(北京协和医院周宝桐大夫郑重提醒:因不能面诊患者,无法全面了解病情,以上建议仅供参考,具体诊疗请一定到医院在医生指导下进行!)
同一癌种的不同患者,同一个肿瘤患者的不同治疗阶段、同一肿瘤组织的不同区域,肿瘤的生物学特征均存在一定的差异。 液体活检 既可以克服 组织检测 的 异质性 ,又具有 简便、安全、无创、实时 等特点,尤其是对于无法进行手术或穿刺,又或者肿瘤位置导致取样困难的患者而言,液体活检是一项可以弥补组织检测局限性的方法,近年来在 肿瘤靶向治疗 、 耐药监测的实时评估 等方面发挥着重要的作用。
目前液体活检的靶标包括: 游离的循环肿瘤细胞 (CTCs)、 循环肿瘤DNA (ctDNA)、 循环RNA (ctRNA)和 外泌体 (携带有细胞来源相关的多种蛋白质,脂类,DNA,RNA等)。
ctDNA 是肿瘤细胞在 坏死 、 凋亡后 释放的一种游离DNA( cfDNA ),在血液中的半衰期短,可以实时反映肿瘤的动态变化。
目前用于ctDNA液体活检的技术主要有 ARMS-PCR 、 数字PCR(ddPCR) 和 第二代测序(NGS) 。
NGS能同时检测多个基因的多种不同变异形式,是应用最广泛的的基因检测技术。但由于NGS的实验流程技术较为复杂,在 文库构建 、 目标区域捕获 及 测序过程中 不可避免的会引入一些扩增和测序的错误,这些错误我们把它们叫做 背景噪音 ,而ctDNA检测 往往突变频率较低 ,受到背景噪音 干扰较大 ,来自ctDNA样本中的低频突变往往淹没在背景噪音之中,造成 假阴性 或 假阳性 结果,这就限制了ctDNA检测的 灵敏度 和 特异性 。
分子条形码技术(UMI)
分子条形码又称 分子标签 (Unique Molecular indentifier,UMI),它的 原理 就是给 每一条原始DNA片段 加上一段 特有的 标签序列,经文库构建及PCR扩增后一起进行测序。这样,根据 不同的标签序列 我们就可以区分 不同来源的DNA模板 ,分辨哪些是PCR扩增及测序过程中的随机错误造成的假阳性突变,哪些是患者真正的携带的突变,从而提高检测灵敏度和特异性。
① 2012年5月,Tim Forshew等人率先开发了基于分子标签的TAm-Seq方法。
② 2012年9月,Michael W Schmitt等利用双链分子标签技术将错误率显著降低。它的技术原理如下:
SIN15o=SIN(60o-45o)=SIN60oCOS45o-SIN45oCOS60o=(√6-√2)/4 COS15o=COS(60o-45o)=COS60oCOS45o+SIN60oSIN45o=(√6+√2)/4 sin15°+cos15°= 2 ( 2 2 sin15°+ 2 2 cos15°)= 2 (sin15°cos45°+cos15°sin45°)= 2 sin(15°+45°)= 2 sin60°= 2 × 3 2 = 6 2 .三角函数的公式关于初中三角函数公式,在考试中用的最多的就是特殊三角度数的特殊值。如: sin30°=1/2 sin45°=√2/2 sin60°=√3/2 cos30°=√3/2 cos45°=√2/2 cos60°=1/2 tan30°=√3/3 tan45°=1 tan60°=√3[1] cot30°=√3 cot45°=1 cot60°=√3/3 其次就是两角和公式,这是在初中数学考试中问答题中容易用到的三角函数公式。两角和公式 sin(A+B)=sinAcosB+cosAsinB sin(A-B)=sinAcosB-sinBcosA cos(A+B)=cosAcosB-sinAsinB cos(A-B)=cosAcosB+sinAsinB tan(A+B)=(tanA+tanB)/(1-tanAtanB) tan(A-B)=(tanA-tanB)/(1+tanAtanB) ctg(A+B)=(ctgActgB-1)/(ctgB+ctgA) ctg(A-B)=(ctgActgB+1)/(ctgB-ctgA)
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