怎样构建慢病毒载体用来标记原代细胞的细胞骨架？

原代细胞较难转染，可以先构建慢病毒，再用慢病毒进行转染。

1.将actin基因，放入慢病毒融合表达载体，与荧光蛋白（GFP）融合表达，注意避免移码突变。

2.然后将重组质芦仿粒以及辅助质粒共转脊哗升染细胞樱老，可以用脂质体法，慢病毒配套细胞一般为293。

3.收集慢病毒，浓缩。

4.用慢病毒转染原代细胞。做好先做预实验。

5.重组蛋白（例如，GFP-actin）在细胞内表达后，自然的混入细胞骨架中，将之标记绿色荧光。

1-3步骤可以委托公司进行，拿到慢病毒液后可以进行转染，或者要求公司做稳转株。

百度--慢病毒，出来的公司就可以做，咨询下就好。

目录1 拼音2 英文参考3 中文名称4 英文名称5 分类类型6 分类7 GeneBank编号8 关于麻疹9 麻疹病毒基本特性10 麻疹病毒的传播途径11 病毒感染的临床症状12 麻疹病毒感染的并发症13 麻疹疫苗 1 拼音

má zhěn bìng dú

2 英文参考

measles virus

3 中文名称

麻疹病毒

4 英文名称

Measles virus （Edmonston virus）；MeV

5 分类类型

种

6 分类

单分子负链RNA病毒目>副粘病毒科>副黏病毒亚科>麻疹病毒属 >麻疹病毒

7 GeneBank编号

[Z66517, K01711, X16565, Y09629]

8 关于麻疹

麻疹是由麻疹病毒（Measles virus）引起的急性发疹性呼吸道传染病。它的特点是传染性强，人群普遍易感，发病多以小儿为主。孕妇患麻疹后可引起早产及自发性流产，并可增加胎儿的危险性。临床上以发热、上呼吸道炎、颊黏膜出现麻疹黏膜斑（又称柯氏斑）及全身丘斑疹为主要特征，常并发中耳炎、支气管炎、脑炎等。人类是麻疹病毒的贮存宿主，麻疹病毒只能自然感染人蚂唤和一些类人猿。

麻疹在历史上曾经是严重威胁儿童生命和健康的重要传染病，被认为是“人人必得”。中国对麻疹的记载始于307年，国外关于麻疹的最早记载是公元9世纪。阿拉伯医学家当时认为麻疹是一种轻型天花，至1675年才认识到是一种独立的疾病。1864年对法罗群岛麻疹流行病学做了第一次确切的描述，病证实麻疹是在人和人之间经呼吸道传轮如播。

麻疹呈世界性分布，曾经是严重危害儿童生命健康的传染病之一。在发病的高峰年份（1965年），中国大约有900万例，发病率达1432/10万人。1965年开始接种疫苗后，1984年开始强化免疫，麻疹发病率才急剧下降，年发病率降到10/10万人以下。但全球每年仍有大约4500万麻疹病例，导致100万婴儿和儿童的死亡。

9 麻疹病毒基本特性

麻疹病毒是单股螺旋RNA病毒，是副黏病毒科麻疹病毒属成员。病毒颗粒直径120250nm，形态为球形的多态。病毒有双层膜，膜厚1020nm，上有58nm的短穗状突起，为血凝素（H）、血溶素（腊物启F，即融合蛋白），是病毒的表面抗原，内膜层内侧为膜蛋白（M），病毒膜包裹着核衣壳，核衣壳直径17nm，含有RNA和核壳体蛋白（N）、大蛋白（L）、磷蛋白（P），病毒颗粒中还可能存在肌动蛋白（Actin）。

麻疹病毒长期以来被认为是抗原单一而稳定，但自从单克隆抗体技术问世以来，已发现不同毒株的抗原结构不完全一致，抗原也存在变异。根据麻疹病毒血凝素基因核蛋白基因核苷酸序列的差异，国际上将麻疹病毒分为7个组。中国19931994年分离的麻疹病毒株与这7组不同，是新的第8组基因亚型。

10 麻疹病毒的传播途径

麻疹病人是病毒的唯一传染源。患者感染早期病毒在呼吸道大量增殖，含有病毒的分泌物通过病人的呼吸、咳嗽和喷嚏排出体外并悬浮于空气中，形成麻疹病毒气溶胶。易感者暴露在麻疹病毒气溶胶空间经呼吸道感染，也可伴随眼结膜感染。由于麻疹病毒气溶胶可以存在一定时间，所以病人虽已离去，易感者进入病人曾逗留过的场所，而无需与病人直接接触仍可被感染。被病毒气溶胶污染的衣物、机械携带工具等，在短时间、短距离内也可能起到传播作用。

11 病毒感染的临床症状

病毒感染的临床症状分为典型麻疹和非典型麻疹两类。

典型麻疹的病程常表现为4个阶段，即潜伏期、前驱期、出疹期和恢复期。潜伏期1014天；前驱期亦称出疹前期，约35天，发热3839℃以上，伴有怕光、流泪、流鼻涕和咳嗽等，与患感冒相似，经过34天，鼻炎、咳嗽加重，眼结膜充血，同时在口腔颊黏膜周围可见带有红晕的灰色小点，大小不等，为麻疹黏膜斑，这是早期诊断的重要依据。出疹期是患者发热34天后开始，患者出现皮疹，发疹期一般持续34天，皮疹为玫瑰色丘斑，一般先从耳后、前额、发际部开始，渐渐波及前胸、后背及躯干，四肢出现稠密的丘疹样皮疹，有的疹子稠密而融成一片。皮疹发展至 *** 后，开始恢复期，皮疹按出疹顺序隐退，全身不适及呼吸道症状逐渐减退，体温降至正常，皮疹颜色变暗，一般退热后23天皮疹全退，疹退后留有棕 *** 素沉着和糠皮样脱屑。出疹期如果患儿高烧不退，疹子又出不来，或显现一下疹子忽又隐退，咳嗽加重，呼吸发憋，有可能并发了肺炎，若出疹过程中患儿声音嘶哑，喝水即发呛，这可能并发了喉炎。这些并发症应及时发现，引起重视，加以防治。

非典型麻疹包括轻型麻疹、异型麻疹、重型麻疹、新生儿麻疹和成人麻疹。异型麻疹主要发生于曾接种麻疹灭活疫苗者，多出现于接种后6个月到6年间。重型麻疹是由于病毒毒力较强或机体抵抗力低，或因严重继发细菌感染所致，可出现中毒性、休克性、出血性等。

12 麻疹病毒感染的并发症

麻疹是小儿常见的传染病，传染性强，发病率高，并易与支气管性肺炎或脑膜炎并发，麻疹病毒感染的并发症包括肺炎、喉炎、心血管功能不全、脑炎和亚急性硬化性全脑炎等。患并发症者病死率高。如果没有并发症，就会逐渐康复。

13 麻疹疫苗

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