1
分离胶(12%)
配制
所需试剂
所需体积
分离胶(12%)
30%丙烯酰胺
60
ml
15
mol/l
Tris-HCl
38
ml
10%SDS
150
μl
10%过硫酸铵
150
μl
TEMED
6
μl
蒸馏水
49
ml
2
浓缩胶(5%)
配制
所需试剂
所需体积
浓缩胶(5%)
30%丙烯酰胺
13
ml
15
mol/l
Tris-HCl
10
ml
10%SDS
80
μl
10%过硫酸铵
80
μl
TEMED
8
μl
蒸馏水
55
ml
3
分离胶缓冲液(pH89)
配制
所需试剂
所需体积
分离胶缓冲液
Tris
366
g
1
mol/l
HCl
48
ml
蒸馏水
补足至100
ml
4
浓缩胶缓冲液(pH67)
配制
所需试剂
所需体积
浓缩胶缓冲液(pH67)
Tris
598
g
1
mol/l
HCl
48
ml
蒸馏水
补足至100
ml
5
30%丙烯酰胺(pH≤70)
配制
所需试剂
所需体积
30%丙烯酰胺(pH≤70)
丙烯酰胺
29
g
甲叉-双丙烯酰胺
1
g
蒸馏水
补足至100
ml
6
10%过硫酸铵(W/V):1g过硫酸铵溶于10ml水中,4℃保存数周,尽量现用现配。
7
10%SDS:将10
g
SDS溶于80ml重蒸水中并轻缓搅拌(室温低时需水浴加热溶解),再定容至100ml,室温存放。
8
样品缓冲液
配制
所需试剂
所需体积
样品缓冲液
1
M
Tris-HCl(pH67)
5
ml
SDS
25
g
巯基乙醇
1
ml
溴酚兰
005
g
蔗糖
10
g
蒸馏水
补足至100ml
9
考马斯亮蓝染色液:025g考马斯亮蓝R-250用少量甲醇溶解后,用甲醇(40ml)-乙酸(10ml)水溶液稀释至100ml。
10
Tris-甘氨酸电泳缓冲液(pH83)
配制
所需试剂
所需体积
Tris-甘氨酸
电泳缓冲液(pH83)
Tris碱
151
g
甘氨酸
94
g
10%(W/V)SDS
50
ml
去离子水
补足至100
ml
凝胶配制所需试剂的母液不能放置太久,有条件的实验室可将母液保存在4度冰箱中,放置母液被微生物污染或者出现沉淀。10×DNA loading buffer(仅供参考)
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
02%溴酚蓝 20mg
02%二甲苯青FF 20mg
200 mmol/L EDTA 4ml 05mol/L EDTA(pH80)
01%SDS 100ul 10% SDS
50%甘油 5ml
补足 水 20mg 到10ml
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