少于5榀。

4、 格栅拱应与钢筋网联接，可知栅拱必须与锚杆焊接牢固，以保证格栅拱、钢筋网、喷射砼和锚杆与围岩形成联合受力结构。因此，锚杆布置与断面方向均应与格栅拱的安设相适用。并应留有不小于20㎝的锚杆头部与格栅拱联接。局部位置与锚杆错开时采增加纵向钢筋或调整纵向钢筋位置进行间接联接，确保该范内的每根锚杆发挥其作用。

5、 拱脚、边墙脚联接槽钢应按正确位置置平于原状土（石）上，并与格栅拱焊接牢固。当拱脚、墙脚标高不准时，只能用片石垫平槽钢或设置钢板调整。

6、 格栅拱喷射砼保护层厚度不小于2㎝。

D、 喷射砼施工

用压缩空气将掺有速凝剂的砼拌合料通过砼喷射机高速喷射到开挖成型的隧道岩面上迅速凝固而起支护使用。

喷射砼可分为干喷、潮喷、湿喷三种方式。本隧道采用湿喷法。

喷射砼作业需肜的机具设备：砼喷射机、空气压缩机、搅拌机、上拌机具、供水设施。

（一）、喷射砼的原材料和配合比

1、 原材料：①水泥采用325#普硅水泥；②砂一般用坚硬耐久的中砂或粗砂，砂的含水率以5~7%为宜；③石子采用坚固耐久的碎石或卵石，粒径小于15㎜；④水：用洁净水；⑤速凝剂：采用BR型外加剂。

2、 配合比的选定：施工中选定，开始时采用1：198：202

（二）、喷射砼施工

注：冬季施工时，水需加热50～60℃

1、 场地布置：

搅拌机一般布置在洞外，通过运输车运入洞内，然后给料于喷射机，同时应设晴雨棚，以控制砂石的含水率。

2、 清理工作面

喷射砼肖，应认真检查开挖断面尺寸，欠挖者应予以凿除，修整断面，清理浮石及拱脚的虚碴等。

3、 喷射砼作业

①混合料的备制

a 混合时，各种材料应按配合比准确称量；

b 采用强制式密封搅拌，时间不少于90秒；

②机具就位

机具安装在围岩稳定地段，保证输送线路通畅。未上料前，先进行砼喷射机试运转：开启高压风及高压水，如喷嘴风压正常喷出的风水呈雾状，如喷嘴风压不足，可能出料口堵塞，如喷嘴不出风，则可能输料管堵塞。有故障及时排除，待喷射机运转正常后才能进行喷射作业。

③喷射砼作业要点

a、 喷前应用高压风或高压水清洗岩面，将附着在岩面上的粉尘、硝屑冲洗干净，以保证砼与岩面粘结牢固。若用高压水清洗会引起岩面软化时，只能用高压风清扫岩面杂物（视地质情况而定）。

b、 严格掌握规定的速凝剂掺量，并添加均匀；

c、 喷射机工作风压一般控制在02~04MPa；

d、 喷射手严格控制水灰比，使喷层表面平整光滑，无干斑或滑移流淌现象；

e、 喷嘴的方向应与受喷岩面垂直，喷嘴与受喷岩面距离保持在06~10米范围；

f、 喷嘴移动轨迹应因地制宜，横条、竖条、圆圈等应交替使用，移动速度要慢，让砼“堆”起来，有了一定厚度再移开，然后逐块扩大其喷射范围；

g、 喷射顺序一般采用先下后上，先墙后拱；

h、 一次喷射厚度一般拱部为3~5㎝，边墙为6~8㎝；

i、 凹凸不平时应先将凹处喷平，按正常顺序喷射，以减少回d；

j、 有钢筋网时，宜使喷嘴靠近钢筋，喷射角度也可适当偏一些，喷射砼应覆盖钢筋；

k、 有钢架时，钢架与围岩间隙必须以喷射砼充填密实，喷射砼应将钢架覆盖，并应由两侧拱脚向上喷射；

l、 喷完或间歇时，喷嘴应向低处放置，一工班结束，要拆开喷头，取出水环，用水清洗干净，疏通水眼，以备下一班使用。喷完后，喷射机具均应清洗、保养，以保证机具处于完好状态。

④喷射砼的工艺参数：

a、 工作风压：一般为02~04MPa；

b、 喷射角度与喷射距离

喷射料束与受喷面垂直时，回d量最小；

喷头与受喷面距离一般宜保持在06~10m；

c、 一次喷射砼的厚度：一般拱部为3~5㎝，边墙为6~8㎝；

d、 水灰比：喷射手应把水灰比控制在04~045，使喷层平整光滑，无干斑或滑移流淌现象；

e、 两次喷射的间隔：

两层砼的喷射时间间隔太短，会由于前一层砼未达到强度而拉裂坠落，间隔时间过长，又会影响施工效率，较合理的间隔时间是前一层砼终凝，并达到一定强度后再复喷，一般可在20分钟以后进行。

f、 养护（干燥处）：喷射砼由于喷层内外部分干燥条件有异，必须进行养护，《规则》规定：喷射砼终凝后两小时起即开始养护，养护不得少于7天。

g、 水压：喷头处水压控制在015~02MPa；

h、 速凝剂：掌握规定的掺量，并添加均匀。

4、 需注意的问题

①喷射机的合理使用

启动喷射机时，应先送风再开机，并应在机械运转正常后送料，供料均匀连续。作业结束时，先停止送料，待罐内余料喷完，再停机，然后关风。停止喷射作业后，喷射机和输料管内的积料应及时清除干净，以避免混合料结块堵管。

②输料管堵塞问题

堵管的一般原因不外乎以下几种：

a、 混合料中混入超规定粒径的石子、水泥硬块或其它杂物。

b、 *** 作程序有误，如先开马达后送风，或砂子含水率过高， *** 作阀错开，致使高压风大量泄出，使工作室内风压急剧下降，也会引韦输料管堵塞 。

c、 如遇堵客，应立即关闭马达，随后关闭风源，并将软管拉直，然后 以手锤敲击找到堵塞位置，可将风压开到03~04MPa，同时继续敲击堵塞部位，使其排除堵塞物而畅通。排除堵管现象时，应注意喷嘴前方严禁站人，以免发生伤人事故。

③回d问题

影响回d率的各种因素有：混合料配合比、水灰比、砂子含水率、工作风压、水压、喷射距离、喷射角度、 *** 作方法及熟练程度等。针对各种因素，采取相应的措施降低回d率。《规则》规定正常情况下的回d率，一般拱部为20~30%，边墙为10~20%。

④粉尘问题

a、 控制砂石料含水率：当含水率控制在5~7%时，作业时的粉尘浓度可控制在15mg/ m³以下；

b、 加强通风；

c、 加长拢料管：即在喷嘴水环到出口之间接一段05~1m长的管子，使干料与水混合后有一个充分湿润和混合的过程，这对降尘和提高砼质量都较为有利。

d、 严格控制工作风压：风压过高，进料速度过快，在喷头处加水不容易均匀，风压过高不仅增加回d量，而且也会提高粉尘浓度。

⑤安全及劳动保护：

施工中注意喷嘴不准对人，以免喷射伤人，喷射前先进行清理浮石、危石等必要的排险作业；喷射机一定要安放在围岩稳定或已衬砌地段。

喷射砼施工人员必须佩戴防尘口罩等， *** 作喷头和注浆管的工人应佩戴防护眼罩，夹胶工作服、长筒乳胶手套等。

确定电子天平的检定标尺分度值e非常关键，因为e是用来评定其准确度级别以及最大允许误差的依据：

在计量检定中若各项参数指标的最大示值误差均不大于1d，我们确定e=d；如果各项参数指标最大示值误差均小于10d，我们确定e=l0d。

有时还需根据具体情况而定，比如当d：0．2mg时，e=5D；d：0．5mg时，e=2d。

总之，在对检定标尺分度值的划分上应按照以下形式：1×10k或2×10k或5×10k，k为正整数、负整数或零）。

扩展资料

电子天平各载荷点的最大允许误差的检定：首先开机预热，然后按照说明书的 *** 作程序对电子天平进行校准（这一步很关键），校准完毕，显示零位。

从零载荷开始，逐渐单调往上加载，直至加到天平的最大称量值时，然后再逐渐单调卸载，直至零载荷为止。

在检定过程中，由检定 *** 作人员视天平具体情况选取载荷点（这在检定规程中未明确给出），但以下几个载荷点应必须进行检定。

维护保养

1、将天平置于稳定的工作台上避免振动、气流及阳光照射。

2、在使用前调整水平仪气泡至中间位置。

3、 电子天平应按说明书的要求进行预热。

4、称量易挥发和具有腐蚀性的物品时，要盛放在密闭的容器中，以免腐蚀和损坏电子天平。

5、经常对电子天平进行自校或定期外校，保证其处于最佳状态。

6、如果电子天平出现故障应及时检修，不可带“病”工作。

参考资料来源：百度百科-电子天平

随着养殖业的飞速发展和广大养殖户科学意识的不断提高，人们普遍认识到实验室检测技术在临床应用的重要性，发病率越来越高。下面我为大家整理了关于血凝的实验报告，希望对你有锁帮助！

篇一：禽流感血凝和血凝抑制试验

禽流感血凝-血凝抑制试验 *** 作方法及注意事项

禽流感血凝和血凝抑制试验可用于血清中抗体水平的监测，也可用于判断未使用疫苗群体的感染状态等。该试验是目前世界卫生组织和国际动物健康组织进行全球流感监测所普遍采用的方法，而且因其具有经济、快速、可靠、 *** 作简便、能够处理大量的样品，并能在短时间内报告禽流感抗体水平等优点，已经成为当前基层兽医实验室禽流感疫病监测和免疫抗体检测中最为常用的方法。但因该试验受人为 *** 作影响较大，经常因 *** 作不规范、不严谨等造成结果偏差大、重复性差等问题，现根据几年来的工作经验对该试验过程中应注意的事项做一探讨。

一、 血凝试验 *** 作程序

1、取96孔90°V形酶标板，用微量移液器在第一至第五排的1~12孔每孔加25 μL PBS液。

2、吸取25 μL标准禽流感抗原加入到第一排第1孔中充分混匀。

3、从第1孔吸取25 μL混匀后的抗原液加到第2孔中，混匀后吸取25μL加入到第3孔中，依次进行倍比稀释至第二排最后一孔即第24孔，最后弃去25 μL。第三排孔至第四排孔同上 *** 作。

4、依次向第一至第五排孔的每孔中加入25 μL 1%的鸡红细胞悬液。

5、将酶标板置于微量振荡器上振荡10秒，室温（20-25℃）静置30 min观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下）。

6、结果判定：将板作45°倾斜，观察红细胞是否呈泪滴状流淌。以完全凝集（不流淌）的抗原或病毒最高稀释倍数为1个血凝单位（HAU）

二、血凝抑制试验 *** 作程序

1、根据血凝试验结果配制4HAU抗原。（即1HAU抗原除以4）

2、取96孔V形酶标板，用移液器在第1~12孔各加入25 μL PBS。

3、在第1孔加入25 μL被检血清，充分混匀后移出25 μL加至第2孔，依次类推，倍比稀释至第12孔，弃去25 μL。

4、按以上步骤加入阳性血清和阴性血清（各做两份），作对照孔。

5、在第1~12孔各加入25 μL 4单位抗原，置于微量振荡器上轻轻混匀，室温20-25℃下静置30 min。

6、每孔加入25 μL 1%的鸡红细胞悬液。置于微量振荡器上轻轻混匀，室温（20-25℃）静置40 min后观察结果，若环境温度过高，可于4℃条件下进行，红细胞将呈明显的纽扣状沉到孔底。

7、结果判定：只有阴性对照孔血清滴度不大于2 log2，阳性对照孔误差不超过1个滴度，试验结果才有效。 将酶标板作45°倾斜，以完全抑制红细胞凝集的最大稀释倍数判为该血清的血凝抑制滴度。当被检血清效价大于等于4log2，判为禽流感抗体阳性。

三、试验过程中的注意事项

1样品的保存及试验前处理

11 采集的血液样品应及时分离血清，最好分装至离心管中，标记清楚，离心后吸出血清，对应编号冷藏送检，并禁止运输过程中剧烈震动。

12 一般情况下，在5天内检测的样品可放置在4℃的冰箱中冷藏，否则低温冷冻保存。

13 在检测前血清样品应充分混匀，混匀时采用上下缓慢颠倒几次的方法即可，切忌剧烈振荡而引起产生气泡及血清中蛋白变性。

14 对出现胶冻状的血清样品，可采用反复搅动几下再离心的方法有助于缓解该状态。胶状物是含纤维蛋白和纤维蛋白原的血清，可能是由于放置时间不够造成的血清未完全析出状态。不建议直接吸取其中少量的清亮血清。

15 水禽等样品为排除非特异性反应，还应相应进行灭能反应。具体 *** 作方法：56℃水浴锅30min或加等量10%鸡红细胞，轻摇后静置30分钟，离心，收集上清液即可。

2器材的选择

21 酶标板的选择：

建议使用96孔90°V型板进行试验，通过反复试验证明：90°V型板相对于110°板及130°板来讲，具有红细胞沉降速度快，产生的凝集图像清晰、结果容易判定等优点。

22 移液q的选择及使用：

①单道、多道可调微量移液q应选择合适的量程，以便精确度的提高。

②使用时应采用一档吸液二档排液的方法。吸取液体时，q头要深入液下缓慢平稳吸液。加缓冲液时

应加在板孔底部。倍比稀释血清时，应每孔至少反复吹吸6次，以便混合均匀，还应注意尽量避免产生泡沫引起混合不均。加抗原及红细胞时应在板内液面上方加样，以免交叉污染，影响试验结果。

③加样、倍比稀释时应高度集中注意力，以免漏加、重复加样等。

3试剂的保存及配置

31 禽流感血凝抑制试验所用的抗原、阳性血清应严格按照说明书的要求进行保存和配置，试验前应提前将其恢复至室内温。抗原的保存温度为-20℃，反复冻融会降低抗原的滴度，应避免反复冻融。

32 PH72、001mol/L的PBS液的制备

①应尽量现用现配

②每次使用前应测PH值，以免时间过长而导致PH值发生改变。

③由于PH试纸跨度范围偏大，PH值不易准确介定，因此最好采用酸度计准确测量PH值，以提高试验的精确度。

④全部试验均采用同一种稀释液。

33 1%红细胞的制备

①为避免有些鸡只的红细胞有自凝现象，因此配制1%红细胞悬液时应最好选择采取2-3只SPF鸡或未进行过任何免疫过的成年公鸡血液。当然采血的前提条件是要按十分之一采血量比例在一次性注射器中加入抗凝剂，如肝素、枸椽酸钠、柠檬酸钠等。

②采血完毕后最好分装至2ml容量的圆底离心管中，因为通过2ml与15ml两种容量离心管相比较，放入15ml尖底离心管中的话，离心后，离心管底部红细胞不易与加入的PBS液混匀，易沉积在管底部，达不到洗脱干净的目的。

③经2000~3000r/min，5~10min，弃去上液和红细胞上层的白细胞薄膜，再加入十倍以上血量的PBS液，上下缓慢颠倒（切忌用力过大使红细胞破裂），使其充分混匀，再离心弃去上清液，反复几次直至上清液清亮透明为止。

④在加红细胞过程中还须不断轻摇以确保红细胞均匀，使其每孔加入相同数量的红细胞。

⑤制备好的红细胞液如果放置后上清液变红，说明有溶血，不可再使用。

34抗原液的配制

①先做血凝试验测定效价，以抗原与红细胞完全凝集的孔为1HUA抗原，配制4HUA抗原应往前推算两孔，即除以4后的值。

②每次做试验前，必须重新检测禽流感抗原的血凝效价，以免效价发生改变而导致抗原稀释倍数不准确，从而导致试验结果不准确。

③为保证配制的抗原准确，还要进行抗原回滴试验。具体方法：做二排抗原回滴，在两排的第1~8孔各加25微升PBS，取4HAU抗原25微升加在两排的第1、第2孔，混匀，从第2孔倍比稀释至第4孔，弃去25微升，另一排同样。从第2至第8孔补25微升PBS，以保持75微升总量不变，另一排同样。两排的第1至第8孔各加25微升1%红细胞，震荡10秒钟。静置30分钟观察结果。这样在第1孔为4HAU抗原，第2孔为2HAU抗原，第3孔为1HAU抗原，第4孔为1/2HAU抗原，均为75微升总量，第5至第8孔为空白对照。如果抗原回滴试验不成立，应相应调整抗原浓度直至回滴试验成立。因为如果抗原浓度过高，则所测定的抗体效价水平偏低，如果抗原浓度过低，则所测定的效价偏高。所以不调整抗原浓度至实验成立的话会对结果有很大影响。

4结果的判定

每次试验必须设阳性及阴性（空白）对照血清，判别试验是否成立。判读结果时，将酶标板倾斜45°，以孔底沉淀的红细胞流动性好，呈泪珠样流淌，边缘无凝集颗粒为凝集完全抑制。

5试验器具的清洗

每次试验完毕后，应将酶标板中液体甩净，然后用自来水反复冲净每个孔，再放入3%NaOH中4小时，清水反复冲净，再放入3%Hcl中4小时，清水反复冲净，再用蒸馏水反复冲洗几次，甩干水份，入干燥箱中干燥备用。实验用烧杯、加样槽、量筒等也应充分洗净、干燥。以免器具内有杂物、污物以及残留物从而影响试验结果。

四、小结

在进行禽流感血凝抑制试验时，应充分考虑到各方面的影响因素，提供的检测结果才会真实可靠，准确掌握禽类的'免疫抗体水平，进而为科学防控禽流感提供理论依据。

篇二：血凝抑制试验

血凝抑制（HI）试验简介

（以禽流感病毒为例）

一、原理

流感病毒颗粒表面的血凝素（HA）蛋白，具有识别并吸附于红细胞表面受体的结构，HA试验由此得名。HA蛋白的抗体与受体的特异性结合能够干扰HA蛋白与红细胞受体的结合从而出现抑制现象。

二、应用

该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。可用于流感病毒分离株HA亚型的鉴定，也可用来检测禽血清中是否有与抗原亚型一致的感染或免疫抗体。

三、缺点

只有当抗原和抗体HA亚型相一致时才能出现HI现象，各亚型间无明显交叉反应；除鸡血清以外，用鸡红细胞检测哺乳动物和水禽的血清时需要除去存在于血清中的非特异凝集素；需要在每次试验时进行抗原标准化；需要正确判读的技能。

四、试验步骤

1  阿氏（Alsevers）液配制

称量葡萄糖205g、柠檬酸钠08g、柠檬酸0055g、氯化钠042g，加蒸馏水至100mL，散热溶解后调pH值至61，

69kPa 15min高压灭菌，4℃保存备用。（38%枸橼酸钠（38g枸橼酸钠，100ml超纯水），101 kPa,20min高压灭菌，4℃保存备用,保存期1个月）。

2  10%和1%鸡红细胞液的制备

21采血

用注射器吸取阿氏液约1mL（38%枸橼酸钠），取至少2只SPF鸡（如果没有SPF鸡，可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡），采血约2～4mL，与阿氏液混合（38%枸橼酸钠），放入装10mL阿氏液（生理盐水）的离心管中混匀。

22 洗涤鸡红细胞

将离心管中的血液经1500～1800 r/min 离心8分钟，弃上清液，沉淀物加入阿氏液（生理盐水），轻轻混合，再经1500～1800 r/min离心8分钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复2次以上过程后，加入阿氏液20 mL（生理盐水），轻轻混合成红细胞悬液，4℃保存备用，不超过5天。

23  10%鸡红细胞悬液

取阿氏液保存不超过5天的红细胞，在锥形刻度离心管中离心1500～1800 r/min 8分钟，弃去上清液，准确观察刻度离心管中红细胞体积(mL)，加入9倍体积(mL)的生理盐水，用吸管反复吹吸使生理盐水与红细胞混合均匀。（此步

可省略，直接配制1%红细胞）

24  1%鸡红细胞液

取混合均匀的10%鸡红细胞悬液1 mL，加入9 mL生理盐水，混合均匀即可。（根据检测血清的数量，估算一下需要的1%鸡红细胞量，可按03ml/每份血清）

3 抗原血凝效价测定（HA试验，微量法）

31 在微量反应板的1孔～12孔均加入25μl PBS（生理盐水），换滴头。

32吸取25μl抗原加入第l孔，混匀。

33从第1孔吸取25μl，病毒液加入第2孔，混匀后吸取25μl加入第3孔，如此进行倍比稀释至第11孔，从第11孔吸取25μl弃之，换滴头。

34每孔再加入25μl PBS（生理盐水）。

35每孔均加入25μl 体积分数为1%鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入）。

36振荡混匀，在室温（20～25℃）下静置40min后观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下反应1小时）。对照孔红细胞将呈明显的钮扣状沉到孔底。

37结果判定  将板倾斜，观察血凝板，判读结果（见下表）。

表1：血凝试验结果判读标准

能使红细胞完全凝集（100%凝集，++++）的抗原最高稀释度为该抗原的血凝效价，此效价为1个血凝单位（HAU）。注意对照孔应呈现完全不凝集（-），否则此次检验无效。

4 血凝抑制（HI）试验（微量法）

41 根据3的试验结果配制4HAU的病毒抗原。以完全血凝的病毒最高稀释倍数作为终点，终点稀释倍数除以4即为含4HAU的抗原的稀释倍数。例如，如果血凝的终点滴度为1:256，则4HAU抗原的稀释倍数应是1:64（256除以4）。

42 在微量反应板的1孔～11孔加入25μl PBS（生理盐水），第12孔加入50μl PBS（生理盐水）。

43 吸取25μl血清加入第1孔内，充分混匀后吸25μl于第2孔，依次倍比稀释至第10孔，从第10孔吸取25μl弃去。

44 1孔～11孔均加入含4HAU抗原25μl，室温（约20℃）静置至少30min。

45 每孔加入25μl 1%的鸡红细胞悬液混匀，轻轻混匀，静置约40min（室温约20℃，若环境温度太高可置4℃条件

下进行），对照红细胞将呈现钮扣状沉于孔底。

46 结果判定

试验成立的条件：只有阴性对照孔血清滴度不大于21og2，阳性对照孔血清误差不超过1个滴度，试验结果才有效。

以完全抑制4HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。

HI价小于或等于31og2判定HI试验阴性；HI价大于或等于41og2为阳性。

五、HI试验注意事项

1、合理选择抗原和对照阳性血清。针对Re-4和Re-5株疫苗免疫采用相应抗原和对照阳性血清。

同一亚型的禽流感病毒制成的抗原，如果毒株来源不同，则可能会存在抗原性差异，从而使检测同一血清的结果有差别。一般来讲，疫苗种毒株如果与抗原所用毒株相同时，则所测得的HI效价较高。

2、合理使用和保存抗原。反应试剂要按规定保存和使用，冻干的试剂应按照说明中规定的体积重新溶解并保存。要避免杂菌污染，因为污染所造成的非流感起源的凝集素也可与所有抗血清发生非特异反应。为避免反复冻融和细菌污染，可以无菌 *** 作将试剂分装成小包装。

3、反应温度不能太高。若在37℃ （如温箱）下进行。

篇三：血凝和血凝抑制试验

随着养殖业的飞速发展和广大养殖户科学意识的不断提高，人们普遍认识到实验室检测技术在临床应用的重要性。下面简单介绍一下鸡新城疫微量血凝试验和血凝抑制试验的注意事项及 *** 作方法。

应用：

用于新城疫、产蛋下降综合征和传梁性支气管炎等的母源抗体的检测、雏鸡首免日龄的确定、疫苗免疫后的免疫应答的监测、临床鸡病的鉴别诊断等。

下面以新城疫病毒为例，介绍血凝和血凝抑制试验的方法：

注意事项：

一、样本要具有代表性：所采样本要能代表整体，通常采用四角加中间的随机取样法，并且确定适当的样品数量，一般1000只以下的鸡群采样率在2～5%；5000只以下1～2%；5000只以上05～1%。对产蛋期间的鸡群可采鸡蛋；对雏鸡或青年鸡，可采血。方法是：取青霉素小瓶，洗净后用蒸馏水冲洗、控干水分，并注意不要用消毒剂，以免影响结果。每只鸡采血量在1ml左右，最好不低于1ml，在室温下静置至血清自然析出。

二、四单位抗原的准确性：要获得准确的监测效果，先做红血球的凝集试验，即测得抗原的血凝价，尔后前移2孔作为四单位抗原的稀释度。

三、红血球洗脱的充分性：原则上，新城疫检测所用的红血球应来源于非疫苗免疫过的健康公鸡，但实际上却多采用免疫过疫苗的健康公鸡，有时甚至是病鸡。因此，对红血球的洗脱的次数要多、要充分，并注意转速和时间，通常采用五次变速离心法：前四次为每分钟1500转，每次5分钟，最后一次为每分钟3000转，持续7～8分钟。另外，洗红血球过程中，应注意动作要轻，玻璃仪器之间尽量减少碰撞，以免造成红血球破裂而影响结果。

四、结果判定的及时性：检测中，每次试验均应设抗原与生理盐水对照，加入红血球后，每隔5分钟观察一次，一旦两列对照孔图像清晰地显示出来时，应立即对样本进行结果判定，过早过晚都会影响判定结果的准确性。

血凝与血凝抑制试验的 *** 作方法

一、材料与仪器：新城疫抗原、1%鸡红血球、抗凝剂、生理盐水、被检血清、离心机、吸管、滴管、洗耳球、烧杯、量筒、注射器、长针头、96孔V型医用血凝板、微量移液器、微量振荡器、恒温培养箱、冰箱等。

二、方法：

1%鸡红血球的制备：

1用长针刺入鸡心脏或翅下静脉，采血，采血量视用量而定，5%抗凝剂与全血的比例为1∶3～4。

2洗血球：共洗4～5次，每次5～8分钟，红血球与生理盐水的比例至少为1∶2～3。离心机转速为每分钟1500～3000转，最后倾去上清。

3吸红血球泥1ml加生理盐水99ml，配成1%红血球备用。

三、血凝试验：

1血凝板上12个孔内全部加入生理盐水，每孔005ml，吸等量新城疫抗原于第一孔内，混匀后吸出同量于第二孔内混匀，以此类推稀释至第11孔，并弃去005ml，留第12孔作为生理盐水对照，然后全部孔内加入1%鸡红血球。

2将血凝板置于振荡器上振荡1～2分钟，使材料充分混均，放入恒温培养箱，每5分钟观察一次，至10～15分钟取出，一般以生理盐水对照孔的图象清析地出现为准。

3结果判定：红血球在反应板底部全部均匀铺开为完全凝集（++++），在血凝板底部集为一小红点为沉淀（－），如底部为一小红点，四周为凝集的红细胞，则为不完全凝集（++）。

4出现完全凝集的抗原的最高稀释度，即为该抗原的凝集价。

5四单位抗原的制备：血凝试验的结果如为28（256），则前移2孔即26（64），作为四单位抗原的稀释度。即：63ml生理盐水+1ml抗原即为四单位抗原。

四血凝抑制试验：

1血凝板上1～11孔全部加入005ml的生理盐水，于第一孔内加入等量的被检抗体，稀释至第10孔，弃去005ml，再加入等量的4单位新城疫抗原至第11孔，第11孔为抗原对照，12孔为生理盐水对照。在振荡器上振荡1～2分钟，放置室温约20分钟，然后加入等量的1%鸡红血球，振荡后放入恒温培养箱大约10～15分钟后进行结果判定。

2结果：能完全抑制红细胞凝集的被检抗体的最高稀释度为该被检抗体的血凝抑制滴度。

注：1、HI价在23～24时免疫可产生良好的免疫应答，如在疫区可提高到24～25免疫。

2、24～25<HI<210时为最好。3、如HI价高于211则为强毒污染。

注：#为完全抑制，++为不完全抑制，－为不抑制。

在一般杂质检查工作中，减少错误是非常重要的，可以提高工作效率和产品质量。以下是一些减少错误的方法：

建立标准 *** 作程序：制定标准 *** 作程序，明确每个步骤的 *** 作规范和要求，避免 *** 作人员因为个人习惯或疏忽而导致错误。

培训 *** 作人员：对 *** 作人员进行培训，提高其 *** 作技能和质量意识，让其了解每个步骤的重要性和影响，避免因为 *** 作不当而导致错误。

使用合适的工具和设备：使用合适的工具和设备，可以提高工作效率和减少错误率。例如，使用高精度的检测仪器和设备，可以减少误差和漏检。

进行交叉检查：在检查过程中，可以进行交叉检查，即由不同的人员进行相互检查，避免因为个人疏忽而导致错误。

建立反馈机制：建立反馈机制，及时发现和纠正错误，避免错误积累和扩大。

不断改进：不断总结和改进工作方法和流程，提高工作效率和减少错误率。

总之，在一般杂质检查工作中，减少错误需要从多个方面入手，包括建立标准 *** 作程序、培训 *** 作人员、使用合适的工具和设备、进行交叉检查、建立反馈机制和不断改进等。只有全面考虑，才能有效减少错误率，提高工作效率和产品质量

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