中国业余无线电的篇章介绍

《技术篇》

专家从这儿起步

无线电技术既有百余年悠久历史，但也是当今刷新速度最快的技术。从点点滴滴入手学习和钻研浩如烟云、深如海洋的无线电技术，掌握常人所不知的奥秘，与搭载电波遍访世界同样是令人快乐和激动的事情。

“业余无线电”的主要特征是“纯出于个人对无线电技术的爱好”和“不赢利”。但就无线电技术而言，业余无线电和其它业务的无线电没有本质的区别。业余无线电爱好者今天的发现、创造和经验会不断被明天的其它业务所使用，其它业务今天开发的无线电应用也会不断为明天的业余无线电界移植采用，况且我国无线电主管部门分配给业余业务的频谱总宽度大于23GHz，而目前有我国业余无线电爱好者利用记录的频段的总宽度还不到1%，从业余频率资源利用率的角度讲，发展空间还无比巨大，任重而道远。业余无线电爱好者为开发自己而学习技术是没有界限和止境的。

随着无线电技术内容越来越丰富，火腿或多或少还要涉及低频模拟电路、射频模拟电路、数字电路、电磁场理论等诸多方面的知识，不是本篇这样的小书有能力去包罗的。好在有关无线电技术的国内外网站多如繁星，而且随着我国迅速成为世界最大的移动无线通信市场，国内围绕移动、宽带等主流商用无线电业务的无线电技术书刊正快速增多，加上我国一些书局和杂志社几十年来陆续出版过一些专题书籍、电路大全、制作集锦之类的资料，尤其是互联网上有大量的关于特定内容的经验心得交流文章， 这些都为业余无线电爱好者汲取知识提供了重要源泉，不过相比之下，比较系统地介绍射频技术感性知识的基础资料还不算太充裕，本篇的宗旨只是努力在这方面提供一些参考。

元器件的快速换代带动着业余无线电实践课题、工具和技术细节的不断刷新。但是作为底层支撑的无线电基础知识是相对稳定的，只有打好坚实的基石，才能更加自如地深入学习，有效地从广泛的信息源中提取有用的营养，做到“知其然”而且“知其所以然”，举一反三，迅速提高。所以本篇的重点既不是捕捉和定格瞬息万变的最新动态，也不是详尽展开具体实践的细节指导，而是试图从比较广泛的视角介绍最常见的现象和最基本的原理，希望具有不同经历的业余无线电爱好者都能从本篇中发现自己的一些兴趣点，以便有的放矢地从其它信息来源去搜索更为具体的实践指南。在实践中遇到问题之后，可以再回到本篇，寻找能够帮助进一步理解的线索。

为方便读者深入查询有关中外资料，本册在一些常用术语首次出现时用括弧给出相应的英文单词。为帮助读者亲身接触业余无线电界常见的不同表达方式，一些不同时期、不同来源的技术插图保留了原来的风格，虽然其中有些历史原图的图面质量不够理想，但它们直观地反映了不同时期无线电技术的原貌。我国无线电应用历史相当悠久，但留下的实物资料极少，作为一种技术文化，不能不说是一件憾事，为此本篇也顺便以少量篇幅介绍了一些我国早期业余无线电设备和战时国产名机的梗概，用意在于唤起研究。

本篇很多内容系笔者长期学习拾得，不少来自依稀的记忆以及个别凌乱的笔记，原文的准确出处很难再查考注明，谨请谅解。

《 *** 作篇》

开篇语

本篇的第一章至第四章部分是 *** 作篇的上半部分,此部分章节是针对那些要入门和刚入门的爱好者写的，所以它只是入门的初级篇。

回想1993年,北京无线电运动协会对首批四十多名刚入会的会员进行培训，时间是每周日下午，当时每周还只是休息周日一天。经过近三个月的十多次集中培训，大家就无线电一般技术，业余无线电通信的相关知识、法规、通信技巧等，听讲座,进行讨论，晚间在家里还要练习抄收老师在7兆低端播发的莫尔斯电码。当时取得的四级 *** 作证书，只是收听级的，一年后通过考试合格的，才可获得有发射资格的三级 *** 作证书。

可不同了，有的入会后，集中培训加考试就两个多小时……。由于门槛低，又跳过了收听级这一段，对大多数持四级 *** 作证书的爱好者来说，有必要进行一些补课,师傅领进门，修行在个人。本篇前半部分就业余电台、业余业务、业余频段、业余爱者等基本问题，以及业余电台的呼号、分区、通用时间、地理位置报告等相关知识等作些简单介绍，供朋友们进行自学。本篇对收发信机的使用、天馈系统的架设安装、电源系统的维护以及对具体通信用语、 *** 作程序等作一般性介绍，供朋友们 *** 作实践中参考。

以前法规规定，持三、四级 *** 作证书的爱好者，不允许进行RTTY、PSK31等模式的数据通信和SSTV慢扫描电视通信，2001年这些法规已经废止。因此，这里也向持四级 *** 作证书的爱好者介绍了除语音通信外的其它通信模式，供朋友们选择使用，以提高大家对玩业余电台的兴趣，并为将来上短波作些准备。

由于本人是学文科的，也是边学习、边实践、边成文。受水平所限，文中肯定有不少错误之处，也请朋友们边学习、边实践、边指正。

《 *** 作篇》的下半部分(第5章至第9章)开篇语

*** 作篇的下半部分(第5章至第9章)是一部业余无线电 *** 作的进级篇。在业余无线电爱好者理解了呼叫的基本程序和 *** 作方法后，如何能够在业余无线电领域内更进一步，了解和进入更加丰富多彩的业余无线电 *** 作世界。本章节从传播规律、IARU的游戏规则、DXCC、追卡、业余无线电竞赛、奖状、远征、日志软件、各种辅助工具、极低频段和超高频段 *** 作、QRP、空间通信 *** 作、EME、射电天文等方面进行了相关的阐述和说明，并配以具体的例子，力图使读者了解和掌握神秘的业余无线电通信世界中许多精彩的部分。鉴于篇幅的原因，本书不是一本百科全书。在涉及的点上不可能每一点都讲得非常细，但是每个部分都会提供至少一个入门的介绍和互联网上相关的资源链接，便于读者进行更深入的学习。

本书在编写的过程中，得到了国内外诸多业余无线电爱好者的支持和帮助，BD6CR协助编写了“绿色通信-QRP”一章，BD4OS协助编写了“向太空冲刺”章节中的大部分内容，BA7IA、BA4RF为本书提供了大量的资料并补充了一些章节的内容。另外，在本书编写的过程中曾经联系过以下的业余无线电爱好者：BA1HAM、BA7NQ、BD7OH、BA4EG、BD0AAI、BA1AA、BA1EO、BD1WC、BA1AAX、BD1BYV、BA4ALC、BA3CE、BG1DO、BG1MW、BD1ES、BD5RV、BA5TT、DL3MBG、K5SF以及在网站上的其他爱好者，他们给本书的编写提供了很多的帮助，在此对所有关心本书的各位同仁表示感谢。

由于作者水平有限，书中疏漏之处在所难免，敬请读者指正，以便在以后的版本中修正和完善。

《史记篇》

写在前面

业余无线电在中国有一部坎坷、曲折的历史，给我们留下了许多可供传言励志的章节，能集文成卷留予后人知，既在情理之中，也是笔者多年的夙愿。老一辈业余无线电家的探索与进取，为中国无线电事业的发展做出了不可或缺的贡献，更为我们留下了许多弥足珍贵的资料。这些资料生动地记述了中国业余无线电发展的兴衰，同时还是中国当时社会风貌、价值取向、特别是科技人员志向情怀的生动反映，每每翻阅总让我受益匪浅。笔者有幸从二十世纪五十年代开始接触业余无线电事业，又因工作需要，曾访问了一批中国业余无线电历史上卓著且有成就的老业余无线电家。在他们中间有些曾是社会名流、国家精英或实业家，不少还是中国业余无线电团体或活动的发动者与组织者，大名赫赫，备受社会推崇与爱好者的仰慕，对他们的访问，为我整理、撰写民国时期业余无线电的历史打下了基础、创造了条件。

笔者从二十世纪六十年代初至今，曾经访问过以下各位老业余家：已故去的有：朱其清、孟昭英、赵振德、张宗汲、潘仁庸（潘仁荣）、陈仁慕、沈明刚、谢棣华、李石麟（李欧儒）、郑观森、郑光祖、陈实忻、朱悦民、赵超尘等。尚健在的有：周海婴、王传善、钱皋韵、许道通、张家齐、韩铸文、徐树滋、高昌镕、朱天赋、冯国祥、黄耀曾、许毓嘉、郭德文、张志诚、金贤藻、顾元庄、王耿介等。所有被访的老业余家均毫无保留地向笔者介绍过他们那段亲历亲为的历史，有的还写成文字向笔者提供，成为编纂中国业余无线电历史的翔实凭证。更有前辈还慷慨地贡献出他们珍藏了半个多世纪的历史文献，对于这些文献，笔者在使用时，都注明了提供者的姓名，以示资料来源和归属。笔者还常向健在的老业余家们核对情况，他们更是不厌其烦，有问必答，甚至亲自推敲、修改。这些耄耋高龄的老者，其信其义其对历史高度负责的责任感令我敬佩，应该说这篇史记能够成稿也有着前辈们的功劳，我将永远感谢这些前辈并向他们致以深深的敬意。

在编写的过程中笔者除查阅了解放前相关的一些报刊和业余无线电团体的刊物外，还参考了人民邮电报社出版的《人民邮电报》、中国电子报社出版的《中国电子报》、中国台湾《无线电界》杂志社出版的《无线电界》、上海地方志、浙江省地方志、汉口地方志等文献资料。

特别是笔者在编写过程中得到了中国无线电运动协会、上海市无线电运动协会、中国民航通信设备修造厂等单位以及张宗汲前辈的夫人汪秀娟老师的鼎力相助，允许笔者查阅并使用他们保存的档案、资料。另外北京、上海、天津、湖北、福建、江苏等全国各地均有爱好者或协会工作人员协助笔者查阅、复制资料或核对史实，在此一并表示感谢！

这次应约撰写《中国业余无线电》一书中之史记篇，对我也是一个学习和系统了解我国业余无线电发展历史的机会。本想将资料收集的更加完整、全面，对已有资料考证得更加翔实些，无奈《中国业余无线电》一书五篇必须同时出版，“史记篇”仅是其中一篇，其他各篇都已完成，出版方已数次催稿，为了不至因我而使出版时间拖得太久，只得匆匆交卷，权作一个征求意见的草稿先交付印。同时原来准备撰写的中华人民共和国成立以后我国业余无线电发展的历史，也因需要查阅很多历史资料和文件，且涉及的单位、部门众多，查阅档案、核实情况的手续极为繁杂，要赶上本书的出版日期，实无可能，所以只能对这段历史做一个极为简单的概括，详细叙述，只能以后择机另行撰写、另行出版了。

对于已经完成部分，也只是根据自己掌握的情况和手头资料编写而成，难免会有不少遗漏、不妥、甚至错误之处，尚请老前辈和知情者们补充、斧正，也希望广大读者提出宝贵意见，以求将来得以增

《交流篇》

自1992年我国恢复开放个人业余电台十余年以来，各地业余无线电爱好者队伍迅速壮大，并积极通过空中联络学习和交流技术，他们的体会、经验和见解也反映在一些刊物和互联网上的文章中。为了帮助更多的人参与分享，也为了留下一些反映这个时期我国业余无线电界交流的实况记录，本篇随机收集了一部分有代表性或启发性的文章。其中有些文章没有署名，有的是经过改写转载的，难以与原作者联络，也无法在印书时正确署名，敬请谅解，并请原作者与出版者联系，在此谨向本篇的所有作者表示衷心的感谢。

《设备篇》

设备篇522-666

无线电收发信设备是广大业余无线电爱好者的必备装备，也是空中联络、交流的主要通信工具。从早期完全靠无线电业余家前辈们亲手制作各种发射机和接收机，到市场上琳琅满目的由专业化制造生产出来的各档次业余无线电通信机，经过百年演变，曾经登场亮相的商品化业余无线电台设备已有千余种机型，自制设备的品种更是只能以“无数”来描述，它们留下了一条漫长的历史足迹。追踪这一足迹，无疑有助于加深对无线电技术的各阶段进步的理解，探索今天的无线电设备之所以采用了很多新技术的理由。为了帮助我国业余无线电爱好者了解业余无线电通信设备的发展情况，本书的《设备篇》收入了一部分业余无线电收发信设备的简单资料，以供读者将来进一步深入了解时作为索引。

限于收集的能力和资料的来源，篇中内容比较集中在商品化业余无线电设备鼎盛时期的国外商品机种上，其中有些曾经成为世界业余无线电界的主打机种，有些并没有成为流行产品，也有少数机型是通用机型。历史上曾经为我国业余无线电爱好者使用的一些其它设备因为缺乏准确的资料，未能收入。为此敬请读者谅解并予指正。

《附　录》

附录一、中华人民共和国无线电管理条例

附录二、国际电信联盟《无线电规则》有关业余无线电的摘录

附录三、ITU国际呼号序列划分表附录四、DXCC实体呼号前缀及分区对照表

附录五、CRSA推荐的业余无线电频率使用规划

附录六、我国岛屿的IOTA编号表附录七、计算通信方位角和大圆距离的BASIC程序

附录八、我国(以北京为中心)与世界部分城市或国家的方位角和大圆距离

附录九、CQ－ World－Wide WPX 竞赛规则节选

业余无线电家礼仪…………

这一业余无线电家礼仪使用至今已经将近七十年了，但是其中所描述的业余无线电家精神，至今依然活神活现，早已被奉为业余无线电家之圭臬。可惜的是，这一精神标帜如何落实到每位业余无线家身上。过去从没有听过有人倡导，而自己根据这些标语文字又学不来，因此下面我以古贤曾子的精神：日省三次，来探讨这业余无线电家礼仪；下面都是一些根据保罗君制定的业余无线电家礼仪，发展出来的自省题目，希望对於业余无线电家修养有帮助。

互谅互解 -- 凡是让人不舒服的事我不干：

进行 CQ 呼叫或是履行约定通讯之前，是不是要提前准备先倾听一阵子？确定频率上无人使用之后，再进行呼叫。

碰到频率使用权纷争时，是不是能尽量给对方方便？而不是高谈阔论，以「根本无人有权拥有频率」等语相应，或只是一味地坚持你是优先使用者。

如果友台指出自己有技术上的瑕疵，是不是应该马上停止 *** 作，就这些问题先解决？而不是若无其事的继续 *** 作。

使用中继台时，有没有考虑到可能随时有人需要使用，或者是紧咬着中继台不放？

如果对方提出交换 QSL 卡时，是不是应尽速履行实现？

产生射频扰问题时，是不是能彻底反躬自省，即使知道射频扰问题根本与自己的通讯设备无关？

面对远征电台讯号时，是不是要完全配合对方的呼叫指示；或者只顾自己就缺这个国家地区通讯而显得不耐烦，或者是表现出「丛林战术」以对？

高贵情谊 -- 以高贵的情 *** 支持并鼓舞业余无线电同好、地方性及全国性的业余无线电社团：

我是不是已经加入了地方性的业余无线电社团，或者是以单飞的姿态对应？

如果我使用了公共资源 ( 例如中继台、OSL 卡服务 )，是不是心存回馈？

如果对於所属社团有意见或不满，是不是应透过适当管道表达，或者迳自在空中发炮，散播自己的情绪与不满？

是否意识到无线电波无远弗届，你的一举一动，世界各地都有可能监听到，不管监听的是一般人士或者是业馀特定监听站，都有可能影响到业馀无线电家的形象？

日新又新 -- 集优良科学素养、有效率的电台设备与 *** 作习惯、及水准以上的业馀家精神於一身：

是否尽全力学好无线电设备的 *** 作技术？或者根本提不起兴趣，只认为技术问题对我而言太深了，无从学起。

考虑到拥挤频率内的扰问题，是不是应该主动把线性放大器关掉？你是不是有了开启 *** 作桌照明灯时，顺手也把线性放大器打开的坏习惯？

是不是应该设法取得无线电设备的维修手册，并且好好自修或是向别人请益研习？以便彻底了解使用设备的线路原理。

检讨过去几年的业余无线电生涯当中，是不是亲自动手制做过一些简易的业余无线电设备？例如天线等。

距离最后一次仔细看有关业余无线电杂志内的技术文章有多久了？

你曾要求朋友监听你的发报能力，并且提出挑惕性质的批评吗？

通讯程序或是常用的 Q 码，你熟悉吗？最好能倒背如流。

如果临时受邀客串主控网路，你对於自己的通讯技巧有信心吗？是不是曾以「不熟悉通讯程序」或其它理由加以推诿？

友善互助 -- 如有需要，对新手应慢而有耐性，温文儒雅以对。热心助人、充份合作、体谅他人，这些都是业余无线电家的本行：

常到新手聚集的频率报到吗？他们需要鼓励、指导、及归属感，这些都是你做得到的。

无意监听到友台有触犯法规的行为，或是 *** 作程序不符约定，应设法私底下提出指正规劝，而不是把自己想像成空中警察，迳自就地指正或教训。

很具建设性地鼓励新手在技术上升级，应以技术升高可以得到更丰富的通讯享受为诱导，使得新手自然向往升级，而不是冷嘲热讽。

应该严禁与种族、族群，或是**有关的笑话，即使对非常熟悉的人也不行。尽量不要涉足在空中的争吵，尤其是不要加入任何挑少数团体的行为。

在空中听到不熟悉的呼号时，应该有礼貌地趁机打个招呼，不要因为「他不是我们这一夥」的念头所影响，而置之不理。

如果得知附近的业余无线电同好因故住院，或是亲人丧故，只有在通讯时表示慰问之意够吗？应该考虑拨空带束鲜花或是慰问卡，亲临表示关心之意。

在空中与人交谈时，记得「三人行必有我师焉」吗？不要忘了，随时都是向人讨教的好机会，应重视与珍惜别人的看法或意见。

碰到一流的、完美的 *** 作者，别忘了向他称赞、褒扬几句。

均衡发展 -- 对个人而言，业余无线电是消遣、嗜好，不要影响家庭、工作、课业、或是参与社会活动：

每天只切割成工作、睡眠、和业余无线电活动的时间吗？有没有注意到家人需要你；除了业余无线电外，你也需要朋友。

我有非业余无线电的挚友吗？我参加非业余无线电团体的活动吗？

已经多久了，完全不是因为业余无线电活动的缘故，而陪同家人出去旅行？

应能够暂时撇开业余无线电与家人在一起。何时才能在讨论年终奖金时，不要提及业余无线电设备的添购计画？

与朋友或家人旅行、打保龄球、或是任何聚会时，能够完全放下〈不提及〉自己有趣的业余无线电，而关心别人的嗜好吗？

对於购买自己的数万元业余无线电设备出手大方，而家人因所属的嗜好要花费时，你却不甘不愿。

爱乡爱国 -- 电台设备与 *** 作技巧永远为乡为国准备：

对於慈善或是公益的社团活动，你自动自发帮忙过吗？

对於法规的看法或意见，你正式向有关当局提出过吗？或者只是消极的向他人抱怨？

你真正了解国家在什麽时候有权徵召你的业余无线电台吗？

目前，移植排斥反应仍然是制约肝移植疗效的主要原因。虽然由于免疫抑制剂的临床应用，肝移植的1年的存活率大幅度提高，已超过了80%。但是终生服用免疫抑制剂不仅成为患者沉重的经济负担，而且造成机体的免疫功能低下，可能促进肝炎及肿瘤复发，诱发感染、肿瘤等疾病。因此，找寻诱导特异性移植耐受的新方法，是克服移植排斥反应的最佳途径。

特异性移植耐受是指在无需使用免疫抑制药物的情况下，受者的免疫系统对同种异体或异种供体抗原长期不发生免疫反应，而对其它抗原可发生正常免疫应答的状态。目前认为，诱导机体产生免疫耐受涉及免疫清除、免疫失能、免疫抑制和免疫忽视四类机制[1]。根据以上诱导免疫耐受的机制，学者们发展出许多诱导移植耐受的新方法[2]：(1)在胸腺内直接注射表达供体抗原的细胞，在胸腺内通过克隆清除诱导免疫耐受。(2)利用骨髓移植造成造血细胞嵌合体诱导耐受。(3)阻断T细胞活化的共刺激信号通路。(4)输注供体树突状细胞(Dentritic cell，DC)诱导耐受。(5)针对T细胞粘附和活化相关分子的单克隆抗体：抗T细胞及T细胞亚群的单抗；抗粘附分子或细胞因子的单抗。(6)其它特异性免疫抑制的方法：合成肽阻断TCR对同种异体抗原的识别；合成肽阻断趋化因子及其受体。以上方法均不同程度地诱导了对供体抗原的耐受，但它们存在如下不足：(1)成年人胸腺已经萎缩，无法在胸腺内直接注射表达供体抗原的细胞，故该方法适用范围大大受限。(2)供体骨髓移植能诱导部分耐受，但不易控制嵌合程度，移植物抗宿主病(graft versus host disease，GVHD)的发生率大大增加。(3)DC诱导的淋巴细胞失能状态可通过给予外源性IL-2而逆转；感染或其它因素引起机体强烈的免疫应答，产生大量的IL-2等细胞因子也可以通过旁效应解除失能的细胞克隆；失能状态的维持需要抗原的持续存在，抗原的去除也能逆转失能。(4)阻断协同刺激通路、应用针对T细胞粘附和活化相关分子的单克隆抗体、合成肽阻断TCR对同种异体抗原的识别、阻断趋化因子及其受体等方法能诱导出确切的免疫抑制，但是其作用范围是全身性的、非特异性的，且一旦中止阻断剂的供给，则移植耐受消失。总之， 目前诱导移植耐受的方法存在非特异性、容易逆转、实际 *** 作困难等缺陷。

肝移植排斥反应启动时，首先表现为淋巴细胞对汇管区中央静脉周围的浸润，随着排斥反应的进展，淋巴细胞的损伤导致小叶间胆管上皮细胞、中央静脉内皮细胞的炎症，最后波及汇管区周围的肝实质细胞，造成广泛的肝脏炎性反应。因此肝移植排斥反应的过程是从汇管区启动，进而扩展至小叶间胆管上皮细胞、中央静脉内皮细胞、汇管区周围的肝实质细胞。移植排斥反应发生时，CTL细胞在活化后可以通过以下两条途径杀伤靶细胞：(1)穿孔素/颗粒酶途径。(2)Fas/FasL途径：在CTL细胞识别靶细胞后，细胞表面表达的高水平FasL与靶细胞表面的Fas相互识别，通过Fas触发靶细胞内部的凋亡程序，使靶细胞发生程序性死亡。体外实验证实两条途径相互独立。然而体内实验证实单一阻断Fas/FasL途径即可抑制CTL对靶细胞的杀伤，其原因可能与体内环境有关28

诱骗受体3(Decoy receptor 3，DcR3)是一种新发现的可结合FasL的可溶性TNFR超家庭成员，RNA印迹表明DcR3 mRNA 表达于胎肺、脑、肝及成人脾、结肠和肺，特别是在肺癌和结肠癌细胞系的表达很高，也可由T细胞丝裂原激活的外周血单核细胞分泌。DcR3 分子质量为35kDa，肽链长300个氨基酸残基。DcR3 的配体是LIGHT、FasL、TL1A。其主要作用有：(1)与Fas竞争性结合FasL，阻断FasL所诱导的细胞凋亡，这一作用可以减弱CTL和NK细胞对靶细胞的杀伤[14]。(2)通过抑制LIGHT与HveA 或TR2之间的双向信号转导、TL1A至DcR3的单向信号转导来抑制T细胞激活。7 (3)抑制CXCL12/基质细胞来源的因子1α(SDF-1α) 、FasL对T细胞的趋化作用，从而减少CD4+和CD8+T细胞对肿瘤的浸润。25 27．(4)通过调节DC分化和成熟从而抑制CD4+ T细胞增生。20．(5)抑制T细胞伪足形成，阻止它们形成不可分离的细胞簇从而调节T细胞与其它细胞如APC的相互作用。7

因此根据其作用机理，人们推测其可能有以下四方面的作用(1)肿瘤细胞逃避免疫监视。（2）抗炎作用。(3)致癌作用。（4）诱导移植耐受。目前的研究工作已经肯定DcR3基因对肿瘤细胞逃避免疫监视、抑制炎症反应的作用，但DcR3基因的高表达与细胞癌变无相关性，不是癌基因。Wu等证实DcR3减少了FasL、IFN-γ诱导的胰岛细胞凋亡及胰岛素释放，可防止同种异基因胰岛移植时的胰岛原发性无功能。2Zhang等于心脏移植术前一天开始连续7天静脉注射DcR3，小鼠心脏存活时间比对照组延长33天，提示DcR3可以减弱T细胞对同种异体抗原的反应。24我们利用腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)（AAV Helper－Free System, Stratagene 公司）作为DcR3基因的载体，将AAV病毒颗粒从门静脉、肝动脉、胆管注入冷保存时的供肝，成功实现了DcR3基因在供肝的表达，在没有使用免疫抑制剂的情况下，供肝正常存活了105天（目前仍然存活，继续观察中），而对照组仅存活了15天（见研究工作基础）。AAV Helper－Free System的特点有：病毒载体产生、效价滴定阶段均不需野生型腺病毒共感染，因此有极高的生物安全性、宿主的免疫反应极小；AAV可感染的细胞类型广泛，感染不依赖于活跃的细胞分裂；AAV病毒滴度高，常规可达107病毒颗粒/ml，经浓缩可达1012病毒颗粒/ml；AAV在允许复制的条件下可在染色体外复制，在不能复制的条件下可以5-10%的效率定点整合入宿主19号染色体的一个2-4kb的区域，因此AAV被证明有应用于基因长期表达的价值。我们目前的研究工作的特色有：（1）证明了腺相关病毒携带的DcR3基因可以诱导肝移植耐受。(2)采用AAV Helper－Free System克服了逆转录病毒载体转导效率低、随机整合入受者染色体中而致肿瘤的危险的缺点[1]以及腺病毒载体虽然有较高的转导率,但因不能在染色体外复制或整合入受者染色体中,目的基因只能一过性表达的缺点[2]。我们目前研究工作的缺陷有：（1）DcR3基因仅在肝脏血管内皮细胞、胆管上皮细胞表达，而急性排斥反应启动时CTL细胞首先浸润的是汇管区的中央静脉周围，因此它尚不能阻止急性排斥反应的启动，仅能阻止CTL细胞血管内皮细胞、胆管上皮细胞的攻击。（2）DcR3基因转染的血管内皮细胞、胆管上皮细胞是成熟的细胞。虽然携带DcR3基因的AAV可在染色体外复制或整合入宿主基因组而使DcR3基因存在长期表达的可能，但是成熟细胞存在新老交替，DcR3基因的表达随着细胞的死亡而消失。因此为了完善我们目前的研究工作，我们需要作以下的改进：（1）将DcR3基因的表达定位于汇管区中央静脉周围，抑制排斥反应的启动。如能进一步将DcR3基因表达于血管内皮细胞、胆管上皮细胞、肝细胞，则更能防止个别活化的CTL细胞对它们的攻击，从而形成抑制排斥反应的“双保险”。（2）实现DcR3基因的持续表达。

肝干细胞（Hepatic Stem Cell，HSC）是指具有自我更新能力和具有分化形成肝细胞与胆管细胞潜能的原始细胞。最近有人证实它尚可分化为血管内皮细胞(Gao Z, McAlister VC, Williams GM Repopulation of liver endothelium by bone-marrow-derived cells Lancet 2001 Mar 24;357(9260):932-3) [11]。肝干细胞的基本特征可概括为两点：①具有多向分化能力，可向肝细胞、胆管上皮细胞、肝脏血管内皮细胞分化。②具有自我更新与自我维持能力，对肝脏损伤或疾病产生反应并进行修复。其形态特点是细胞体积小、核大而胞质少、呈卵圆形、具有特殊的表面标志如AFP、肝细胞标志（白蛋白）、胆管上皮细胞标志（CK7、CK19）以及肝细胞、胆管上皮细胞共有的标志(CK8、CK18)。目前有人证实其尚有血管内皮细胞的标志。

该类细胞不仅在胚胎肝组织中存在，而且在成年肝组织中也存在。肝内的肝干细胞称为卵圆细胞(Hepatic Oval Cell，HOC)或小肝细胞。它们在正常情况下位于肝脏汇管区的Hering小管[D]，当肝脏受到损伤（肝毒性药物、手术、创伤、缺血再灌注等）时，它们迅速增生分化，补充受损的肝细胞、胆管上皮细胞、肝脏血管内皮细胞分化，因而被称为肝干细胞池[A]。目前大量文献证实，肝脏损伤时，肝脏有三个水平的细胞修复：肝细胞、Hering 小管的双向干细胞、Hering小管周围的来自骨髓的肝干细胞。骨髓来源的干细胞可定居于Hering小管周围，在肝脏损伤时发挥修复作用[K]。Theise ND等通过三维观测得出Hering 小管、汇管区周围是肝干细胞存在的场所的结论[G]。Petersen 证实肝内存在骨髓来源的干细胞，Theise 大鼠2%，人4-40%。Alison05-2%(hsc8,78,79)。Lagasse 30%认为Hering管可能是人肝干细胞起源分化及滞留场所(TheiseND,SaxenaR,PortmannBC,etalThecanalsofheringandhepaticstemcellsinhumans[J]Hepa-tology,1999,30:1425-1433)

肝干细胞的肝外来源包括胰腺的上皮细胞、胰岛前体细胞、骨髓造血干细胞[3,4]。自1999年Petersen等发现肝卵圆细胞可来源于骨髓后,从骨髓细胞中鉴定肝干细胞成为近年研究的热点。目前研究证实从骨髓中分离纯化的造血干细胞的多个亚群在一定的微环境或细胞因子的诱导下可分化为肝干细胞[B]。目前,在骨髓中已发现多种细胞亚群具有分化为肝细胞的潜能,如KTLS细胞(c-kithighThylowLin-Sca-1+)[H]、β2-m-Thy-1+细胞[12]、CD44-CD45-HLA-c-kit-的多能成体前体细胞(multipotent adult progenitor cells, MAPC)[I]及C1qRp+细胞(Lin-CD45+CD38-CD34+/-)[J]等。这些细胞均涉及多个不同的表面标志,可能代表着骨髓干细胞的不同发育阶段或谱系中的不同分支。这些细胞因子肯定存在于细胞的微环境中，包括细胞外基质中参与粘附过程的信号分子以及参与正常细胞发育、分化、成熟的细胞因子[B] [E]。Petersen 等[L]、Theise等[M,N]和Alison等[O]的研究相继指出,骨髓干细胞或造血干细胞能够在鼠肝内转化成为肝卵圆细胞甚至成熟的肝细胞和胆管细胞,并同时证明这种现象也存在于人类体内。用高浓度的肝细胞生长因子(HGF)诱导体外培养的大鼠骨髓细胞,RT-PCR检测到白蛋白及AFP的表达,免疫细胞化学也证实了经诱导的细胞出现了AFP、白蛋白及CK8/18等肝前体细胞的特征性表达。应用磁株细胞筛选法分离人或大鼠骨髓细胞中的β2m-Thy-1+细胞,能够表达肝细胞的特征[P]。这些骨髓来源的肝干细胞(BDHSC)肝内移植后很快就整合入肝板,并且分化为成熟的肝细胞,而在体外培养的过程中加入胆汁化血清可促进它们向肝细胞方向分化。蔡云峰等用免疫磁珠法成功分离出骨髓干细胞的多个亚群，并证明大鼠骨髓内β2微球蛋白阴性(β2 m- ) 细胞经体外培养诱导后呈多角形细胞表现, 白蛋白、AFP、 CK8 / 1 8表达阳性，其他干细胞类型未见类似变化。提示该亚群骨髓干细胞有向肝干细胞分化的能力。我们参照他们介绍的方法成功分离了15×105数量级的肝干细胞纯度为95%，培养7天后可达2×106数量级。经免疫组化染色证明其有肝细胞、胆管上皮细胞、血管内皮细胞的特异性标志，因此推测其可能分化为以上3种细胞（见研究工作基础）。这些研究结果都说明骨髓细胞中存在有能分化为肝细胞的干细胞群。

肝脏基因治疗的一大难题是被用作基因修饰的成熟肝细胞在体外不易扩增和传代，肝干细胞具有强大的增殖能力，即使经过基因修饰仍有可能传代，这为克服目前基因治疗中的主要问题开辟了新的途径。以肝干细胞作为载体具有一次性介入，永久性治疗的特点，且永生化的肝干细胞无致癌的危险性[F]。

基于以上研究成果，我们设想利用肝干细胞在肝脏汇管区中央静脉周围的靶向定植并在必要时分化补充受损或衰老的血管内皮细胞、胆管上皮细胞、肝细胞的生物学特性，以腺相关病毒为载体将DcR3基因转入从雄性近交系Wistar大鼠骨髓中分离纯化的肝干细胞，将雌性近交系Wistar大鼠肝脏植入雌性近交系Lewis大鼠，同时将转染DcR3基因的肝干细胞经门静脉注入移植后的肝脏。DcR3基因随着肝干细胞的定植主要在汇管区持续表达，必要时部分随着肝干细胞的进一步分化而表达在血管内皮细胞、胆管上皮细胞、肝细胞，从而在启动（主要）、攻击（次要）两个环节抑制排斥反应的发生。DcR3基因强大的免疫抑制作用被局限在肝脏之中，从而诱导出特异针对肝脏的移植耐受状态。

参考文献

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9 Lemmer ER， Shepard EG，Blakolmer K，et al．Isolation from human fetal liver of cells co-expressing CD34 haematopoietic stem cell and CAM 52 pancytokeratin markers．J Hepatol．1998，29（3）：450－4

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11Gao Z, McAlister VC, Williams GM Repopulation of liver endothelium by bone-marrow-derived cells Lancet2001,357(9260):932-933

12Avital I，Inderbitzin D，Aoki T，et al．Isolation，characterization，and transplantation of bone marrow derived hepatocyte stem cells．Biochem Biophys Res Commun．2001，288（l）：156-64

13Daly AK, Day CP, Donaldson PT Polymorphisms in immunoregulatory genes: towards individualized immunosuppressive therapy Am J Pharmacogenomics 2002, 2(1): 13-23

14Pitti RM, Marsters SA, Lawrence DA, etal Genomic amplification of a decoy receptor for Fas ligand in lung and colon cancer Nature 1998,396(6712): 699-703

A．Crosby HA, Gastroenterology,2001,120:534-544

B．姚 鹏,詹轶群,许望翔,等细胞生长因子体外对大鼠肝干细胞的影响中华肝脏病杂志,2003,11(1):33～36

C．赵春华(hsc3)

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F Allain JE, Immortalization Proc Natl Acad Sci,2002,99(6),3696

G Theise NDThe canals of Hepatology ,1999,30(6):1425-1433

H Lagasse E, Connors H, Al-Dhalimy M, et al Purified hematopoietic stem cells can differentiate into hepatocytes in vivo Nat Med 2000 Nov;6(11):1229-34

I Schwartz RE, Reyes M, Koodie L, et al Multipotent adult progenitor cells from bone marrow differentiate into functional hepatocyte-like cells J Clin Invest 2002 May;109(10):1291-302

J Danet GH, Luongo JL, Butler G, et al C1qRp defines a new human stem cell population with hematopoietic and hepatic potential Proc Natl Acad Sci U S A 2002 Aug 6;99(16):10441-5 Epub 2002 Jul 24

K Van der Kooy D, Weiss S Why stem cells Science 2000 Feb 25;287(5457):1439-41

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NTheiseND,NimmakayaluM,GardnerR,etalLiverfrombonmarrowinhumansHepatology,2000,32∶11 160 OAlisonMR,PoulsomR,JefferyRetalHepatocytefromnonhepatiadultstemcellsNature,2000,406∶2571

PAvitalI,InderbitzinD,AokiT,etalIsolation,characterizationandtransplantationofbonemarrowderivedhepatocytestemcellsBiochemBiophysResCommun,2001,288∶156 164

2项目的研究内容、研究目标，以及拟解决的关键问题。（此部分为重点阐述内容）

21 研究内容

211构建携带DcR3基因的腺相关病毒载体，并将其转染AAV293细胞，收集AAV病毒颗粒备用。

212从雄性近交系Wistar大鼠股骨、胫骨抽取骨髓，分离出肝干细胞，用上述腺相关病毒颗粒转染，并进行表达鉴定。

213将雌性近交系Wistar大鼠肝脏植入雌性近交系Lewis大鼠，同时将转染的雄性近交系Wistar大鼠的肝干细胞经门静脉注入肝脏。

214根据Y染色体及AAV病毒载体自带的绿色荧光蛋白（GFP）标志确定转基因肝干细胞在供肝中的定植、分布情况。

215检测转入肝干细胞的DcR3基因在供肝中的表达情况。

216观测肝移植术后移植排斥反应的发生情况。

22研究目标：本课题拟构建携带DcR3基因的腺相关病毒，将其转染雄性近交系Wistar大鼠骨髓来源的肝干细胞；将雌性近交系Wistar大鼠肝脏植入雌性近交系Lewis大鼠，同时将转染DcR3基因的肝干细胞经门静脉注入移植后的肝脏；使DcR3基因在供肝中长期表达，从而诱导特异针对肝脏的移植耐受状态。探讨：(1)转基因肝干细胞在供肝中的定植、分布情况。(2)转入肝干细胞的DcR3基因在供肝中的表达情况。(3)转基因肝干细胞在供肝中的分布及其基因表达与移植耐受的关系。

23拟解决的关键问题

231腺相关病毒转染肝干细胞的效率：干细胞的基因转染难度较大，是本课题的关键环节之一。本课题成员（删去）于2001年用腺病毒成功感染了神经干细胞，成功率约 80%～90%，且经传代培养 12代后仍具干细胞特性。腺相关病毒转染效率高于腺病毒，转染的细胞类型较腺病毒更广泛。因此本课题组有能力完成腺相关病毒对肝干细胞的转染。

232转基因肝干细胞在供肝汇管区中定植的数量：肝干细胞在汇管区的定植数量与肝脏受到的损伤程度有关。损伤越重，肝干细胞在汇管区的定植数量越多，反之亦然。肝移植时肝脏缺血再灌注对肝脏已是一种损伤，为了进一步提高肝干细胞在汇管区的定植数量，可在冷保存时切除大鼠肝脏的一叶，然后完成肝移植。

3拟采取的研究方案及可行性分析。（包括有关方法、技术路线、实验手段、关键技术等说明）

31研究方案

311 DcR3基因的克隆，参照Pitti RM等介绍的方法进行。

312构建携带DcR3基因的腺相关病毒载体，并用其感染AAV－293细胞进行体外表达鉴定、收集AAV病毒颗粒备用。

313从雄性近交系Wistar大鼠股骨、胫骨抽取骨髓，分离肝干细胞并进行纯化、鉴定，参照Itzhak Avital等介绍的方法进行。

314腺相关病毒载体转染肝干细胞，采用直接感染方法。

315体外试验：表达DcR3基因的肝干细胞抑制FasL诱导淋巴细胞凋亡试验；表达DcR3基因的肝干细胞抑制FasL诱导的淋巴细胞趋化试验

316动物实验：大鼠肝移植采用袖套法，移植完成时将转染DcR3基因的肝干细胞经门静脉注入肝脏；分别于术后3天、7天、14天、21天、28天取血液及肝脏标本，采用常规生化法检测肝功能，Northern blot、Western blot检测DcR3基因在肝脏中的表达情况，免疫组化法检测受体CD4+、CD8+淋巴细胞在供肝中的浸润情况，TUNEL法检测供肝中细胞凋亡情况，常规石蜡切片HE染色观察移植排斥反应的发生情况。

32技术路线

33可行性分析

331理论上，骨髓来源的肝干细胞是肝脏汇管区卵圆细胞、嗜碱性小肝细胞的前体细胞。研究证明经门静脉注入的肝干细胞定植的肝脏汇管区的Hering小管，可分化为血管内皮细胞、胆管上皮细胞、肝细胞。汇管区是肝移植排斥反应时CTL细胞首先浸润的区域，血管内皮细胞、胆管上皮细胞、肝细胞是CTL细胞攻击的靶细胞。因此肝干细胞将转染的免疫抑制基因带入肝脏并汇管区及血管内皮细胞、胆管上皮细胞、肝细胞中持续表达，从而诱导特异针对肝脏的移植耐受状态在理论上是可行的。

332本研究所涉及的技术均为成熟的免疫学技术；本研究所拥有本研究所需的设备和条件。

4本项目的特色与创新之处。

本研究利用了肝干细胞在肝脏定植、分化的靶向性，将其作为免疫抑制分子的载体，使非特异性的免疫抑制分子的作用局限于肝脏之中，克服了免疫抑制分子作用范围过大的缺点，从而诱导特异针对肝脏的移植耐受状态。

5年度研究计划及预期研究结果。（包括拟组织的重要学术交流活动、国际合作与交流计划等）

年度研究计划

200501-200509 DcR3基因的克隆，构建携带DcR3基因的腺相关病毒载体备用。

200510-200606 分离、纯化、鉴定雄性近交系大鼠骨髓来源的肝干细胞，并用腺相关病毒进行转染；DcR3基因的体外表达鉴定；所转染的DcR3基因的体外功能实验。

200607-200706 完成肝移植的动物模型，将转染后的肝干细胞经门静脉注入肝脏。按期取肝脏标本，根据Y染色体标志染色及GFP，确定转基因肝干细胞在供肝中的定植、分布情况；检测转入肝干细胞的基因在肝脏中的表达情况；移植排斥反应的发生情况。

200707-200712 补充实验遗漏，整理实验资料，统计处理实验数据，撰写论文。

预期研究结果

1证明转染DcR3基因的肝干细胞能在供肝汇管区及部分血管内皮细胞、胆管上皮细胞、肝细胞中持续表达，同时诱导出长期的肝移植免疫耐受。

2在国外学术期刊上发表论文2-3篇，在国内核心期刊发表论文6-8篇，并在国内学术会议交流。

(二）研究基础与工作条件

1工作基础（与本项目相关的研究工作积累和已取得的研究工作成绩）

2月底至3月初出结果。

2工作条件（包括已具备的实验条件，沿缺少的实验条件和拟解决的途径，包括利用国家重点实验室和部门开放实验室的计划与落实情况。）

删去

3申请人简历（包括申请者和项目组主要成员的学历和研究工作简历，近期已发表与本项目有关的主要论著目录和获得学术奖励情况及在本项目中承担的任务。）

删去

（三）经费申请说明（要求按照《国家自然科学基金经费管理办法》认真填写，购置5万元以上固定资产及设备等，须逐项说明与项目研究的直接相关性及必要性。）

（四）其他附件清单（附件材料复印后随纸质《申请书》一并上交）（随纸质申请书一同报送的附件清单，如：具有中级技术职称申请者的推荐信或在职研究生申请项目的导师推荐信等。）

Access Violation（非法访问），General Protection Fault（一般保护性错误）或者Invalid Page Fault（无效页面错误），虽然说法不一样，但本质上总是由同一种错误引起的。Access Violation常常在计算机用户运行的程序试图存取未被指定使用的存储区时遇到。

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另外，可能出现这个问题的原因是因为你是在WINRAR的窗口中运行程序，而程序又找不到主要文件引起的。

解决方法：）~~

尝试用兼容方式运行该程序右键点击图标——属性——兼容型——选中“以兼容方式运行该程序”——下面的选框中可以选择以95、98、NT40或2000模式来运行。推荐选择98试试看。

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