魔兽世界怀旧服：TAQ变简单了，为什么还是出现了AFK大潮？

魔兽世界怀旧服在开服一年多以后，即将在2020年12月3日，迎来经典60年代的收官副本-第六阶段纳克萨玛斯大墓地（NAXX）。在差不多的时间段内，魔兽世界正式服也将上线全新的90版本-暗影国度。囧王者估计，在即将到来的12月份里面，魔兽世界将迎来一次大规模的回归大潮。

如果说正式服的回归大潮，是因为有部分玩家去了怀旧服，部分玩家是真的AFK了。那么，为什么怀旧服在NAXX阶段，也会迎接一批回归大潮呢？第五阶段安其拉神殿不是变简单了，成为了给大家送装备和金币的便当本了吗？为什么还是有大量玩家选择AFK呢？

今天咱们不聊DKP，也不聊金团，今儿咱们专门来聊一聊，为什么TAQ变简单了，但还是有大量的玩家选择AFK吧。

为什么安其拉神殿便当了，仍然有大量玩家选择AFK呢？

当怀旧服还在黑翼之巢和祖尔格拉布阶段的时候，当时就有许多“老玩具”预言：安其拉神殿副本，会由于其冗长的流程和恶劣的抗性需求，而劝退一部分玩家（当然，囧王者当时也这样说过，惭愧）。结果不曾想，TAQ副本在十多年后强大的光纤网络，电脑硬件和插件多重Debuff影响下，再加上经验老到的玩家利用各种黑科技，让安其拉神殿在2个CD以后，彻底成为了便当本。现在如果你们团，在2个小时以后不能通安其拉的话，你都不好意思吹牛皮。

但是为什么在这么简单的TAQ版本中，魔兽世界怀旧服依然有大量的玩家选择AFK呢？其实囧王者所在的公会和服务器，也面临这样的问题。这几天我和请假的，选择退团的，“AFK”的小伙伴聊了聊，总结了一下大家AFK的原因，无外乎以下几点：

第一，游戏内容变少，游戏模式越发单一。怀旧服现在看似每个阶段，都在不断地增加新内容，但实质上这些内容，都是当年老玩家经历过的，对于老玩家来说，这些内容不说是打吐了，也可以说是了然于胸。因此，对于这部分老玩家来说，怀旧服就是买买装备，回忆下青春岁月，副本寿命就很短。而且对于“老玩具”来说，消费能力远超当年，当年可望而不可求的装备，现在只要肯出价，就没有拿不到的。拿到装备后，自然也就乏了，阶段性AFK，可以想象。第二，进入5G的移动时代之后，玩家的游戏体验节奏加快了。而且现在不比以往，十多年前魔兽世界傲视群雄一览众山小，你不玩魔兽就没有精品游戏玩。而现在呢？诱惑太多，MOBA游戏的兴起，手游的便利性，碎片化时间充分利用，“老玩具”们时间的宝贵性等，都制约了魔兽世界怀旧服的进一步发展。现在打个副本，无论DKP还是金团，各种39等1个回家上线的；各种38等2个骑士的；各种因为别人做饭，拿外卖，加班的。一个人一分钟，体验全无，你A了，我A，大家一块AFK了。第三，游戏简单化，直接导致AKF。十多年前，魔兽世界刚开始那会儿，全民都在做任务练级，组队打小副本，做各种门任务，装备的数值都还在可控范围内。那个时候，体验艾泽拉斯大陆是大家最大的乐趣，这也造就了当年的Slogan“魔兽玩家，比别人多一个世界”，那个时候是游戏乐趣最大的时候。而现在呢，起小号基本都是站着升级，到了满级搞一套T25简单快餐。以前所有的乐趣，几乎都不会再去回味。每周清完CD，就世界Buff下线等CD，游戏乐趣全无，变成了纯粹的打工游戏。一旦玩家从这种循环中自我解脱出来，AFK成为了他们唯一的选择。第四，金价。坦率地说，囧王者并不认为，怀旧服中金价的崩盘会导致玩家AFK。老玩具们，其实对于金价，并不敏感。无论怀旧服金价如何膨胀，只要暴雪和网易还在运营，金价就没有崩盘，玩家就可以玩下去。但不排除金价膨胀，会劝退一些LightUser，但这些人的数量，肯定不会太大。

因此综上所述囧王者认为，怀旧服TAQ副本中，有大量玩家AKF的原因，其实就是难度过低，内容较少，劣币驱逐良币现象普遍存在。虽然怀旧服中，休闲玩家数量众多，但是必须要承认的是，缺乏核心内容的怀旧服，休闲玩家越多，其实越不稳定。毕竟，休闲玩家，随时都可以AFK，没有一个高黏性的玩法，让休闲玩家保持热度，是怀旧服在TAQ阶段出现大量玩家AFK的主要原因。

1、taq开门在精神谷路边捐物资。

2、物资捐献出现在服务器玩家第一次完成xlss的团队任务《召唤》之后。收集物资的人部落出现在精神谷，联盟出现在军事区，头上一堆大叹号的人就是。

3、物品分五个等级，捐献物品和获取的箱子等级对应。例如捐献瑟银锭/硬甲皮/符文布绷带等可以获得50级左右的箱子，捐献秘银锭/厚皮/魔纹绷带等可以获得40级左右箱子，而铜锭/轻皮/亚麻绷带等则只能或者10级左右的箱子。

4、箱子里是对应等级的装备，一般是绿色的，蓝色的概率大概在15-2%之间，开出武器的概率更小。

5、每次捐献的量为1组，皮因为堆叠数目变化，现在的一组皮（20个）可以捐2次，绷带是普通的那种，npc不要厚的。

1986年，Mullis先生正式公布了PCR技术的论文（Mullis, 1986），从此开启了现代分子生物学的大门。当时，由于使用的是大肠杆菌聚合酶I（Klenow），每个循环都需要补充新的聚合酶， *** 作十分麻烦。1988年，Saiki等（Saiki, 1988）将一种从 Thermus aquaticm 分离出的耐热型DNA 聚合酶用于PCR技术，成功完成了DNA的自动扩增，这个聚合酶就是“大名鼎鼎”的Taq DNA聚合酶。Taq DNA聚合酶的发现，使PCR变成一种便利的、普遍的实用分子生物学技术。

30多年来，越来越多的其它的优秀的耐热型DNA聚合酶用于PCR技术，比如Pfu系列、Vent系列、KOD系列，但Taq DNA聚合酶始终是PCR聚合酶的主力军。到目前，Taq仍然是市场份额最大，种类最繁多，应用最广泛的热稳型DNA聚合酶。Taq聚合酶缺乏3’-5’校正活性，但具有5’-3’外切活性和末端加A的特点，在sanger测序、qPCR、TA克隆等领域具有独特的应用。同时，研究人员对Taq DNA聚合酶的改造也从未停止，这正是Taq DNA聚合酶在PCR应用中生生不息的根本动力。下面，我就来介绍一下Taq DNA聚合酶的应用及改造历程。

Taq DNA聚合酶是从一种叫做水生栖热菌（ Thermus aquaticus ）的嗜热细菌中分离出来的（Chien, 1976），这种细菌是从美国黄石国家森林公园的火山温泉中分离得到的，生长在70-75℃极富矿物质的高温环境中（Brock, 1969）。因此，Taq DNA聚合酶具有极高的热稳定性，或许能够承受PCR的热变性步骤。1988年，Saiki等将Taq DNA聚合酶用于体外PCR扩增，不但实现了PCR自动化，还因为提高了退火和延伸温度而提高了产物特异性。这个研究鼓励了更多的技术人员使用Taq DNA聚合酶进行PCR，1989年，Lawyer等利用特异性探针从Taq DNA聚合酶基因文库中钓取了Taq DNA聚合酶全长基因，最终得到一个2499bp的编码序列，GC%高达68%，他们将该基因克隆到大肠杆菌中，通过诱导表达和分离纯化得到纯的Taq DNA聚合酶。

Taq DNA聚合酶全长832aa，相对分子量94KD，预测的等电点约为60，理论总平均亲水指数为-0282。现将其酶学特点罗列如下：

① 良好的耐热型，最适催化温度在75-80℃，95℃半小时后仍保留50%以上的活性。Taq DNA聚合酶是Mg 2+ 依赖型聚合酶，最适浓度范围是2-4mM。Taq DNA聚合酶还需要单价阳离子，在10-55 mM KCl中具有最大活性。有研究认为Na + 会抑制聚合酶活性，但有些研究中聚合酶在Na + 环境中也能够正常扩增。

② 5'-3'聚合活性，该特性对温度具有较高的敏感性，70℃时，Taq DNA聚合酶能够以60nt/s的速率聚合DNA链，55℃时降为24nt/s，37℃时为15nt/s，22℃时基本停止扩增（Innis, 1988）。

③ 5'-3'外切核酸酶活性，Taq DNA聚合酶是少数具有这一活性的DNA聚合酶之一。1991年，Holland等（Holland, 1991）利用Taq DNA聚合酶的5'-3'外切活性切除5’端放射性标记的DNA探针，通过放射性信号的变化，实现PCR产物的特异性检测。这一研究，为qPCR技术的发展奠定了基础，从此，Taq DNA聚合酶也成了探针法qPCR技术的指定聚合酶。

④ 部分PCR产物3’末端加A，1988年，Clark等发现Taq DNA聚合酶会在新生链的3’末端添加无模板核苷酸，这一特征使Taq DNA聚合酶的PCR产物能够直接用于TA克隆。但是实际应用时，情况要复杂得多， 1993年，Hu等报道了8种聚合酶3’末端延伸的情况，发现Taq DNA聚合酶在PCR产物的3’末端添加A或其它碱基。1996年，Magnuson等系统性研究了Taq DNA聚合酶3’末端加A的概率，发现3’末端加A并不高，与反向引物5’端碱基种类密切相关，他们还指出这种不完全的碱基添加不利于在等位基因分形和TA克隆。

⑤ 无3'-5'校正活性，虽然Taq DNA聚合酶与大肠杆菌聚合酶I有很高的结构相似性（包括3’-5’外切核酸酶结构域），但它缺乏3'-5'外切核酸酶活性，这降低了其在PCR扩增中的忠实性。关于Taq DNA聚合酶的错误率，不同的报道差异很大，Tindall等（Tindall, 1988）测定的突变率为1/9000，Cline等（Cline, 1996）测定的突变率为80±39×10 -6 。这种差异的原因有两个：一、测试方法不同，比如lacZα和lacI，二、酶纯度和实验条件有差异。抛开这些错误率数据，实事求是的讲，我使用Taq DNA聚合酶多年，用于一般性扩增保真性还可以，一般1-25kb的目标片段，挑取两个克隆基本能得到正确的克隆。用于困难模板扩增时，错误率较高，挑取4-6个克隆子基本也能得到正确克隆。

( 上述所列的酶的催化性能参数，在不同的研究中是有较大变化，因为可能使用的酶纯度不同，或者使用的buffer不同，模板、引物、仪器、反应体系甚至PCR管壁的薄厚都会导致PCR表现的差异。这些数据只是一个参考，实际使用中应以试验结果为准。 )

Taq DNA聚合酶属于聚合酶家族A，是一个单体酶，它与大肠杆菌聚合酶I（pol I）具有很高的结构同源性。1995年，Kim等公布了Taq DNA聚合酶的晶体结构，为解释其耐热性、催化活性及分子改造奠定了基础，下面将其结构特点罗列如下：

① Taq DNA聚合酶包括三个结构域，1-291：5'-3'外切核酸酶结构域，292-423：该结构域对应于pol I的3'-5'外切酶结构域，两者虽然具有结构相似性但无序列同源性，因此Taq DNA聚合酶不具有3'-5'外切活性，424-832：5'-3'聚合活性结构域。

② 5'-3'外切结构域是一个功能完整的独立结构域，该结构域的缺失不会使Taq丧失聚合活性，但对酶的催化性能有一些影响。Barnes（Barnes, 1992）构建了一个N端236aa缺失的Taq突变体，发现仍具有完整的聚合活性，且保真性有所提高。Lawyer等（Lawyer, 1993）发现N端289aa缺失的大片段耐热性比全长酶更高，且盐离子耐受能力也提高了，但持续合成活性降低十倍。Merkens等（Merkens, 1995）认为Klentaq持续合成能力的下降与5'-3'外切结构域结合DNA有关，结合作用阻止了酶与DNA底物的彻底解离，后来很多研究人员也支持这一观点。此外，5'-3'结构域还对Taq DNA聚合酶的底物特异性有很大影响，5'-3'结构域删除片段对引物3’端错配敏感性显著下降，对ddNTP的掺入能力增强。从三维结构上看外切结构域与聚合结构域距离很远（大于70Å），很难理解它是如何与聚合结构域协作的，Kim等也无法解释这个现象，他们推测5'-3'外切结构域在溶液中的位置与晶体中不同，要更接近聚合结构域。

③ Taq DNA聚合酶3'-5'外切酶结构域比pol I短，缺少4个长度8-27aa的loop结构，并且pol I中担负金属离子结合的关键残基D424、D501、D355、E357在Taq中被替换为L356、R405、G308、V310，酸性残基上的羧基能够与金属离子形成离子键，被替换后无法再与金属离子结合，Kim等推测这是Taq DNA聚合酶失去3'-5'外切酶活性的主要原因。

PCR技术改变了现代分子生物学，而Taq DNA聚合酶改变了PCR。随着技术不断的发展，PCR又细分为功能各异的种类，分别应用于不同的领域。在有些领域，比如高保真扩增，Taq DNA聚合酶被具有校正活性的酶取代，有些领域，如直接PCR、等位基因检测等领域，Taq DNA聚合酶还具有重要的应用，还有些领域，如Sanger测序、探针法qPCR、TA克隆，Taq DNA聚合酶仍不可替代，下面我就列举几个介绍一下。

Taq DNA聚合酶发现了几十年，不但没有被取代，反而在分子生物学领域具有越来越广泛的应用。这一方面依赖于它自身的功能和特点，另一方面也依赖于研究人员对其不断的进化与改造。通过定点突变、结构域重组、定向进化等技术，Taq DNA聚合酶获得了许多催化性能改善或展现新功能的突变体，拓宽了酶的应用范围，下面就来做一个回顾。

[1] Brock T D, Freeze H Thermus aquaticus gen n and sp n, a nonsporulating extreme thermophile[J] Journal of bacteriology, 1969, 98(1): 289-297
从黄石国家公园的各种温泉和加利福尼亚的温泉中分离出一种水生栖热菌，命名为Thermus aquaticus YT-1，该细菌是专性需氧菌，其最适pH为75至78。生长的最佳温度为70°C，最高为79°C，最低为40°C。
[2] Chien A, Edgar D B, Trela J M Deoxyribonucleic acid polymerase from the extreme thermophile Thermus aquaticus[J] Journal of bacteriology, 1976, 127(3): 1550-1557
介绍了一种从Thermus aquaticus分离出的DNA聚合酶，这种酶的最适温度为80℃，需要dNTP和镁离子，最适pH为80，分子量63KD-68KD。
[3] Sanger, F, Nicklen, S, and Coulson, A R (1977) DNA sequencing with chain-terminating inhibitors Proc Natl Acad Sci USA 74, 5463–5467
介绍了Sanger测序的原理、方法和应用。
[4] Mullis K, Faloona F, Scharf S, et al Specific enzymatic amplification of DNA in vitro: the polymerase chain reaction[C]//Cold Spring Harbor symposia on quantitative biology Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1986, 51: 263-273
介绍了在体外利用大肠杆菌pol I Klenow片段进行DNA扩增的方法。
[5] Tabor S, Richardson C C DNA sequence analysis with a modified bacteriophage T7 DNA polymerase[J] Proceedings of the National Academy of Sciences, 1987, 84(14): 4767-4771
介绍了利用T7噬菌体DNA聚合酶突变体进行DNA测序的效果，突变体的3’-5’外切活性的仅剩野生酶的001%，测序读长和均匀性显著改善。
[6] Tindall K R, Kunkel T A Fidelity of DNA synthesis by the Thermus aquaticus DNA polymerase[J] Biochemistry, 1988, 27(16): 6008-6013
介绍了基于lacZa的蓝/白色斑测定DNA聚合酶保真性的方法，测定了AMV Pol、Pol I(KF)和Taq的保真性。
[7] Saiki R K, Gelfand D H, Stoffel S, et al Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase[J] Science, 1988, 239(4839): 487-491
介绍了利用从Thermus aquaticus中分离的一种耐热型DNA聚合酶，进行体外DNA扩增的方法及效果。
[8] Innis M A, Myambo K B, Gelfand D H, et al DNA sequencing with Thermus aquaticus DNA polymerase and direct sequencing of polymerase chain reaction-amplified DNA[J] Proceedings of the National Academy of Sciences, 1988, 85(24): 9436-9440
介绍了Taq DNA聚合酶在PCR产物测序中的表现。
[9] Clark J M Novel non-templated nucleotide addition reactions catalyzed by procaryotic and eucaryotic DNA polymerases[J] Nucleic acids research, 1988, 16(20): 9677-9686
介绍了一些真核和原核来源（包括Taq DNA聚合酶）的DNA聚合酶，在无模板指导情况下，将脱氧核糖核苷酸添加到平端DNA底物的3'羟基末端的特征。
[10] Lawyer F C, Stoffel S, Saiki R K, et al Isolation, characterization, and expression in Escherichia coli of the DNA polymerase gene from Thermus aquaticus[J] Journal of Biological Chemistry, 1989, 264(11): 6427-6437
介绍了Taq DNA聚合酶的克隆、大肠杆菌表达及酶学特征研究。
[11] D'Aquila R T, Bechtel L J, Videler J A, et al Maximizing sensitivity and specificity of PCR by pre-amplification heating[J] Nucleic Acids Research, 1991, 19(13): 3749
介绍了一种提高PCR产量和特异性的方法：将模板与PCR试剂预先加热到高于退火温度的温度，在热块上混合后再进行PCR。
[12] Holland P M, Abramson R D, Watson R, et al Detection of specific polymerase chain reaction product by utilizing the 5'-3'exonuclease activity of Thermus aquaticus DNA polymerase[J] Proceedings of the National Academy of Sciences, 1991, 88(16): 7276-7280
介绍了利用Taq DNA聚合酶5’-3’外切活性切除放射性标记探针5’端碱基，通过放射性信号变化检测DNA的方法，促进了探针法qPCR技术的发展。
[13] Barnes W M The fidelity of Taq polymerase catalyzing PCR is improved by an N-terminal deletion[J] Gene, 1992, 112(1): 29-35
介绍了一个N端236aa缺失的Taq DNA聚合酶突变体KlenTaq，其保真性高于全长酶。
[14]Huang M M, Arnheim N, Goodman M F Extension of base mispairs by Taq DNA polymerase: implications for single nucleotide discrimination in PCR[J] Nucleic acids research, 1992, 20(17): 4567-4573
介绍了基于Taq DNA聚合酶检测SNP的原理：如果引物3’末端与模板不匹配，Taq DNA聚合酶扩增效率很低甚至无法扩增靶标基因。
[15] Lawyer F C, Stoffel S, Saiki R K, et al High-level expression, purification, and enzymatic characterization of full-length Thermus aquaticus DNA polymerase and a truncated form deficient in 5'to 3'exonuclease activity[J] Genome research, 1993, 2(4): 275-287
介绍了Taq全长和N端删除片段∆289-Taq（Stoffel片段）的克隆表达及酶学性质研究，结果∆289-Taq的热稳定性、盐离子耐受性高于全长酶，但持续合成降低10倍。
[16] Hu G DNA Polymerase-catalyzed addition of nontemplated extra nucleotides to the 3′ of a DNA fragment[J] DNA and cell biology, 1993, 12(8): 763-770
介绍8种来源于噬菌体、大肠杆菌、栖热菌、火球菌等生物的DNA聚合酶，无模板3'延伸的特点，指出末端延伸的碱基具有一定偏好性，与末端碱基种类有关。
[17] Sharkey D J, Scalice E R, Christy K G, et al Antibodies as thermolabile switches: high temperature triggering for the polymerase chain reaction[J] Bio/Technology, 1994, 12(5): 506-509
介绍了几种高亲和力的抗Taq DNA聚合酶单克隆抗体，37℃时能完全抑制Taq的活性，高温变性后又能够完全释放出Taq的活性。
[18] Scalice E R, Sharkey D J, Daiss J L Monoclonal antibodies prepared against the DNA polymerase from Thermus aquaticus are potent inhibitors of enzyme activity[J] Journal of immunological methods, 1994, 172(2): 147-163
介绍了九种不同的针对Taq DNA聚合酶重组体的单克隆抗体与Taq的免疫学作用。
[19] Barnes W M PCR amplification of up to 35-kb DNA with high fidelity and high yield from lambda bacteriophage templates[J] Proceedings of the National Academy of Sciences, 1994, 91(6): 2216-2220
介绍了通过混合Klentaq1与低浓度的Pfu能够显著提高PCR延伸长度的现象。
[20] Barnes W M Thermostable DNA polymerase with enhan

玩家需要从希利苏斯塞纳里奥要塞的飞行管理员流沙守望者巴里斯托尔斯处接取到明天的希望任务，任务需要去时光之穴寻找安纳克罗斯。

不过只需要走到安纳克罗斯旁边就可完成任务条件，因为声望不够，不可以跟它对话，所以只要接近安纳克罗斯，任务提示完成就可以了，然后找流沙守望者巴里斯托尔斯对话完成任务。

安其拉的开门任务

安其拉的开门任务是魔兽世界中第一个服务器级的大规模世界事件。不同于其它的RAID副本，在补丁上线的时候，安其拉并没有轻易地向玩家们敞开大门，而是需要玩家们齐心协力共同开启。

安其拉开门任务分为两部分，一部分是部落与联盟交纳各种物资，不过每次交物资都会获得一枚勋章，还有不同等级的绿色装备奖励，以及提高塞纳里奥议会与各个主城的声望。另一部分则是正式的系列传奇任务。

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