检查霉菌形态的主要方法

霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，而且孢子很容易飞散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。此染色液制成的霉菌标本片其特点是：（a）细胞不变形；（b）具有杀菌防腐作用，且不易干燥，能保持较长时间；（c）溶液本身呈蓝色，有一定染色效果。实验方法原理霉菌自然生长状态下的形态，常用载玻片观察，此法是接种霉菌孢子于载玻片上的适宜培养基上，培养后用显微镜观察。此外，为了得到清晰、完整、保持自然状态的霉菌形态还可利用玻璃纸透析培养法进行观察。此法是利用玻璃纸的半透膜特性及透光性，将霉菌生长在覆盖于琼脂培养基表面的玻璃纸上，然后将长菌的玻璃纸剪取一小片，贴放在载玻片上用显微镜观察。实验材料曲霉青霉根霉毛霉试剂、试剂盒乳酸石炭酸棉蓝染色液甘油查氏培养基平板马铃薯培养基仪器、耗材载玻片盖玻片U形棒解剖刀玻璃纸滤纸实验步骤1. 一般观察法于洁净载玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，用解剖针从霉菌菌落的边缘处取小量带有孢子的菌丝置染色液中，再细心地将菌丝挑散开，然后小心地盖上盖玻片，注意不要产生气泡。置显微镜下先用低倍镜观察，必要时再换高倍镜。2. 载玻片观察法（1）将略小于培养皿底内径的滤纸放入皿内，再放上U形玻棒，其上放一洁净的载玻片，然后将二个盖玻片分别斜立在载玻片的两端，盖上皿盖，把数套（根据需要而定）如此装置的培养皿叠起，包扎好，用1.05 kg/cm2，121.3℃灭菌20分钟或干热灭菌，备用。

霉菌和酵母计数 *** 作细则

1 设备和材料

1.1 温箱：25～28℃。

1.2 振荡器。

1.3 天平。

1.4 显微镜。

1.5 玻塞三角瓶：300mL。

1.6 试管：15mm×150mm。

1.7 平皿：直径9cm。

1.8 吸管：1mL及10mL。

1.9 酒精灯。

1.10 载物玻片。

1.11 盖玻片。

1.12 广口瓶。

1.13 牛皮纸袋：121℃灭菌20min。

1.14 金属勺、刀等。

1.15 试管架。

1.16 接种针。

1.17 橡皮乳头。

2 培养基和试剂

2.1 马铃薯－葡萄糖琼脂培养基，附加抗菌素，按GB 4789.28中4.79规定。

2.2 孟加拉红培养基：按GB 4789.28中4.81规定。

2.3 灭菌蒸馏水。

2.4 乙醇。

3 *** 作步骤

3.1 采样：取样时须特别注意样品的代表性和避免采样时的污染。首先准备好灭菌容器和采样工具，如灭菌牛皮纸袋或广口瓶，金属刀或勺等。在卫生学调查基础上，采取有代表性的样品。样品采集后应尽快检验，否则应将样品放在低温干燥处。

粮食(包括粮库贮粮，粮店或家庭小量存粮)样品的采集，可根据粮囤或粮垛的大小和类型，分层定点取样，一般可分三层五点，或分层随机采取不同点的样品，充分混合后，取500g左右送检。小量存粮可使用金属小勺采取上、中、下各部位的混合样品。

谷物加工制品(包括熟饭、糕点、面包等)、发酵食品、乳及乳制品以及其他液体食品，用灭菌工具采集可疑霉变食品250g，装入灭菌容器内送检。

3.2 以无菌 *** 作称取检样25g(或25mL)，放人含有225mL灭菌水的玻塞三角瓶中，振摇30min，即为1：10稀释液。

3.3 用灭菌吸管吸取1∶10稀释液10mL，注入试管中，另用带橡皮乳头的1mL灭菌吸管反复吹吸50次，使霉菌孢子充分散开。

3.4 取1mL1∶10稀释液注入含有9mL灭菌水的试管中，另换一支1mL灭菌吸管吹吸5次，此液为1∶100稀释液。

3.5 按上述 *** 作顺序做10倍递增稀释液，每稀释一次，换用一支1mL灭菌吸管，根据对样品污染情况的估计，选择3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿，然后将凉至45℃左右的培养基注入平皿中，待琼脂凝固后，倒置于25～28℃温箱中，3d后开始观察，共培养观察5d。

3.6 计算方法：通常选择菌落数在10～150之间的平皿进行计数，同稀释度的2个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数，即为每克(或毫升)检样中所含霉菌和酵母数。

3.7 报告：每克(或毫升)食品所含霉菌和酵母数以个/g(个/mL)表示。

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