具体来说就是：
1T、B细胞相互作用的过程
T细胞为Th2亚群，而B细胞既是Th细胞辅助的对象，又是T细胞活化的APC。图10-7表明，这一相互合作包括一系列过程：①抗原以其B表位(绿色)与BCR结合传递B细胞活化的第一信号，使其C1340与细胞因子受体的表达增加，并使B细胞加工提呈抗原和表达少量D7分子；②B细胞作为APC将带有T表位(红色)的抗原肽提呈给CD4T细胞，供T细胞识别；③初步活化的T细胞表达CD40L等，与B细胞表面CD40结合成为B细胞活化的第二信号；④活化B细胞表达B7分子与CD28结合为T细胞提供第二信号；⑤进一步活化的T细胞更多表达CD401。和分泌细胞因子，其中较重要的如IL-4。与B细胞表面的IL-4R结合．促使B细胞进一步活化并开始增殖分化。参与B激活的其他分子还包括CD30与CD30L(CDl53)、41BB与41BBL、B7-RP与ICOS等，细胞因子IL-5和II．-6则在B细胞激活的后期发挥作用。
2T、B细胞相互作用的特异性
需要指出的是，B细胞活化所需的两个信号中第一信号具有抗原特异性，第二信号却是非特异性的，任何一种活化的Th2细胞理论上都可能为B细胞提供第二信号。换言之，起辅助作用的T细胞，它的激活并不一定以B细胞作APC为先决条件．也并不一定是识别同一抗原上的表位。事实上也存在非特异性T细胞对B细胞的旁邻辅助，但提供旁邻辅助的T细胞必须是紧靠B细胞。在电镜下可以看到，T、B细胞发生相互作用时靠得很近，这除了有利于细胞间多种表面分子(TCR-MHC分子、CD28-B7、CD40-CD40I。和其他黏附分子)的结合，还有一个重要的作用是促使细胞因子的高效分泌，因为Th2一旦靠拢B细胞并获得激活信号之后，胞质中的细胞骨架蛋白和专司分泌功能的细胞器(如高尔基体)通过微管组织中心。
3CD40-CD40L的配接具有重要意义
一系列实验提示CD40L-CD40在B细胞应答中十分重要：①单用T细胞分泌的细胞因子，不能完成T细胞的辅助功能；②活化的Th细胞，用化学试剂固定的方法终止其产生细胞因子，仍然可以诱导B细胞增殖。甚至单用提取的活化Th的细胞膜，也能活化B细胞；③抗CD40L的抗体可以封闭T细胞依赖的B细胞激活；④通过转基因表达CD40L的成纤维细胞。也能刺激B细胞；⑤CD40或CD40L基因敲除的小鼠，抗体产生形成的缺陷类似人类的X性联高IgM血症，患者只产生了IgM，而无其他类别的抗体，也无生发中心，抗感染能力明显下降。 CD40与其配体CD401。的结合，导致CD40分子的寡聚化，使胞质中的TNF受体相关因子(TNF
receptor-associ-atedfactor，TRAF)与CD40的胞内结构域结合。TRAF参与启动的酶催化级联反应，最终导致转录因子NFκB和AP-1等活化。
希望对你有帮助，望采纳这俩都是一个质量等级cd级的，属于很低端的等级
30 40是粘度等级 都是高温级别 不适合低温下使用
原则上不建议混 ，30油如果满足你设备的需求，可以混，但油耗会增加
如果30满足不了你设备，你混后可能会出现设备磨损加剧这个情况很普遍 微软IE8 最近发布的补丁稳定性极差 安了就会出现你这种情况 唯一解决办法卸掉IE8
如果不是IE的问题 请直接看最后俩条解决方案或者下载windows更新 如果想了解一下 那就从头看吧
该内存不能read 或written数值 叙述
0 0x0000 作业完成。
1 0x0001 不正确的函数。
2 0x0002 系统找不到指定的档案。
3 0x0003 系统找不到指定的路径。
4 0x0004 系统无法开启档案。
5 0x0005 拒绝存取。
6 0x0006 无效的代码。
7 0x0007 储存体控制区块已毁。
8 0x0008 储存体空间不足，无法处理这个指令。
9 0x0009 储存体控制区块位址无效。
10 0x000a 环境不正确。
11 0x000b 尝试载入一个格式错误的程式。
12 0x000c 存取码错误。
13 0x000d 资料错误。
14 0x000e 储存体空间不够，无法完成这项作业。
15 0x000f 系统找不到指定的磁碟机。
16 0x0010 无法移除目录。
17 0x0011 系统无法将档案移到 其他的磁碟机。
18 0x0012 没有任何档案。
19 0x0013 储存媒体为防写状态。
20 0x0014 系统找不到指定的装置。
21 0x0015 装置尚未就绪。
22 0x0016 装置无法识别指令。
23 0x0017 资料错误 (cyclic redundancy check)
24 0x0018 程式发出一个长 度错误的指令。
25 0x0019 磁碟机在磁碟找不到 持定的磁区或磁轨。
26 0x001a 指定的磁碟或磁片无法存取。
27 0x001b 磁碟机找不到要求的磁区。
28 0x001c 印表机没有纸。
29 0x001d 系统无法将资料写入指定的磁碟机。
30 0x001e 系统无法读取指定的装置。
31 0x001f 连接到系统的某个装置没有作用。
32 0x0020 the process cannot access the file because it is being used by another process
33 0x0021 档案的一部份被锁定， 现在无法存取。
34 0x0022 磁碟机的磁片不正确。 请将 %2 (volume serial number: %3) 插入磁碟机 %1。
36 0x0024 开启的分享档案数量太多。
38 0x0026 到达档案结尾。
39 0x0027 磁碟已满。
50 0x0032 不支援这种网路要求。
51 0x0033 远端电脑无法使用。
52 0x0034 网路名称重复。
53 0x0035 网路路径找不到。
54 0x0036 网路忙碌中。
55 0x0037 the specified network resource or device is no longer available
56 0x0038 the network bios command limit has been reached
57 0x0039 网路配接卡发生问题。
58 0x003a 指定的伺服器无法执行要求的作业。
59 0x003b 网路发生意外错误。
60 0x003c 远端配接卡不相容。
61 0x003d 印表机伫列已满。
62 0x003e 伺服器的空间无法储存等候列印的档案。
63 0x003f 等候列印的档案已经删除。
64 0x0040 指定的网路名称无法使用。
65 0x0041 拒绝存取网路。
66 0x0042 网路资源类型错误。
67 0x0043 网路名称找不到。
68 0x0044 超过区域电脑网路配接卡的名称限制。
69 0x0045 超过网路 bios 作业阶段的限制。
70 0x0046 远端伺服器已经暂停或者正在起始中。
71 0x0047 由于连线数目已达上限，此时无法再连线到这台远端电脑。
72 0x0048 指定的印表机或磁碟装置已经暂停作用。
80 0x0050 档案已经存在。
82 0x0052 无法建立目录或档案。
83 0x0053 int 24 失败
84 0x0054 处理这项要求的储存体无法使用。
85 0x0055 近端装置名称已经在使用中。
86 0x0056 指定的网路密码错误。
87 0x0057 参数错误。
88 0x0058 网路发生资料写入错误。
89 0x0059 此时系统无法执行其他行程。
100 0x0064 无法建立其他的系统 semaphore。
101 0x0065 属于其他行程专用的 semaphore 。
102 0x0066 semaphore 已经设定，而且无法关闭。
103 0x0067 无法指定 semaphore 。
104 0x0068 在岔断时间无法要求专用的 semaphore 。
105 0x0069 此 semaphore 先前的拥有权已经结束。
106 0x006a 请将磁片插入 %1。
107 0x006b 因为代用的磁片尚未插入，所以程式已经停止。
108 0x006c 磁碟正在使用中或被锁定。
109 0x006d pipe 已经中止。
110 0x006e 系统无法开启指定的 装置或档案。
111 0x006f 档名太长。
112 0x0070 磁碟空间不足。
113 0x0071 没有可用的内部档案识别字。
114 0x0072 目标内部档案识别字不正确。
117 0x0075 由应用程式所执行的 ioctl 呼叫 不正确。
118 0x0076 写入验证参数值不正确。
119 0x0077 系统不支援所要求的指令。
120 0x0078 此项功能仅在 win32 模式有效。
121 0x0079 semaphore 超过逾时期间。
122 0x007a 传到系统呼叫的资料区域 太小。
123 0x007b 档名、目录名称或储存体标签语法错误。
124 0x007c 系统呼叫层次不正确。
125 0x007d 磁碟没有设定标签。
126 0x007e 找不到指定的模组。
127 0x007f 找不到指定的程序。
128 0x0080 没有子行程可供等待。
129 0x0081 %1 这个应用程式无法在 win32 模式下执行。
130 0x0082 attempt to use a file handle to an open disk partition for an
operation other than raw disk i/o
131 0x0083 尝试将档案指标移至档案开头之前。
132 0x0084 无法在指定的装置或档案，设定档案指标。
133 0x0085 join 或 subst 指令 无法用于 内含事先结合过的磁碟机。
134 0x0086 尝试在已经结合的磁碟机，使用 join 或 subst 指令。
135 0x0087 尝试在已经替换的磁碟机，使 用 join 或 subst 指令。
136 0x0088 系统尝试删除 未连结过的磁碟机的连结关系。
137 0x0089 系统尝试删除 未替换过的磁碟机的替换关系。
138 0x008a 系统尝试将磁碟机结合到已经结合过之磁碟机的目录。
139 0x008b 系统尝试将磁碟机替换成已经替换过之磁碟机的目录。
140 0x008c 系统尝试将磁碟机替换成已经替换过之磁碟机的目录。
141 0x008d 系统尝试将磁碟机 subst 成已结合的磁碟机 目录。
142 0x008e 系统此刻无法执行 join 或 subst。
143 0x008f 系统无法将磁碟机结合或替换同一磁碟机下目录。
144 0x0090 这个目录不是根目录的子目录。
145 0x0091 目录仍有资料。
146 0x0092 指定的路径已经被替换过。
147 0x0093 资源不足，无法处理这项 指令。
148 0x0094 指定的路径这时候无法使用。
149 0x0095 尝试要结合或替换的磁碟机目录，是已经替换过的的目标。
150 0x0096 configsys 档未指定系统追踪资讯，或是追踪功能被取消。
151 0x0097 指定的 semaphore事件 dosmuxsemwait 数目不正确。
152 0x0098 dosmuxsemwait 没有执行；设定太多的 semaphore。
153 0x0099 dosmuxsemwait 清单不正确。
154 0x009a 您所输入的储存媒体标 元长度限制。
155 0x009b 无法建立其他的执行绪。
156 0x009c 接收行程拒绝接受信号。
157 0x009d 区段已经被舍弃，无法被锁定。
158 0x009e 区段已经解除锁定。
159 0x009f 执行绪识别码的位址不正确。
160 0x00a0 传到 dosexecpgm 的引数字串不正确。
161 0x00a1 指定的路径不正确。
162 0x00a2 信号等候处理。
164 0x00a4 系统无法建立执行绪。
167 0x00a7 无法锁定档案的部份范围。
170 0x00aa 所要求的资源正在使用中。
173 0x00ad 取消范围的锁定要求不明显。
174 0x00ae 档案系统不支援自动变更锁定类型。
180 0x00b4 系统发现不正确的区段号码。
182 0x00b6 作业系统无法执行 %1。
183 0x00b7 档案已存在，无法建立同一档案。
186 0x00ba 传送的旗号错误。
187 0x00bb 指定的系统旗号找不到。
188 0x00bc 作业系统无法执行 %1。
189 0x00bd 作业系统无法执行 %1。
190 0x00be 作业系统无法执行 %1。
191 0x00bf 无法在 win32 模式下执行 %1。
192 0x00c0 作业系统无法执行 %1。
193 0x00c1 %1 不是正确的 win32 应用程式。
194 0x00c2 作业系统无法执行 %1。
195 0x00c3 作业系统无法执行 %1。
196 0x00c4 作业系统无法执行 这个应用程式。
197 0x00c5 作业系统目前无法执行 这个应用程式。
198 0x00c6 作业系统无法执行 %1。
199 0x00c7 作业系统无法执行 这个应用程式。
200 0x00c8 程式码的区段不可以大于或等于 64kb。
201 0x00c9 作业系统无法执行 %1。
202 0x00ca 作业系统无法执行 %1。
203 0x00cb 系统找不到输入的环境选项。 \r
205 0x00cd 在指令子目录下，没有任何行程有信号副处理程式。
206 0x00ce 档案名称或副档名太长。
207 0x00cf ring 2 堆叠使用中。
使用Windows *** 作系统的人有时会遇到这样的错误信息：“0X指令引用的 0x00000000内存，该内存不能written”，然后应用程序被关闭。如果去请教一些“高手”，得到的回答往往是“Windows就是这样不稳定”之类的义愤和不屑。其实，这个错误并不一定是Windows不稳定造成的。本文就来简单分析这种错误的常见原因。
内存不能为read的问题是一个非常复杂的问题，造成的原因是多方面的，有硬件的原因，也有软件的原因，一时半会儿很难搞的清楚。就是对那些整天玩电脑的老手来说也是一个非常辣手的问题。就我个人的理解，大多与使用非原版的系统而产生的不稳定性有关，轻易很难修复。所以我一般的主张是，只要不是频繁出现，可以不必管它，点一下“确定”或者“取消”就可以了。如果真有兴趣想研究一下的话，你可以试着从一下方面寻找原因：
1 内存条坏了或与主板不兼容 更换内存条
2 双内存不兼容 使用同品牌的内存或只要一条内存
3 内存质量问题 更换内存条
4 散热问题 加强机箱内部的散热
5 内存和主板没插好或其他硬件不兼容 重插内存或换个插槽
6 硬盘有问题 更换硬盘
7 驱动问题 重装驱动,如果是新系统,应先安装主板驱动
8 软件损坏 重装软件
9 软件有BUG 打补丁或更新到最新版本
10 软件和系统不兼容 给软件打上补丁或是试试系统的兼容模式
11 软件和软件之间有冲突 如果最近安装了什么新软件,卸载了试试
12 软件要使用其他相关的软件有问题 重装相关软件,比如播放某一格式的文件时出错,可能是这个文件的解码器有问题
13 病毒问题 杀毒
14 杀毒软件与系统或软件相冲突 由于杀毒软件是进入底层监控系统的,可能与一些软件相冲突,卸载试试
15 系统本身有问题 有时候 *** 作系统本身也会有BUG,要注意安装官方发行的更新程序,象SP的补丁,最好打上
——最后我再强调一下，不是所有的电脑问题我们普通人都能搞得清摸得透的，以上的方法即使都已试过，谁也不能保证一定能够解决你的问题，因为电脑的问题的确很复杂，“不能为read”这仅仅是一个症状，单凭这一个小小的症状是很难一下子找到问题所在的。我们都希望当说明了问题之后能够马上得到满意的回答，有时候是不可能的，必须慢慢的摸索才能知道问题所在。如果想省心的话，也许只有最后这两点建议最有用：一是不管它（反正也没有大碍），二是重装一个稳定的系统。说到系统，这也是我要说的重点，实际上我们的电脑之所以出现“内存不能为read的问题”，大多都与安装了Ghost系统有关，“内存不能为read”现象可以说是Ghost系统的一个不可修复的通病。所以我建议你用原版系统盘重装系统。关于什么是Ghost系统，我在这里也解释一下（好多现在正在使用Ghost系统的人都不知道自己的系统是Ghost系统），所谓Ghost系统，就是指像那些番茄花园、电脑公司版、雨林木风、萝卜家园等改版本的XP系统，即非原版的系统。你可以通过点“我的电脑”右键-属性来查看你的系统属性。
下面有两种处理方法可以试试：如果不行只有恢复或重装系统了
（1）试用命令排除
开始－运行－ 输入cmd-- 回车，在命令提示符下输入下面命令
for %1 in (%windir%\system32\dll) do regsvr32exe /s %1
怕输入错误，可以复制这条指令，然后在命令提示符后击鼠标右键，打“粘贴”，回车，耐心等待，直到屏幕滚动停止为止。
（2）运行regedit进入注册表, 在HKEY_LOCAL_MACHINE\SOFTWARE\Microsoft\Windows\CurrentVersion\Explorer\ShellExecuteHooks 下，应该只有一个正常的键值{AEB6717E-7E19-11d0-97EE-00C04FD91972}, 将其他的删除。4月16日，百奥智汇创始人、科学顾问张泽民教授在北京大学的课题组与合作者在国际顶级学术期刊《Cell》上发表了题为＂Single-Cell Analyses Inform Mechanisms of Myeloid-Targeted Therapies in Colon Cancer＂的文章，利用单细胞转录组测序技术对结直肠癌患者的肿瘤微环境，特别是浸润髓系细胞类群首次进行了系统性的刻画，同时利用小鼠模型，对anti-CSF1R抑制剂和anti-CD40激动剂两种靶向髓系细胞的免疫治疗策略潜在的作用机理给出了解释。
该研究建立了结合肿瘤患者及小鼠模型的单细胞转录组来研究肿瘤免疫治疗的范例，为人们研究其他疾病中免疫细胞以及开发新的治疗方案提供了思路。
对于该研究，上海市免疫学研究所苏冰所长、上海交通大学医学院叶幼琼研究员等相关专家点评道：该工作全面地解析结肠癌的肿瘤微环境细胞图谱，阐明细胞与细胞之间的相互作用，对靶向肿瘤免疫微环境为基础的肿瘤治疗提供了更详细的理论基础，为今后靶定髓系细胞的精准治疗提供助力，具有重要的临床转化意义。
在该研究中，研究者共使用了Smart-seq2、10x 3′ Gene Expression、10x V(D)J + 5′ Gene Expression等 3种单细胞测序技术 ，以及tSNE、UMAP、PCA、RNA velocity、URD、PAGA、STARTRAC、GSVA富集分析、热图、小提琴图、气泡热图、轨迹图、Circos图、火山图、生存分析等 十多种生物信息学分析及展示方法。
值得一提的是， 这些实验技术和分析方法，百奥智汇皆可实现。
下面，百奥我就为大家详细解析，带大家了解这些技术和方法是如何在研究中应用的。
110x Genomics和Smart-seq2技术比较
该研究首先评估并比较了10x Genomics和Smart-seq2两种单细胞测序技术的结果。结果显示，与10x scRNA-seq平台相比，Smart-seq2捕获了更多的基因，包括细胞因子，CD分子，配体/受体和转录因子，并且显示出较弱的批次效应 ，从而可以对调节途径进行更深入的分析（图2），而10x平台则获得了更多的分群。因此，作者将两种技术同时使用，从而能够最大化地确定细胞类型或稀有种群的数量，改善细胞聚类的结果，得出更准确的结论。
2tSNE降维——展示分群、基因表达模式、组织分布等多层信息
该研究使用无监督聚类、PCA、CGA等方法对来自18位CRC患者肿瘤、邻近组织和血液样本的10× 3′ Gene Expression （ 43,817个细胞）和Smart-seq2（10,468）单细胞测序结果进行整合聚类分析，然后用tSNE进行降维展示，分别得到38个和36个群，包括6个内皮细胞群，2个成纤维细胞群，13个髓系细胞群，4个ILC群，18个T细胞群和5个B细胞群等（图3）。
对于淋巴细胞，研究通过特异的的免疫球蛋白重链特征基因加以区分（图4）。
同时，研究还在tSNE结果中展示了各细胞的组织分布情况（图5）。
对于Smart-seq2非免疫细胞的测序结果，该研究利用tSNE将其分为12个亚群，包括4个恶性细胞亚群和8个非恶性细胞亚群（图6）。其中，由推断的拷贝数变异（CNV）定义的恶性细胞表现出高度的基因表达异质性，形成了患者特异性的分群（图7）。
3热图、气泡热图——展示细胞间基因表达模式的差异
单个tSNE图或组图可展示单个或数个基因在不同细胞群中的表达情况，但在展示多个样本大量基因的全局表达情况时就相对吃力。此时就需要用到热图。而气泡热图则是在热图的基础上加入了基因表达细胞在特定细胞群中占比的信息，从而对细胞群进行更详细的表征。
在该研究中，作者用热图展示了10x测序分析得到的38个白细胞群中的差异基因表达差异（图8），以及整合10x和Smart-seq2测序分析得到的48个群的基因表达差异（图9）。
研究还分析了13个髓系细胞中的特征基因表达情况（其中9个以气泡热图展示），并据此将它们区分为肥大细胞（hM01），树突状细胞(hM02-04)，单核细胞(hM05-07，hM11)，组织驻留性巨噬细胞（hM08-10）和 肿瘤相关巨噬细胞（TAMs，hM12-13）。
4扩散图、RNA velocity、URD、PAGA——推断和展示细胞发育轨迹
为进一步探索 TAMs 的来源，该研究利用扩散图中嵌入的RNA velocity对随机选择的单核细胞和巨噬细胞的发育轨迹进行推断和展示，鉴定出了从表达CD14的单核细胞向FCN1+ 单核样细胞和不同的巨噬细胞群体的强烈定向流动（图11），体现二者在发育上的前后顺序。
进一步利用URD和PAGA这两种正交算法分析巨噬细胞的转录轨迹，发现巨噬细胞发育成TAMs（图12，图13）。
综合上述轨迹推断结果，研究发现TAM主要来自独特的肿瘤浸润性单核样细胞前体。其中， C1QC+ 和 SPP1+ TAM都从浸润肿瘤的单核细胞样前体形成，而 SPP1+ TAM也可能源自 NLRP3+ RTM（图14）。
5火山图、富集分析、热图、URD图——多角度展示两类TAMs差异
对于两类在发育轨迹上存在显著差异的TAMs，作者进一步使用热图、火山图、富集分析等方法进行了分析，从多角度揭示了它们的差异。
由于细胞的发育轨迹受转录调控网络控制，作者先分析了两类TAMs转录因子的表达差异，结果以热图显示。其中，C1QC+ TAMs显示出MAF/MAFB和FOS/JUNS高表达，而PP1+ TAMs则高表达CEBPB和ZEB2。
然后，作者又用火山图展示两类TAMs中显著差异表达的基因。该图包含两个维度，其中纵轴P value体现显著性，横轴fold change展示差异性。
结果显示，C1QC+ TAMs显示出补体C1Q、TREM2、MERTK和CD80等基因的高表达， 而SPP1+ TAMs显示出SPP1、MARCO和VEGFA的特异性表达。
随后，作者又使用基因集合变异分析（GSVE）分析了两类TAMs在通路上的差异。GSVE是一种以非监督方式对一个群体评估通路活性差异的基因集富集（GSE）分析方法。
该研究的结果显示，SPP1+ TAMs显示出肿瘤血管生成，ECM受体相互作用、肿瘤脉管系统、大肠腺瘤和转移性肝癌等通路的特异性富集，而C1QC+ TAMs则显示出补体激活以及抗原加工和呈递途径的富集（图17）。
此外，SPP1 + TAMs还显示了大肠腺瘤和转移性肝癌通路的特异性富集和相关基因的表达（图17和图18），表明在它们CRC中有促癌/促转移作用。
6相互作用网络图和Circos图——展示细胞间相互作用、受体配体相互作用
更进一步地，作者在CRC中建立了细胞间相互作用网络图。将该研究中的单细胞测序数据集与GTEx、TCGA的组织整体RNA测序数据集进行整合分析，发现TAM和cDC作为预测网络的核心，与其他细胞类型的联系最多（图19，图20）。其中，C1QC+ TAM和两组cDC主要与其他免疫细胞（尤其是T细胞亚群）相互作用（图20），提示其在抗肿瘤T细胞应答中起调节作用。
再进一步的细胞群间的受体——配体相互作用分析显示，在与髓系细胞和T细胞有关的配体-受体对中，CXCL10-CXCR3在C1QC + TAM中富集，暗示了C1QC+ TAM具有募集或激活T细胞的潜在作用。而SPP1+ TAMs中富集的SPP1-ITGAV、SDC2-MMP2、FN1-ITGA5等配体-受体对，则暗示了其在可能与某些整合蛋白相互作用，以促进CRC的肿瘤发生。
7相似性分析、热图——展示跨物种的细胞群相似性
为了将上述对人髓系细胞异质性的研究发现与临床应用相结合，作者接下来将相同的实验和分析方法用于两种对肿瘤免疫治疗的小鼠模型中，其中Renca对CSF1R阻断抗体敏感，而MC38对CD40激动剂抗体敏感（图21）。
作者使用10x Genomics平台对免疫治疗后小鼠的肿瘤中分离出的免疫细胞进行了单细胞转录组测序，并与人髓系细胞群进行了相似性分析，确定了多个跨物种相对应的髓系种群，包括两种cDC群和两种TAM群（图22）。
此外，对小鼠TAM群进行与人类TAM群相同的途径分析发现，小鼠TAM群体也基于它们的血管生成，低氧和T细胞相互作用基因特征而分离（图23）。这些数据表明人类CRC患者和小鼠肿瘤模型之间存在功能相似的TAM群体。
8细胞丰度、生存分析——体现不同细胞类群的抗药性
进一步的耐药性研究显示，抗CSF1R治疗后F4/80高表达的巨噬细胞优先减少（图24），说明不同的巨噬细胞群体对抗CSF1R治疗的敏感性不同。同时，治疗后小鼠细胞群中mC12和mM14簇几乎完全丢失，TAM簇mM11，mM13和mM15的减少最小（图24），说明TAMs对CSF1R阻断的治疗具有抗性。同时，抗CSF1R的TAM亚群优先表达参与血管生成和免疫抑制的基因，如Vegfa，Cd274和Arg1。
为了将在小鼠中的发现与人类CRC相关联，作者使用生存分析比较了具有不同水平C1QC+ TAM和SPP1+ TAM基因特征患者的生存率，发现低C1QC+ TAM、高SPP1 +TAM组合与CRC患者的预后更差相关（图26）。
这些发现表明，抗CSF1R治疗可能不足以耗尽所有具有促进肿瘤生长潜力的巨噬细胞，这一特性可能是其单药疗效差的原因。
类似的分析应用于抗CD40治疗则发现，抗CD40治疗能够激活cDC1细胞，CCL22等激活的基因特征与CRC患者的总体生存期呈正相关（图27），这可能部分解释了抗CD40激动剂治疗CRC的机制。
9STARTRAC——分析T细胞的迁移、克隆扩增和发育转变
众所周知，T细胞在肿瘤免疫治疗中发挥重要作用。为进一步探索抗CD40激动剂治疗CRC的机制，作者基于TCRα和β链序列，应用STARTRAC算法分析抗CD40治疗后T细胞的迁移、克隆扩增和发育转变，以了解抗CD40激动剂治疗对肿瘤浸润性T细胞功能的影响。
结果显示，抗CD40激动剂治疗后，Ccl5+ Tem CD8+ T细胞具有比其他CD8+ T细胞亚群更高的迁移指数（图28）。进一步剖析Ccl5+ Tem亚群内的TCR克隆型表明，克隆扩增较高的细胞在肿瘤和肿瘤引流淋巴结之间表现出更多的TCR共享，表明这些细胞在抗CD40处理后具有更强的迁移能力（图29）。
同时，Ccl5+ Tem和Cxcr6+ Trm CD8+ T细胞之间的过渡指数在基线时显着高于CD8+ T细胞亚群中其他对的过渡指数，表明某些Cxcr6+ 肿瘤中的Trm细胞可能在某一过程中由浸润的Ccl5+ Tem细胞发育转变而来，这一过程在抗CD40治疗后得到了进一步增强（图30）。
这些数据表明，抗CD40治疗对肿瘤浸润性T细胞的扩增，迁移和发育转变具有独特影响，能够加强Ccl5+ Tem的迁移和克隆扩增能力，及其向Cxcr6+ Trm CD8+ T细胞转变的能力。
10相关性分析——揭示细胞间存在相互作用
在研究中作者发现，Th1类细胞与成熟和未成熟的cDC1细胞均显示正相关，表明这两类细胞之间存在相互作用。在此基础上，结合该研究中发现的Bhlhe40 + Th1类细胞在抗CD40治疗后的占比以及特异性扩增、Bhlhe40 + CD4 + T细胞能够产生更多IFNγ，以及之前研究发现的表达IFNG的BHLHE40 + Th1样细胞富集于MSI CRC患者人群中且显示出对ICB治疗的良好反应等结果，作者认为抗CD40治疗导致增加的Bhlhe40 + Th1样细胞可能为在该模型中CD40激动剂治疗能够成功与抗PD1协同的机制提供了解释。
总的来说，该研究的思路是：
先通过单细胞转录组、免疫组测序等技术，对CRC患者的肿瘤微环境进行细胞分群、基因差异表达、细胞发育轨迹、细胞间相互作用等多水平、多维度的详细表征，发现了肿瘤浸润髓系细胞类群中两类特殊的细胞类群TAM和cDC可能在CRC的抗肿瘤T细胞应答、肿瘤发生等过程起调节作用。然后利用小鼠模型，将上述发现应用于对anti-CSF1R抑制剂和anti-CD40激动剂两种靶向髓系细胞的免疫治疗策略的潜在作用机理的解释中。
参考文献：
Lei Z et al, Single-Cell Analyses Inform Mechanisms of Myeloid-Targeted Therapies in Colon Cancer Cell 2020
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