sanger 求蛋白质测序法的原理,越详细越好!

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sanger 法是指 用二硝基氟苯(DNFP)与多肽链上的 N端 氨基酸 的氨基反应 生成DNP-氨基酸 在酸性条件下水解 多肽链, DNP-氨基酸断裂下来,其余的是多肽链,然后通过纸层析DNP-氨基酸,确定是那种氨基酸(当然某些氨基酸中的R基上氨基和羟基也可与 DNFP反应,但可通过有机溶剂除去)
ps 1953年 英国人sanger用测定了牛胰岛素的氨基酸序列,闻名于世

测序产品功能
1 获得物种或者组织的转录本信息;
2 得到转录本上基因的相关信息,如:基因结构,功能等;
3 发现新的基因;
4 基因结构优化;
5 发现可变剪切;
6 发现基因融合;
7 基因表达差异分析。

目前对蛋白N端测序主要分类两大类,其一为非质谱技术,例如经典的Edman降解法、利用反转录RT-PCR得到对应蛋白的cDNA,再来反推得到蛋白序列;其二为质谱技术。各自都有其使用的长处和制约之处,目前,市面上采用的,依然是基于经典的Edman降解法原理,利用美国ABI公司Procise491蛋白序列测序系统进行蛋白N-端测序。

几乎所有的蛋白质合成都起始于N-端,蛋白质N-端的序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着巨大的影响力。例如N-端序列影响蛋白质的半衰期,同时关联着蛋白亚细胞器定位等,这些与蛋白的功能和稳定性息息相关,对蛋白进行N-端测序分析,有利于帮助分析蛋白质的高级结构,揭示蛋白质的生物学功能。
N端序列没有太大的特异性,只测几个用来进行对比可能性不大。

蛋白质谱一般来讲是用来对某个蛋白质进行鉴定的方法
而蛋白质测序实际上就是检测蛋白质的多肽链数目,不一定要用到质谱技术
简单说,蛋白质测序的方法有很多,一般是在构建完成后,通过测序来对比之前的预测的序列是否正确。
而质谱检测一般是用在蛋白质表达纯化完成后,用来鉴定是否是最初设计的那个蛋白。


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