如何配置PH=8.0的100mM PBS-EDTA缓冲液

比如配置1L的该溶液，当然是按照PBS缓冲液的组成，以及100mMEDTA计算各化学品所需要的量，然后全部溶解，测定pH值，并用酸或碱把pH值调节到80，转移到1L的容量瓶中，加入蒸馏水，然后定容到1L。ok。

请参考：）第一种方法：
1，称取2101克柠檬酸（C6H8O7H2O），1000ml去离子水溶解。摇匀。
2，称取磷酸二氢钠（NaH2PO412H2O）7164克，用去离子水解热溶解，定容到1000ml摇匀。
2，在第一步溶液中取243ml与第二步溶液257ml混合。摇匀。保存在4度冰箱中即可。
第二种方法：
1、156g磷酸二氢钠（含2个结晶水）溶于500mL水中。
2、3582g磷酸氢二钠（含12个结晶水）溶于500mL水中。取
D2221 53mL。
D2222 947mL。
3、氯化钠17g加水至2000mL即为01M，pH80的磷酸缓冲液，必要时用05M碳酸钠校正pH值。

02mol/L（pH74）磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer,PB）试剂：NaH2PO42H2ONa2HPO412H2O配制方法：配制时,常先配制02mol/L的 NaH2PO4和02mol/L的Na2HPO4,两者按一定比例混合即成02mol/L的磷酸盐缓冲液（PB）,根据需要可配制不同浓度的PB和PBS（1）02mol/L的 Na2HPO4；称取Na2HPO412H2O 312g（或 NaH2PO4H2O 276g）加重蒸水至1000ml溶解（2）02mol/L的 Na2HPO4：称取NaHPO412H2O 71632g（或 Na2HPO47H2O 536g或 Na2HPO42H2O356g）加重蒸水至1000ml溶解（3）02mol/L pH74的PB的配制：取19ml 02mol/L的 NaH2PO4和81ml 02mol/L的 Na2HPO412H2O,充分混合即为02mol/L的PB（pH约为775）若pH偏高或偏低,可通过改变二者的比例来加以调整,室温保存即可

配置方法：
磷酸盐缓冲液(pH65)
取磷酸二氢钾068g,加01mol/L氢氧化钠溶液152ml，用水稀释至100ml，即可完成。
磷酸盐缓冲液（Phosphate
Buffered
Saline，简称PBS）的是常用的用于生物学研究的一个缓冲溶液。PBS可以为三种溶液的英文缩写，分别是磷酸盐缓冲溶液（phosphate
buffered
solution）、磷酸盐缓冲盐水（phosphate
buffered
saline）及
磷酸盐缓冲钠（phosphate
buffered
sodium），其配制方法不同，pH值不同，发挥的生物学作用亦不完全相同。如无特殊说明，生物学上常用的PBS是中性磷酸盐缓冲溶液（phosphate
buffered
solution）。它是一种水基盐溶液中含有氯化钠，磷酸盐，以及（在某些配方）氯化钾和磷酸钾。缓冲液有助于保持恒定的pH值。解决方案的渗透压和离子浓度通常与人体pH相近（等渗）。

取50ml的01mol/L磷酸二氢钾，加291ml的01mol/L氢氧化钾溶液，加水使混合溶液的总体积为100ml，就得到pH为70的磷酸盐缓冲溶液（pbs）。
[注]
（1）01mol/L的磷酸二氢钾溶液的配制方法：准确称取分析纯磷酸二氢钾13609g，加水100ml，搅拌使其完全溶解，定容到1000ml。
（2）01mol/L的氢氧化钾溶液的配制方法：准确称取分析纯氢氧化钾5611g，加水100ml，搅拌使其完全溶解，定容到1000ml。

含005%吐温-20的pH72-74的磷酸盐缓冲液(简称为PBS－T)配制方法为：
称取磷酸二氢钾(KH2PO4)，磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)，氯化钠(NaCl)，氯化钾(KCl)，吐温－20 ，加水。
PBS 1L配方:
氯化钠(NaCl)，8g
氯化钾(KCl)， 02g
磷酸氢二钠(Na2HPO4)，144g
磷酸二氢钾(KH2PO4)， 024g
调pH 72, 定容1L
然后高压蒸汽灭菌，室温保存。
PBS缓冲液一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用，具体试剂一般也有不同的比例配方，在针对性上就有了更好的效果。

测酶活性的实验：
用萃取化学公司法（Amano法的改进型）测定葡萄糖氧化酶
（1）试剂
①
磷酸盐缓冲液（pH70）：取6805g磷酸二氢钾(KH2PO4;
Merck,
Art4873)溶于350mL蒸馏水中。用1M氢氧化钠溶液(NaOH
(4g溶于100ml水))将pH值调至70，用蒸馏水定容至500mL。
②
邻-联二茴香胺(o-Dianisidine)溶液：取17mg邻-联二茴香胺（C14H16N2O2;
Serva,
Nr,19175）溶于25ml磷酸盐缓冲液。
③
过氧化物酶（辣根过氧化酶，181U/mg）溶液（约0℃）：取17mg过氧化物酶（Serva,
Nr,31943）溶于5ml蒸馏水。每毫升此溶液中应含有60个红紫倍精单位。
④
底物溶液（约055M）：取50gβ－D－葡萄糖（C6H12O6;
Sigma,
NoG-5250）溶于蒸馏水中，定容至50mL。
使用前，至少得将此酶静置3h。
⑤
酶（待测的葡萄糖氧化酶）溶液：用磷酸盐缓冲液溶解该酶。1mL配制的酶溶液中应含有大约01U。
00037g溶于500μl
PBS,
再取10μl前者溶液定容至100PBS（约01U/ml）。
测酶活性（118U/mg）的实验2
（1） *** 作步骤：将050mLβ－D－葡萄糖溶液、010mL在冰水中冷却过的过氧化物酶（辣根过氧化酶）溶液和24mL邻-联二茴香胺溶液滴入一只小烧杯内混合，调温至25℃，然后将其全部加到1cm的比色皿内，最后加01ml酶于待测的葡萄糖氧化酶溶液，同时按动秒表。在连续15min内每隔1min于436nm处测一次吸光度
(2)计算：用以下公式计算活性：
式中：E436――每分钟吸光度的变化（436nm处）(15次的平均值)
Ew――01ml所用酶液中含酶的重量（0000074mg）
83――1μmol邻-联二茴香胺/mL的吸光度（436nm处）
31――反应混合物的总体积
U1=5325U/
mg;
U2=9321U/
mg;
U3=1330U/
mg
测酶活性（118U/mg）的实验5(061218)
（1） *** 作步骤：将333μlβ－D－葡萄糖溶液、67μl在冰水中冷却过的过氧化物酶（辣根过氧化酶）溶液和16mL邻-联二茴香胺溶液滴入一只1cm的比色皿内，调温至25℃，最后加67μl酶于待测的葡萄糖氧化酶溶液，搅拌均匀(搅拌同时计时，共用8s，)，然后重新按动秒表。在连续15min内每隔1min于436nm处测一次吸光度
(2)计算：用以下公式计算活性：
式中：E436――每分钟吸光度的变化（436nm处）(15次的平均值)
Ew――67μl所用酶液中含酶的重量（000004958mg）
83――1μmol邻-联二茴香胺/mL的吸光度（436nm处）
2067――反应混合物的总体积
GOD:
15min的平均值：
U1=18123U/mg;
U2=16736U/
mg;
U3=15611U/
mg
4min的平均值：
U1=15656U/
mg;
U2=12989U/
mg,
U3=13497U/
mg

参考资料：

>PBS为磷酸盐缓冲液,有效PH在74左右PH为3的PBS没有意义,配不出来或者勉强用盐酸调到此PH也没有缓冲力,而PH为80的可以配简单点的说就是1L里加入8克氯化钠,再称量001M的磷酸二氢钠加入,用600ml左右的水溶解,再用氢氧化钠调PH到80如果有经验,也可以用一定比例的磷酸二氢钠和磷酸氢二钠加入,控制到PH为80

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