pcr仪加热模块是纯银镀金的吗为什么

pcr仪加热模块是纯银镀金的吗为什么,第1张

是,为了减少银的氧化。pcr仪又称为基因扩增仪或热循环仪,加热模块是纯银镀金的,是为了减少银的氧化。PCR仪,分为两种,即定性PCR仪和定量PCR仪,定性PCR仪仅是利用半导体的帕尔贴效应实现温度加热或制冷的装置,其应归入税则号列8419.8990;定量PCR仪在定性PCR仪的基础上配备了光线照射和检测装置,具有DNA的定量分析功能。

进口的有:ABI的,BIO-RAD的iQ5\x0d\x0aApplied Biosystems公司的7700型实时荧光定量PCR仪是全球公认的荧光定量PCR的金标准\x0d\x0aBIONEER:国内的用户可能听说过这个品牌的不多,只有早期较多使用进口引物的实验室和研究所或留美学者知道这个品牌。Bioneer最初是以高通量的引物合成起家,引物合成在国际上有很高的知名度。后经10几年发展产品线已覆盖整个分子生物学领域,目前同takara的产品线几乎完全一样。BIONEER的普通梯度PCR仪的价格同其他进口设备的价位比较,很具有杀伤力。这家公司也于2006年底推出了荧光定量PCR仪ExicyclerTM 96,产品技术参数也是采用96孔Peltier半导体加热,5通道,16bit CCD检测,也带有梯度功能。这款产品的参数几乎与Bio-rad的IQ5一模一样,而且检测的CCD像素还要高于IQ5, 理论上检测灵敏度应该更好一些。产品价格据说还要比Bio-rad更低一些,号称是性价比最高的荧光定量PCR仪。但是缺点是现在国内用户很少,了解起来不太容易。有兴趣的客户可以联系北京力途科技有限公司进行试用,新公司都注重是售后服务,大家毕竟要亲身体会到才是最可靠的。\x0d\x0aStratagene:Stratagene现在为安捷伦公司的子公司,也是专著于分子生物学研究产品开发的公司。在国内它的试剂产品卖的不多,处于推广阶段。Stratagene的荧光定量PCR产品Mx3005P同以上两种产品技术参数也差不多96孔Peltier半导体加热,5通道,PMT检测器,但是没有梯度功能,用户不能在这台仪器上优化反应条件。另外有客户反应该仪器做工较粗糙,噪音比较大,而且边缘的孔做实验的效果不太好,但是只要使用热模块中间的孔做实验效果还是不错的。这样的问题问题在ABI7500仪器上也同样存在,但是Stratagene的价格要实惠很多。\x0d\x0a\x0d\x0a国产的:\x0d\x0a西安天隆科技有限公司的TL988型实时荧光定量PCR仪\x0d\x0a杭州博日的FQD-48A

荧光定量pcr原理如下:

荧光定量PCR(Real-time PCR),是指在PCR扩增反应体系中加入荧光基团,通过对扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

以探针法荧光定量PCR为例:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。

开始时,探针完整地结合在DNA任意一条单链上,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收,检测不到荧光信号;PCR扩增时,Taq酶将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成同步。

传统的PCR进行检测时,扩增反应后需要进行染色处理及电泳分离,并且只能作定性分析,不能准确定量,易造成污染出现假阳性,使其应用受到限制。实时定量PCR技术不仅实现了对模板的定量,且具有灵敏度高、特异性和可靠性更好、自动化程度高和无污染的特点,使得荧光定量PCR逐渐取代常规PCR。

在PCR扩增反应的最初数个循环里,荧光信号变化不大,接近一条直线,这样的直线即是基线,这条线是可以自动生成也可以手动设置的。

之后反应会进入指数增长期,这个期间扩增曲线具有高度重复性,在该期间,可设定一条荧光阈值线,它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上,但一般会将荧光阈值的缺省设置是3—15个循环的荧光信号的标准偏差的10 倍。每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数被称为CT值,这个值与起始浓度的对数成线性关系,且该值具有重现性。

Ct值最大的意义就是用来计算目的基因的表达量,此时就有两个概念容易被提及,那就是绝对定量和相对定量,绝对定量的目的是测定目的基因在样本中的分子数目,即通常所说的拷贝数。相对定量的目的是测定目的基因在两个或多个样本中的含量的相对比例,而不需要知道它们在每个样本中的拷贝数。

Ct值诚然可以被利用来计算这两种定量结果,但是绝对定量实验必须使用已知拷贝数的绝对标准品,必须做标准曲线。相对定量可以做标准曲线,也可以不做标准曲线。绝对标准品制作困难难以获取,实验室基本都是选择相对定量的方法来计算相对基因表达量。


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