cck8实验步骤及注意事项

先用细胞计数板计数细胞悬液中的细胞数量（此处也多说一句，细胞最好不要超过10^8/mL,细胞一定要吹打均匀，呈单细胞，呈单细胞，呈单细胞），然后准备接种细胞。

1.先用细胞计数板计数细胞悬液中的细胞数量（此处也多说一句，细胞最好不要超过10^8/mL,细胞一定要吹打均匀，呈单细胞，呈单细胞，呈单细胞），然后准备接种细胞；

2.倍比稀释一个细胞浓度梯度，在96孔板中，我常规稀释的浓度如下：1000, 2000,5000,10000,15000,20000,25000,50000个/孔，共8个浓度。每组 4-6 个复孔，每孔100 μL 培养基（此处培养基不需要加抗生素）；

3.接种后根据细胞的类型不同，悬浮细胞通常培养4小时。贴壁细胞根据细胞种类不同，培养 2-4 小时，主要使细胞贴壁又没开始进入分裂期（注意使用排q将）。

4.然后每 100 μL 培养基加 10 μL CCK-8溶液。要是实验技术不成熟，害怕没有完全把液体加进去的，我用过的两种解决办法，一种是加完后，使用水平离心机，500G，1min，短暂离心；另外一种是将CCK8放入培养基中制成10%的液体，对细胞进行换液。后一种方法有一些些弊端，下周仔细分析。

5.一般的试剂盒说明书会告诉你，试剂培养一定时间后测定 OD 值。那这个一定的时间是多少呢，这个需要你自己在做标曲时就应该清楚。我通常会在加入CCK8液体后观察液体颜色的变化，在1小时开始测定OD值，湖面基本每隔1小时测一次，总共测6-8次。

6.关于测定波长，一般的试剂盒推荐使用450nm吸光度。我喜欢用双波长进行测定，检测波长450nm，参比波长600nm。不知道检测波长和参比波长的可以参考此篇帖子，连接如下：http://www.kaotop.com/file/tupian/20220803/p

7.最后制作出一组以时间为为横坐标，OD值为纵坐标的多条曲线及一条以细胞数量为横坐标，OD值为纵坐标的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量。使用此标准曲线的前提条件是试验条件完全一致。