什么动物对昆虫蛋白的利用率最高

1 昆虫

2 因为昆虫的消化系统非常适合消化蛋白质，特别是昆虫幼虫的消化系统，能够高效地分解和吸收蛋白质，利用率较高。

3 相比之下，哺乳动物的消化系统相对较弱，不能像昆虫那样高效地利用蛋白质。

鱼饲料蛋白质含量和昆虫蛋白质含量是相同的，但是组成蛋白的18种氨基酸的比例是不同的。鱼饲料的更加平衡，吸收和消化率更高，所以鱼饲料的价格要比昆虫蛋白高很多。

如果对你有帮助请给个满意答案，谢谢。

一、实验设计 

按照客户的预期，期望通过杆状病毒-昆虫细胞蛋白表达系统以胞外分泌的形式获得目的蛋白，因此我们分析客户提供的Target-Gene序列，整个蛋白序列呈亲水性，自身不带信号肽序列，并且序列本身含有昆虫细胞的稀有密码子，因此我们设计思路为：

11、以客户的基因序列翻译的蛋白序列为源模板，通过密码子优化一套最适宜SF9细胞系的基因序列。

12、在蛋白序列N端添加GP67信号序列帮助蛋白穿膜分泌表达至胞外，在C端添加6XHis-Tag便于重组蛋白的检测和亲和纯化。

依据上述设计思路，以基因合成的方式构建pFast-bac1-target-gene表达质粒，转化后通过蓝白筛选方法获得重组的Bacmid，经PCR鉴定之后转染sf9细胞，以获得P1代病毒和P2代病毒。侵染200ml小试表达，通过western blot检测蛋白表达情况，确认蛋白表达情况，再通过Ni-resin亲和纯化获得80%以上目的蛋白。

二、试剂和耗材

转染试剂（购自invitrogen公司）；培养基（购自HYclone公司）；抽提试剂盒（购自Axygen公司）；PCR试剂盒（IO-RAD公司)；血清（购自invitrogen公司）；六孔板（购自corning公司）；细胞培养瓶（购自corning公司）；离心管（购自corning公司）；PCR反应管(购自Fisher公司)；Agarose(购自上海基因公司)；DNA胶纯化试剂盒、质粒小提试剂盒(购自AXYGEN公司)；低熔点琼脂糖（购自sigma公司）；中性红（购自碧云天生物公司）；其它试剂均为国产分析纯。

三、主要实验仪器

Allegra 21R 台式高速冷冻离心机 (美国BECKMAN公司)，台式高速离心机(德国SORVAL公司)，Biologic LP层析系统、Mini Protean II垂直平板电泳系统、Gel Doc2000成像系统、水平电泳系统(美国BIO-RAD公司)，PTC-200基因扩增仪(美国MJ Research公司)

320-S pH计(美国Mettler Toledo公司)，AR5120电子天平(美国AHOM S公司)，MultiTemp III 恒温水浴锅、Hofer ΜV-25紫外透射仪(美国Amersham Pharmacia公司)，雪花状制冰机(日本SANYO公司)，JY92-2D超声波细胞粉碎机(中国新芝科器研究所)，蛋白核酸检测仪（南京大学普阳科学仪器厂），超净工作台(中国苏净集团)，NANODROP2000（美国Thermo公司）

四、蛋白性质分析

41 客户提供原始基因序列

GTGGGGTGCTNNNNNNNNNNNNNN---------涉及客户研究内容，不予显示----NNNNNNNNNNNNNNNCTTCTCCCTT

42 编码的蛋白序列如下（理论分子量4118KD，理论等电点PI673）

GCSVDFSKNNNNNNNNNNNNNN---------涉及客户研究内容，不予显示----NNNNNNNNNNNNNNNTAGSTDHMDHFSL

43 稀有密码子序列分析如下图所示（红色：使用频率低于10% 灰色：使用频率低于20%，绿色为正常频率密码子）

44 蛋白序列跨膜及亲疏水性分析

45 信号肽预测

综上所述：

1、蛋白理论分子量为 41KD，属于正常分子量范围，较适宜表达。

2、通过对基因密码子使用频率的分析，如果以293细胞为表达宿主，基因序列上使用频率低于20%的密码子X个，使用频率低于10%的密码子X个，优化后通过基因合成方式获得目的基因。

3、通过对蛋白的跨膜结构和亲疏水性分析，蛋白整体呈亲水性，但从473AA之后，蛋白存在典型的跨膜结构，建议去除后表达以提高成功率。

4、目的蛋白自身无信号肽，添加GP67信号肽便于蛋白分泌表达。为了纯化方便，考虑在C端添加His标签。

五、实验方法及实验结果

51 pFast-bac1-target-gene表达质粒构建

采用基于PAS(PCR-based Accurate Synthesis)的方法合成target-gene基因，双酶切连接至pFast-bac1载体的BamH I和Hind III之间；将获得的重组质粒转入TOP10克隆菌株，挑取阳性克隆子测序，测序结果拼接如下所示，单划线区为目的基因基因区域。紫色区域为酶切位点，**区域为GP67信号肽，绿色区域为6XHis标签；

g c c a c c A T G T T A C T C G T C A A C C A G A G C C A C C A A G G G T T T A A C A A G G A A C A C A C A T C C A A A A T G G T T T C A G C T A T C G T G CT T T A T G T T C T T C T T G C C G C G G C A G C T C A T T C T G C A T T C G C G A G A T T G G C T T G T A A G G A A G A T T A C A G A T A T G C C N N N N N N N ---略--- N N N N N N N A T C A T C A C C A T C A C C A T C A C T A A a a g c t t

52 使用Chromas软件查看测序峰图文件，截取部分序列示例如下：

53 pFast-bac1-XXX质粒酶切图与载体构建示意图如下所示：

54 重组杆状病毒表达载体（Bacmid，杆粒）的构建

541 杆粒菌株转化

DH10Bac Ecoli 感受态细胞冰上解冻；(2)将200ng的pFastBac1-gene转移载体缓慢加入感受态细胞中，轻轻混匀；(3)冰上放置30min，然后42℃热击90s；(4)迅速冰上静止5min； (5)向EP管里加入900 μl SOC培养基；(6)37℃，225 rpm震荡摇菌4h；(7)取100μl菌液涂于含有50 mg/ml 卡那霉素，7 mg/ml 庆大霉素，10 mg/ml 四环素，100 mg/ml x-gal,and 40 mg/ml IPTG的LB平板；(8)37℃，倒置培养48h。

542 重组Bacmid质粒的鉴定

挑取3个白色单克隆菌落接种分别接种于5ml含有50 mg/ml卡那霉素，7 mg/ml 庆大霉素，10 mg/ml 四环素，摇菌，菌液PCR初步筛选阳性克隆菌。小量抽取质粒，PCR验证杆粒正确性，因杆粒大小>135Kb，酶切方式很难进行验证，故采用PCR进行验证，理论上，若目的基因成功转座至Bacmid中，那扩增产物的大小应为（2300bp+目的基因长度）

55转染及收获病毒

551 sf9细胞的培养

sf9细胞培养使用SF 900Ⅱ培养基培养，一般每3天分瓶传代一次。处于对数生长期细胞且细胞活力大于95%的sf9 细胞用于转染实验。

552 Sf9细胞冻存方法：

细胞培养至对数生长期，活力超过90%; 计数，使得储存浓度为1×107 /ml至2×107 /ml; 准备所需量的储存培养液，加DMSO至10%和FBS至30%，预冷培养液保存于4℃; 离心悬浮细胞或单层细胞 100×g，5min，用预冷的冻存液悬浮至所需密度; 混匀，分装至冻存管; 将冻存管放入填有脱脂棉的泡沫盒，-80℃放置1天；移入液氮罐中保存。

553 Bacmid转染sf9细胞

(1)在六孔板中接种9×105个细胞/2ml/孔。其中培养基Grace’s medium中含有青霉素50U/ml，链霉素50ug/ml，10％FBS；

(2) 27℃培养1h，使细胞贴壁; 

(3) 在这期间制备Bacmid与Cellfectin Reagent复合物：

A 用100ul不完全Grace’s medium（不含双抗、FBS）稀释1ug Bacmid（约5ul）; 

B 在使用前将Cellfectin Reagent倒置5~10次，使其充分混匀，取6ul Cellfectin Reagent用100ul不完全Grace’s medium（不含双抗、FBS）稀释; 

C 将上述两种稀释液合并（总体积约210ul），轻轻混匀，室温孵育15~45min; 

(4) 在制备Bacmid与Cellfectin Reagent复合物期间，将六孔板中的培养基吸掉，用2ml不完全Grace’s medium（不含双抗、FBS）洗涤一次，去掉培养基; 

(5) 在含有210ul的复合物的管内加入800ul的不完全Graces medium（不含双抗、FBS），轻轻混匀，加到每个孔中; 

(6) 将六孔板内的细胞孵育5h，27℃；

(7) 去掉复合物混合液，然后在每个孔中加2ml完全培养基（SF900含双抗、10％FBS）；

(8) 在27℃湿度培养箱中孵育72h或着直到细胞出现病毒感染迹象。上清和沉淀需要分别制备样品，待后期western blot表达鉴定使用。

554 P1病毒液的收集

当细胞出现感染迹象时，将细胞上清转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min以去除细胞及大的碎片，可用蛋白结合率低的02um的滤膜过滤，滴度损失小于10%；将含病毒的上清液转移到另一个无菌带盖的EP管中（一般，P1的滴度在10^6pfu/ml左右）, 将得到的病毒液体避光置于4℃冰箱（短期）。若长期保存，进行1ml分装，避光储存于-80℃。

555 P2病毒扩增及收获

原代病毒滴度(P1)较低，介于1×106~1×107，扩增后滴度为1×107~1×108。 50ml摇瓶中加入适量的P1病毒。扩增病毒时可用下列公式进行计算：

MOI(Multiplicity of infection)在001~01之间, 

接种量 （ml）:desired MOI (phf/ml) ×(total number of cells) tlter of viral inoculum (puf/ml) 

感染细胞48 h收集的病毒扩增的将近100倍，超过48h 收集的病毒质量较低。每种病毒的收集时间都有一定的差别，如在72h收集，但是随着细胞的裂解，病毒的增殖活力会受损。

556 病毒滴度检测

六孔板中细胞120万/孔，静置培养1h，病毒梯度稀释101 102 103 104 105 106 107 108 ，去掉六孔板中的上清，取106、107、108三个滴度病毒加入到六孔板中，平行对照2组，孵育1h，配置空斑培养基，每孔加入2mL空斑培养基；第四天加入中性红染色液；7-10天计数空斑数，算病毒滴度。

56 重组蛋白表达纯化

f9细胞以2×106/ml瓶接种于500ml细胞培养瓶中；待细胞生长至对数期，接P2代病毒感染sf9细胞；48~72h内收集细胞及上清，用于重组蛋白表达的检测。

1、依此条件方法放大培养。4℃ 10000g离心20 min，取上清；

2 利用低压层析系统，上清液以05 ml/min流速上样至Ni-IDA Binding-Buffer预平衡的Ni-IDA -Sepharose CL-6B亲和层析柱；

3 用Ni-IDA Binding-Buffer以05 ml/min流速冲洗，至流出液OD280值到达基线； 

4 用Ni-IDA Washing-Buffer(20 mM Tris-HCl，20 mM咪唑，015 M NaCl，pH80)以1 ml/min流速冲洗，至流出液OD280值到达基线；

5 用Ni-IDA Elution-Buffer(20 mM Tris-HCl，250 mM咪唑，015 M NaCl，pH80)以1 ml/min流速洗脱目的蛋白，收集流出液；

6将上述收集的蛋白溶液加入透析袋中，使用PBS（PH74）进行透析过夜；

7 进行10% SDS-PAGE分析。

57 Western Blot检测

1 样品上样001ug。

2 上样完毕后，聚丙烯酰胺凝胶先90V跑完积层胶，再将电压升至200V直到电泳结束。

3 电泳结束后，取下凝胶进行转膜，恒压100V转膜，约为15小时。

4 电转结束后，取下膜后先用PBS洗涤4次，每次5分钟。然后置于5%脱脂奶粉封闭液中封闭37℃ 1小时。

5 用封闭液稀释一抗，膜在一抗稀释液中37℃反应1小时。

6 洗膜4次，每次5 分钟；用含5%牛奶的封闭液稀释二抗。膜在二抗中37℃反应1小时。

7 洗膜ECL显影。

六 实验结果及分析

61 质粒鉴定结果

611 质粒浓度

612 PCR鉴定结果

说明：

目的基因2600bp，使用pUC/M13引物扩增产物理论大小为4900bp，实验结果与预期一致。

62 P2代病毒蛋白表达鉴定

63 病毒滴度检测，采用病毒空斑实验方法检测病毒滴度

说明：

P2代病毒感染sf9细胞，通过检测细胞上清和细胞裂解液发现：目的蛋白大部分存在上清中，正常分泌至胞外。

说明：

通过6孔板病毒空斑实验法检测病毒低毒，可以确认我们提供的病毒低毒达到107pfu/ml。

64 通过Ni-IDA-Resin亲和纯化目的蛋白，获得纯度约85%的目的蛋白

说明：

通过Ni-IDA-resin收集目的蛋白，经过浓缩处理后使用SDS-PAGE检测，得到了85%以上的目的蛋白。

说明：

通过SEC-HPLC进一步纯化，获得单一峰的目的重组蛋白，HPLC检测纯度在95%以上。

七 发货清单

序号类型名称规格常数

1克隆质粒PMD18-target gene2-4ug2

2克隆菌株PMD18-target gene in DH5 α1ml1

3表达菌株PFast-Bac1-target2-4ug2

4杆粒bacmidBacmid-target in TOP101ml1

5P2代病毒MT 107pfu/ml1ml5

6重组蛋白MT protein 纯度>85%，浓度 05mg/ml1ml3

钟鼎生物官网

      为了在野外生存，贝先生常说昆虫的蛋白质是牛肉的六倍。吃昆虫真的好吗？一项在中国引进的野外生存计划在全国范围内广受欢迎。它主要展示了一个人如何逃离野外。这项计划还使前英国特种部队成员贝尔·格里尔斯成为世界超级明星。中国观众称他为“贝尔”。在他的“野外生存”节目中，他不止一次地说，昆虫是野外最容易捕获的食物，蛋白质含量是牛肉的6倍，你转身就可以吃了。

       这也给了贝先生“站在食物链顶端的能力”，昆虫真的有这么高的营养价值吗？那么，为什么吃昆虫还没有成为人类的主流呢？对于这个问题，从人类进化的角度来看，昆虫也是人类食物的一部分。然而，随着人类文明的发展，我们所吃的昆虫经过几千年的精心挑选。人体吸收和分解昆虫体内的营养是没有问题的。

      最常见的蚱蜢、蝗虫、蚕蛹并不是我们餐桌上的常客，但不仅在云南等地，甚至在山东等地，它们也有吃昆虫的传统。美国对蝗虫等昆虫进行了研究，实验结果令人惊叹。在同一品质下，蝗虫的蛋白质含量远高于牛肉，也远高于肉类。昆虫最大的优点是蛋白质含量丰富，脂肪含量低，数量丰富，易于生长。如果使用得当，必将成为未来人类的一种新型食品。然而，存在的一个主要问题是，牛肉在蛋白质方面不如昆虫，但它的个体尺寸仍然太小。如果它们真的和牛肉蛋白一样好，它们现在会吃很多。

        有些昆虫甚至对人的肠胃都有好处，所以虽然长得不好看，但其实很有营养。当然，这也指一些昆虫，不是所有的昆虫都能吃的。此外，昆虫不能生存。一方面，贝先生之所以活下来，是因为在荒野中追求真实性，以及节目的娱乐性。普通人还是不推荐。吃昆虫对身体有害吗？诚然，危害并不是昆虫本身，而是农药带来的潜在因素。昆虫的抵抗力很强。换言之，昆虫体内残留的农药可能与之无关，但对人类来说却是致命的，这也是昆虫至少在现阶段仍无法成为主流的原因。

昆虫蛋白确实比植物蛋白和动物蛋白好很多，不用担心胆固醇问题而且还含有多种氨基酸，又利于人体吸收。我也吃的人为峰这个牌子的昆虫蛋白，研发团队有华农的刘吉平教授坐镇，而且有多项专利发明，值得信赖，你亲戚没有推荐错的。

饲料中各种昆虫蛋白所对应的养殖对象也不同

目前世界上可以做饲料的昆虫有500余种，其中有许多品种营养丰富，蛋白质含量高，可用于代替精饲料喂养畜禽和名优鱼品，提高养殖产量和经济效益。主要有以下几种： 面包虫 又称黄粉虫，其营养丰富，其幼虫、蛹和成虫的蛋白质含量分别为51%、57%和61%，是高蛋白质的优质饲料，营养价值约为鱼粉的两倍，但其经济成本只有鱼粉的1/3。面包虫不仅可作喂养畜禽、龟鳖及鱼、虾、蟹等的精饲料，更是饲养蛇、蝎的上等饲料。 蚯蚓 蚯蚓粉是较好的动物蛋白质饲料，而养殖蚯蚓成本低、生长快，繁殖率高，通常用米糠、牛猪粪、树叶、杂草及土杂肥等即可。用人工繁殖的蚯蚓制成的蚯蚓粉，蛋白质含量约为66%。据试验，在粗饲料中添加5%～8%蚯蚓粉喂养畜禽和鱼类，其生长速度可提高15%。 丰年虫 又称卤虫，是小型低等甲壳动物，其大量生长在各地盐田和咸水湖里，也可人工培育。一条母虫每次产卵80～100多个，一生可繁殖5～10次。初孵1～2天后长成幼体，含丰富蛋白质、脂肪及激素，是鱼、虾、蟹幼体和成体的良好饵料。目前世界上有85%以上的鱼养殖动物幼体均可用丰年虫幼体作为活饵料饲喂。 蚕蛹经过除臭、烘干、脱脂，再烘干和粉碎后便成为蚕蛹粉，其蛋白质含量高达70%以上，添入饲料中喂养畜禽和青蛙、牛蛙及虾类，可收到良好效果。 蝇蛆 用麦麸、米糠、猪粪、碎骨和糖等做原料可培育蝇蛆。培育的活蝇蛆可直接用于喂养鸡、鸭、鹅等禽类；而加工成的蝇蛆粉，其蛋白质含量高达68%，用来饲喂猪和进行鱼养殖等均可促进生长。 白蚂蚁 用稻草、杂木等培育出来的白蚂蚁，约经一周便可用作饲料。蚂蚁蛋白质含量达42%以上，还含有微量元素等。将白蚂蚁烫死后晒干，拌入饲料中喂养畜禽，不仅生长快，而且可提高免疫力，减少疾病发生。

以上就是关于什么动物对昆虫蛋白的利用率最高全部的内容，包括:什么动物对昆虫蛋白的利用率最高、鱼食料蛋白质和昆虫的蛋白质一样吗、杆状病毒-昆虫细胞蛋白表达服务案例—钟鼎生物等相关内容解答，如果想了解更多相关内容，可以关注我们，你们的支持是我们更新的动力！