如何进行青花菜的基因表达与克隆？

个体发育的过程实质是不同基因被激活或是被阻遏的过程。在发育的某个阶段，某些基因被激活而得到表达，另一些基因则被阻遏或保持阻遏的状态。对高等动植物，基因的表达与否可通过他的表达产物——蛋白质或转录产物mRNA来推测。以前对植物目的基因的克隆主要是通过已知基因产物的分析和鉴定，通过遗传表型分析或是以图谱为基础的定位克隆。国外对青花菜的分子生物学研究比国内要多，研究重点是与青花菜某些基因相关的信号传导，基因克隆等方面。

Lee B. Smith等利用与拟南芥突变体相关的同源基因对青花菜再生、花的分生组织等进行了研究。认为特殊的等位基因BoCAL-a与花序形态的分离紧密相关，并认为对青花菜凝乳发育重要的两个位点进行PCR检测可用于标记选择。Nigel E. Gapper等（2005年）研究了6-BAP、ACC和蔗糖对青花菜采摘后快速衰老的作用，发现在外源6-BAP存在的情况下，在乙烯的生物合成过程中，与其相关的BoACO减少，而同时BoACS有所增加。采摘后在有外源6-BAP的情况下，BoCP5和BoMT1的量减少而BoCAB则保持稳定，另外编码蔗糖转运器的基因（BoSUC1和BoSUC2）以及编码碳水化合物代谢酶的基因（BoINV1和BoHK1）的表达量减少。结果表明，ACC对6-BAP诱导的BoACS表达的提高有抑制作用，而6-BAP对ACC诱导的 BoACO的表达的提高不起作用。最后的结果就是细胞分裂素在延迟衰老过程中起了重要的作用。细胞分裂素对青花菜采摘后衰老的调控是通过抑制乙烯作用或生物合成。这也为碳水化合物的转运和代谢以及衰老相关的基因的表达提供了一种思路和模型。

国内对于青花菜基因表达的研究主要集中于雄性不育的相关基因方面。张国裕等（2006）对青花菜快速碱化因子RALF（Rapid Alkalinization Factors）基因进行了研究。他们以一个与甘蓝显性核不育相关的差异表达片段序列为信息探针，在NCBI与TAIR网站数据库中进行同源EST序列搜索，经人工拼接、RT-PCR克隆与序列分析验证，获得了青花菜快速碱化因子RALF基因的cDNA全长序列，并命名为BoRALFL1（GenBank序列登录号DQ059310）。该cDNA全长240 bp，编码79个氨基酸，与电子克隆获得的序列完全相同。序列分析表明，编码蛋白存在前导信号肽与多个磷酸化位点，与同源基因RALFL8核酸序列在88bp上有82%的一致性，推导的氨基酸序列在74个氨基酸上存在56%的一致性，不同植物间氨基酸序列N-端差异大，C-端具有较高的保守性。研究表明，RALF是一类多肽激素，不同植物间核酸序列的差异可能暗示了它们是整个RALF多基因家族中的不同成员，进化过程中形成的功能专化性可能造成了成员间的序列差异。然而，目前对RALF的试验研究还比较肤浅，据对拟南芥RALFL8的组织表达特异性的研究表明，它为花药高丰度表达，BoRALFL1与RALFL8相似性很高，而且克隆探针来源于与核不育的基因相关。可以推测BoRALFL1与小孢子的发育有关，对BoRALFL1基因的克隆为进一步通过反义或技术研究其在小孢子发育中的具体功能，通过克隆其启动子调控序列融合GFP或GUS基因，研究其时空表达的特异性奠定了基础。

另外，张国裕等（2006）还对青花菜雄性不育相关基因BoDHAR进行了相关的研究，同样以一个与甘蓝显性核不育相关的差异表达片段的序列为信息探针，通过在NCBI与TAIR网站数据库中进行同源EST序列搜索，经人工拼接RT-PCR克隆与序列分析，获得了青花菜脱氢抗坏血酸还原酶DHAR（dehydro ascorbate reductase）基因的cDNA与DNA全长序列，命名为BoDHAR，并利用双链接头介导PCR的染色体步行技术（genomewalking）克隆了其上游644bp的5c端序列，所获的BoDHAR基因全长1486bp，存在两个内含子，DNA编码区序列633bp，编码210个氨基酸；序列分析表明：BoDHAR与同源基因AT1G1957011cDNA序列有82.13%的一致性，推导的氨基酸序列有79.16%的一致性；编码的水溶性蛋白存在多个磷酸化位点；5c端上游区存在明显的转录调控序列，半定量RT-PCR结果表明：BoDHAR在可育系花蕾中的表达量明显高于不育系花蕾，在花药中的表达明显高于其他部位。对BoDHAR基因的克隆为进一步通过反义RNA或RNAi技术来研究其具体的功能，通过启动子序列融合GFP或GUS基因确定其表达的部位与时期及阐明其在雄性不育小孢子发育中的作用提供了依据。

redis很好用，提供缓存服务。相比memcached多了N多新数据结构和主从模式增加可用性。不过redis有一点不能满足一些互联网公司开发者需求。

redis集群中，想借用缓存资源必须得指明redis服务器地址去要。这就增加了程序的维护复杂度。因为redis服务器很可能是需要频繁变动的。

所以人家淘宝就想啊，为什么不能像 *** 作分布式数据库或者hadoop那样。增加一个中央节点，让他去代理所有事情。

所以人家就开发了这个tair。程序只要跟tair中心节点交互就OK了。甚至人家还弄了个配置服务器这种概念。免去了像 *** 作hadoop那样，还得每台hadoop一套一模一样配置文件。改配置文件得整个集群都跟着改。

tair使用了google在bigtable里面的merge-dump模型。

底层存储可以用redis或者google的levelDB.而且人家淘宝已经把他开源了。

http://tair.taobao.org/

未来，如果你用redis不弄个中央节点。你还好意思说你会redis吗？

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