2021-07-21 神奇的单链DNA合成技术(2)——生物素标记纯化

生物素-链霉亲合素系统同样可以应用于ssDNA的纯化。

在这种基于生物素标记的ssDNA纯化方法中，首先使用会进行PCR，不同之处在于使用的两条引物中，根据需要将其中一条引物的5'端进行生物素标记，另一条未非生物素标记的引物。因此，经过PCR扩增后，获得的dsDNA中一条链为生物素标记的ssDNA，另一条为未标记的ssDNA。后续将dsDNA变性（使用碱变性或者高温）后，使用联链霉亲和素进行生物素标记ssDNA的纯化。

针对外显子序列设计捕获探针，与外显子DNA序列相互补。

探针上标记有生物素。

基因组DNA进行超声打断，与捕获探针杂交。

利用探针上生物素与带有链霉亲和素的磁珠结合，通过富集磁珠间接地获得全外显子测序文库。

先用限制性内切酶在DNA上切出两个粘性末端，然后在DNA连接酶的配合下用与这个粘性末端相配的有标志性的（可以是放射性和荧光性等同位素一般属于放射性）DNA片段标记出来，简单地说就是这样～

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