混响效果器的英文:reverb
reverb 读法 英 ['riːvɜːbrɪ'vɜːb] 美 ['rivɝb]
1、n. 混响(效果);混响装置
2、v. 使??余乱斗响;使??混穗唯响
短语:
1、Spring Reverb d簧混响
2、Hall Reverb 音乐厅混响
3、Plate Reverb 板式混响
4、Reverb effect 混响特效
5、Reverb Type 混响类型
扩展资料Reverb的近义词:sound
词语用法:
1、sound的基本意思是“发出声音”“响”,引申可表示“发出?的信号”。sound还可作“探测”解,指以测深索来测量水的深度,引申可表示“试探”“探询”,指小心或含蓄地试探他人的观点、意见等。
2、sound可用作及物动词,也可用作不及物动词。用作及猜陪培物动词时,接名词或代词作宾语,可用于被动结构。sound也可用作系动词,意思是“听起来”,其后接名词、形容词或as if〔as though〕引导的从句作表语。
3、sound用于形容词前表示谈话人对某人或某事的印象,包含对所听到或所阅读到的关于某人某事的印象。
词汇搭配:
1、sound card 音效卡,声卡
2、sound effect 音响效果
3、sound box 音箱
4、sound source 声源
5、sound intensity 声音强度
SQLite3是目前最新的SQLite版本。可以从网站上下载SQLite3的源代码(本书使用的版本是sqlite-3.6.12.tar.gz)。解压缩后进入sqlite-3.6.12的根目录,首先命令“./configure”生成Makefile文件,接着运行命令“make”对源代码进行编译,最后运行命令“make install”安装SQLite3。安装完毕后,可以运行命令sqlite3查看SQLite3是否能正常运行,如下所示:
[root@localhost ~]# sqlite3
SQLite version 3.6.12
Enter ".help" for instructions
Enter SQL statements terminated with a ""
sqlite>
可以看到,SQLite3启动后会停留在提示符sqlite>处,等待用户输入SQL语句。
在使用SQLite3前需要先了解下SQLite3支持的数据类型。SQLite3支持的基本数据类型主要态裂有以下几类:
NULL
NUMERIC
INTEGER
REAL
TEXT
SQLite3会自动把其他数据类型转换成以上5类基本数据类型,转换规则如下所示:
char、clob、test、varchar—>TEXT
integer—>INTEGER
real、double、float—>REAL
blob—>NULL
其余数据类型都转变成NUMERIC
下面通过一个实例来演示SQLite3的使用方法。
新建一个数据库
新建数据库test.db(使用.db后缀是为了标识数据库文件)。在test.db中新建一个表test_table,该表具有name,、sex、age三列。SQLite3的具体 *** 作如下所示:
[root@localhost home]# sqlite3 test.db
SQLite version 3.6.12
Enter ".help" for instructions
Enter SQL statements terminated with a ""
sqlite>create table test_table(name, sex, age)
如果数据库test.db已经存在,则命令“sqlite3 test.db”会在当前目录下打开test.db。如果数据库test.db不存在,则命令“sqlite3 test.db”会在当前目录下新建数据库test.db。为了提高效率,SQLite3并不会马上创建test.db,而是等到第一个表创建完成后才会燃闭敬在物理上创建数据库。
由于SQLite3能根据插入数据的实际类型动态改变列的类型,所以在create语句中并不要求给出列的类型。
创建索引
皮慎 为了加快表的查询速度,往往在主键上添加索引。如下所示的是在name列上添加索引的过程。
sqlite>create index test_index on test_table(name)
*** 作数据
如下所示的是在test_table中进行数据的插入、更新、删除 *** 作:
sqlite>insert into test_table values ('xiaoming', 'male', 20)
sqlite>insert into test_table values ('xiaohong', 'female', 18)
sqlite>select * from test_table
xiaoming|male|20
xiaohong|female|18
sqlite>update test_table set age=19 where name = 'xiaohong'
sqlite>select * from test_table
xiaoming|male|20
xiaohong|female|19
sqlite>delete from test_table where name = 'xiaoming'
sqlite>select * from test_table
xiaohong|female|19
批量 *** 作数据库
如下所示的是在test_table中连续插入两条记录:
sqlite>begin
sqlite>insert into test_table values ('xiaoxue', 'female', 18)
sqlite>insert into test_table values ('xiaoliu', 'male', 20)
sqlite>commit
sqlite>select * from test_table
xiaohong|female|19
xiaoxue|male|18
xiaoliu|male|20
运行命令commit后,才会把插入的数据写入数据库中。
数据库的导入导出
如下所示的是把test.db导出到sql文件中:
[root@localhost home]# sqlite3 test.db ".dump" >test.sql
test.sql文件的内容如下所示:
BEGIN TRANSACTION
CREATE TABLE test_table(name, sex, age)
INSERT INTO "test_table" VALUES('xiaohong','female',19)
CREATE INDEX test_index on test_table(name)
COMMIT
如下所示的是导入test.sql文件(导入前删除原有的test.db):
[root@localhost home]# sqlite3 test.db <test.sql
通过对test.sql文件的导入导出,可以实现数据库文件的备份。
11.2.2 SQLite3的C接口
以上介绍的是SQLite3数据库的命令 *** 作方式。在实际使用中,一般都是应用程序需要对数据库进行访问。为此,SQLite3提供了各种编程语言的使用接口(本书介绍C语言接口)。SQLite3具有几十个C接口,下面介绍一些常用的C接口。
sqlite_open
作用:打开SQLite3数据库
原型:int sqlite3_open(const char *dbname, sqlite3 **db)
参数:
dbname:数据库的名称;
db:数据库的句柄;
sqlite_colse
作用:关闭SQLite3数据库
原型:int sqlite_close(sqlite3 *db)
例如:
test.c:
#include <stdio.h>
#include <sqlite3.h>
static sqlite3 *db=NULL
int main()
{
int rc
rc= sqlite3_open("test.db", &db)
if(rc)
{
printf("can't open database!\n")
}
else
{
printf("open database success!\n")
}
sqlite3_close(db)
return 0
}
运行命令“gcc –o test test.c –lsqlite3”进行编译,运行test的结果如下所示:
[root@localhost home]# open database success!
sqlite_exec
作用:执行SQL语句
原型:int sqlite3_exec(sqlite3 *db, const char *sql, int (*callback)(void*,int,char**,char**), void *, char **errmsg)
参数:
db:数据库;
sql:SQL语句;
callback:回滚;
errmsg:错误信息
例如:
test.c:
#include <stdio.h>
#include <sqlite3.h>
static sqlite3 *db=NULL
static char *errmsg=NULL
int main()
{
int rc
rc = sqlite3_open("test.db", &db)
rc = sqlite3_exec(db,"insert into test_table values('daobao', 'male', 24)", 0, 0, &errmsg)
if(rc)
{
printf("exec fail!\n")
}
else
{
printf("exec success!\n")
}
sqlite3_close(db)
return 0
}
编译完成后,运行test的结果如下所示:
[root@localhost home]# ./test
exec success!
[root@localhost home]# sqlite3 test.db
SQLite version 3.6.11
Enter ".help" for instructions
Enter SQL statements terminated with a ""
sqlite>select * from test_table
daobao|male|24
sqlite3_get_table
作用:执行SQL查询
原型:int sqlite3_get_table(sqlite3 *db, const char *zSql, char ***pazResult, int *pnRow, int *pnColumn, char **pzErrmsg)
参数:
db:数据库;
zSql:SQL语句;
pazResult:查询结果集;
pnRow:结果集的行数;
pnColumn:结果集的列数;
errmsg:错误信息;
sqlite3_free_table
作用:注销结果集
原型:void sqlite3_free_table(char **result)
参数:
result:结果集;
例如:
test.c:
#include <stdio.h>
#include <sqlite3.h>
static sqlite3 *db=NULL
static char **Result=NULL
static char *errmsg=NULL
int main()
{
int rc, i, j
int nrow
int ncolumn
rc= sqlite3_open("test.db", &db)
rc= sqlite3_get_table(db, "select * from test_table", &Result, &nrow, &ncolumn,
&errmsg)
if(rc)
{
printf("query fail!\n")
}
else
{
printf("query success!\n")
for(i = 1i <= nrowi++)
{
for(j = 0j <ncolumnj++)
{
printf("%s | ", Result[i * ncolumn + j])
}
printf("\n")
}
}
sqlite3_free_table(Result)
sqlite3_close(db)
return 0
}
编译完成后,运行test的结果如下所示:
[root@localhost home]# ./test
query success!
xiaohong | female | 19 |
xiaoxue | female | 18 |
xiaoliu | male | 20 |
daobao | male | 24 |
sqlite3_prepare
作用:把SQL语句编译成字节码,由后面的执行函数去执行
原型:int sqlite3_prepare(sqlite3 *db, const char *zSql, int nByte, sqlite3_stmt **stmt, const char **pTail)
参数:
db:数据库;
zSql:SQL语句;
nByte:SQL语句的最大字节数;
stmt:Statement句柄;
pTail:SQL语句无用部分的指针;
sqlite3_step
作用:步步执行SQL语句字节码
原型:int sqlite3_step (sqlite3_stmt *)
例如:
test.c:
#include <stdio.h>
#include <sqlite3.h>
static sqlite3 *db=NULL
static sqlite3_stmt *stmt=NULL
int main()
{
int rc, i, j
int ncolumn
rc= sqlite3_open("test.db", &db)
rc=sqlite3_prepare(db,"select * from test_table",-1,&stmt,0)
if(rc)
{
printf("query fail!\n")
}
else
{
printf("query success!\n")
rc=sqlite3_step(stmt)
ncolumn=sqlite3_column_count(stmt)
while(rc==SQLITE_ROW)
{
for(i=0i<2i++)
{
printf("%s | ", sqlite3_column_text(stmt,i))
}
printf("\n")
rc=sqlite3_step(stmt)
}
}
sqlite3_finalize(stmt)
sqlite3_close(db)
return 0
}
编译完成后,运行test的结果如下所示:
[root@localhost home]# ./test
query success!
xiaohong | female | 19 |
xiaoxue | female | 18 |
xiaoliu | male | 20 |
daobao | male | 24 |
在程序中访问SQLite3数据库时,要注意C API的接口定义和数据类型是否正确,否则会得到错误的访问结果。
一、实验设计
我们分析客户提供的重轻链理论序列,符合理论分子量大小,抗体蛋白也无跨膜等特殊结构,因此我们设计思路为:
1.1、以客户的基因序列翻译的蛋白序列为源模板,通过密码子优化一陆扰套最适宜HEK293T细胞系的基因序列。
1.2、推荐客户使用钟鼎生物的自主载体pAZ-V5-hCH-IgG1和pAZ-V5-hCL-IgGκ载体来进行实验,利用载体自带的V5信号肽序列帮助蛋白穿膜分泌表达至胞外,重轻链蛋白在细胞上清中形成二硫键,组装成四聚体结构。
依据上述设计思路,以基因合成的方式构建pAZ-V5-hCH-IgG1和pAZ-V5-hCL-IgGκ质粒,经过测序和酶切验证无误后,提取无内毒素的质粒。转染200ml HEK293T细胞,通过western blot检测蛋白表达情况,确认蛋白表达情况,再通过Protein A亲和纯化获得80%以上目的蛋白。
二、试剂和耗材(略),培养基配方如下(略)
三、主要实早拆旦验仪器 (略)
四、实验分析及设计
4.1 抗体重轻链可变区序列获得(抗体测序项目请参考单独的实验案例文件)
针对基因序列分析稀有密码子情况,分析可变区蛋白序列的跨膜结构和亲疏水性,从而决定载体设计的实验方案,由于篇幅限制,此处不做详细的累述。我们专业的技术支持会依据您提供的信息免费分析并设计实验方案。
五、实验方法及实验结果
5.1 pAZ-V5-hCH-IgG1表达质粒构建(pAZ-V5-hCL-IgGκ流程相似,此处略)
采用基于PAS(PCR-based Accurate Synthesis)的方法合成重链可变区基因,重组克隆连接至pAZ-V5-hCH-IgG1载体的;将获得的重组质粒转入TOP10克隆菌株,挑取阳性克隆子测序,测序结果拼接如下所示(序列略),载体结构如下;
5.2 使用Chromas软件查看测序峰图文件,截取部分序列示例如下
测序拼接序列与理论序列相比对,结果显示获得序列与理论序列100%匹配,比对文件截图如下所示
5.3 pAZ-V5-hCH-IgG1质粒酶切图与载体构建示意图如下所示:
5.4.1. 无内毒素质粒抽提
使用Sigma公司Endotoxin Free质粒重量抽提试剂盒抽提表达质粒,经LAL法测定<0.1EU/ug。
5.4.2. 待转染细胞预处理御棚
转染前一天,将形态良好、生长旺盛处于对数生长期的HEK93T细胞用胰蛋白酶消化后稀释至4×105/mL的密度,接入24孔细胞培养板,轻微振荡使细胞均匀铺在细胞板孔内,每孔500ul,用DMEM高糖培养基培养和传代细胞。平放在37℃、5%二氧化碳培养箱中培养,待细胞长至80-90%汇合度时,可以开始转染 *** 作。
5.4.3 细胞转染
取0.8ug质粒,加入50ul Optipro SFM,混匀后加入2ul 转染试剂,再次混匀后室温孵育20min。将DNA-转染试剂复合物滴加至24孔板中,轻轻混匀,37℃培养箱培养48h。
5.4.4 Western Blot检测培养上清(客户提供待测抗原)
样品上样0.01ug,上样完毕后,聚丙烯酰胺凝胶先90V跑完积层胶,再将电压升至200V直到电泳结束。电泳结束后,取下凝胶进行转膜,恒压100V转膜,约为1.5小时。取下膜后先用PBS洗涤4次,每次5分钟。然后置于5%脱脂奶粉封闭液中封闭37℃ 1小时。用封闭液稀释一抗,膜在一抗稀释液中37℃反应1小时。 洗膜4次,每次5 分钟;用含5%牛奶的封闭液稀释二抗。膜在二抗中37℃反应1小时,洗膜ECL显影。
5.5.1待转染细胞准备
将处于对数生长期的293T细胞用Trypsin消化后稀释至4×105/mL的密度,种于2L的滚瓶中。每个滚瓶加200ml DMEM高糖培养基(含3%胎牛血清),调节滚瓶转速至20转/小时,使细胞均匀贴到转瓶表面,约24小时左右,当细胞贴壁面汇合至90%时进行转染。
5.5.2 DNA预处理
取100ug无内毒素质粒,加入13ml OptiSFM,混匀后加入250ul 转染试剂,再次混匀后室温孵育20min。
5.5.3 细胞转染与表达
将DNA-转染试剂复合物滴加至滚瓶中,轻轻混匀,调节滚瓶转速20转/小时 ,37℃培养箱培养10个小时后换3% 血清的 DMEM中糖500ml,调节滚瓶转速40转/小时。表达4天后收取上清。
5.5.4 重组抗体纯化
准备ProteinA纯化柱,用5-10倍柱体积的PBS平衡柱子。细胞上清以1ml/min的速度上样至ProteinA柱。用20 mM PB缓冲液以0.5 ml/min流速洗脱杂样,至流出液OD280值到达基线。洗脱在蛋白值至核酸蛋白检测仪数值稳定不变时准备洗脱。用Elution-Buffer(0.1M Nacl, 0.1M 甘氨酸, pH 3.0) 以1 ml/min流速洗脱目的抗体,收集流出液,并用PH9.0 Tris- HCL使其pH值恢复至中性,将收集的抗体溶液加入透析袋中,用20 mMPBS(PH7.4)透析过夜,透析后的样品进行SDS-PAGE纯度分析和BCA浓度检测。
补充说明:
1、正常情况下,抗体蛋白的表达量都比较可观,但是某些突变序列产量会偏低,因此我们蛋白交付量跨度较大。
2、一般我们使用还原性和非还原性电泳检测重组抗体,如果客户需要验证抗体的特异性,需提供额外抗原使用WB检测。
3、我们使用哺乳动物细胞表达获得重组抗体,我们只承诺蛋白序列与设计相符,不承诺重组抗体具有客户预期的生理活性。
4、即使蛋白不表达或表达量极低,我们无法获得目的蛋白,我们也会提供全套的实验流程和原始照片。
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