简述徒手切片的制作方法

徒手切片的制作方法：

选材→切片→固定（70％酒精）→1％番红（50％酒精溶液）染色→70％酒精冲洗→脱水（85％酒精95酒精）→0．5％固绿（95％酒精溶液）复染色→冲洗（95％酒精1次）→进一步脱水（纯酒精2～3次）→透明（1／2纯酒精十1／2二甲苯及纯二甲苯各二次）→封片（中性树胶）→贴标签。

所需的仪器用具简单，药品经济， *** 作方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和活体结构，必要时，也可经过脱水、染色制成永久制片而保存。

扩展资料：

1、实验用品

显微镜、剃头刀（或刀片）、毛笔、镊子、培养皿、染色皿（或小酒杯）、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸。1％番红水溶液（或50％酒精溶液），0．5％固绿95％酒精溶液，70％、85％、95％酒精，纯酒精、二甲苯和中性树胶或加拿大树胶等。

2、选材

所用材料不宜太软或太硬。一般植物幼嫩的根茎或一些植物的叶片、叶柄等均可使用此法。质地较薄的帆逗材料答粗，如叶清轿镇片，可沿主脉两侧切成宽约5～6毫米，长1～1．5厘米的小块，夹在夹持物（如胡萝卜根或马铃薯块茎等）中进行切片。

石蜡切片的制作步骤如下：

1、组织包埋。

（1）乙醇脱水：组织经不同浓度的乙醇溶液进行逐级脱水70％、80％、90％、95％、100％、100％，各级乙醇 40min（注意：骨性及钙化组织需在JYBL-Ⅱ脱钙液中浸泡24h，待组织软化后再进行乙醇脱水步骤）；

（2）透明：组织依次浸泡于三个二甲激歼拿苯中，每缸各1h；

（3）浸蜡：组织依次浸泡于三个石蜡缸中，每缸各1h；

（4）包埋：将液态的石蜡倒入模具盒中，再将浸好蜡的组织块平放底部，注意切面方向朝下放置，待石蜡凝固后去掉包埋框，完全冷却变硬后再修整蜡块，组织外围的石蜡保留适中以便切片。

2、切片制作将预冷的蜡块固定在石蜡切片机上，使蜡块的切面与刀口成平行方向，刀的倾斜度通常15℃，转动轮转推进器，调节切片厚度为 4μm，切成厚度均匀的切片。

左手持毛笔，右手旋动切片明搭机转把，切片带出来之后，用毛笔轻轻托起，再用镊子轻镊蜡片，以正面放入展片箱中，其水温 45℃左右。待摊平整后捞片。贴附切片左手持载玻片之一端，垂直入水去附贴切片，右手用镊子辅助推动，附贴至玻片上的三分之二处。

切片贴附后，放在空气中稍晾干，放置 65℃烤片机上烤1h，再放置烘箱内烘烤2h。

3、石蜡切片脱蜡至水

依次改败将石蜡切片放入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10min-二甲苯Ⅲ10min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-50%酒精5min梯度脱蜡。

4、HE染色

石蜡切片入苏木素染0.5-1分钟min，自来水漂洗，1%盐酸酒精分化数秒，自来水漂洗，然后1%氨水水溶液返蓝1min，流水冲洗数秒，放入伊红染液中染色数秒，流水漂洗。

5、脱水封片

石蜡切片依次放入75%乙醇 2min -85%乙醇 2min-无水乙醇5min -无水乙醇5min -二甲苯5min 透明，将切片从二甲苯拿出来中性树胶封片。

6、结果判读

细胞核为蓝色，细胞质为红色。

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