把电脑上的网线插到路由上,然后电脑搜信号,连接,密码在机身上,连接上后打开浏览器,输入机身上的IP地址,像19216801这样子的,进去后再输用户名和密码就能进入路由设置页面了,然后选设置拨号上网的方式一步一步设置就可以了。
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如需要使用电脑或手机通过路由器无线上网,设置方法如下:
一、利用有线设置
1、先将MODEM的LAN口网线对接到路由器的WAN口,然后使用网线将LAN口连接计算机的网卡口处。
2、在电脑IE地址栏里输入IP地址“192XXXXXXXXX”按下回车键,即d出登录窗口。输入用户名和密码之后,就可以进入配置界 面了。用户密码及IP地址一般会在路由器的底部标签上标出。
3、确认后进入 *** 作界面,您会在左边看到一个设置向导,进击进入(一般的都是自动d出来的)。
4、点击下一步,进入上网方式设置,您可以看到有三种上网方式的选择,一般选择PPPoE;选择PPPoE后,会d出登陆框,请在框中输入您的宽带账号与密码。
5、点击下一步进入到无线设置,您可以看到信道、模式、安全选项、SSID等等,一般无需理会。建议选择无线安全选项wpa-psk/wpa2-psk,设置无线密码,建议不要设置太简单的密码,保障您网络不被他人使用。
6、点击下一步,就可以看到设置完成的画面,点击完成。
7、这时路由器会自动重启,请重新打开电脑和手机的无线开关,搜索无线路由名称,输入密码后即可使用。
二、利用无线设置
如无网线连接设置时,将路由通电并回复到出厂模式后,默认会发生WIFI信号(一般为路由器型号)且不加密,直接通过笔记本电脑或手机连接WIFI信号后,在电脑或手机浏览器IE地址栏里输入IP地址“192XXXXXXXXX”按下回车键,即d出登录窗口。其他 *** 作步骤同上。
如果上述方式仍不能解决,可以拨打当地10086进行宽带报障。
材料与方法
11 血清采集 MG患者全血来自2004~2005年就诊于辽宁中医学院附属医院的门诊患者。根据典型临床表现、新斯的明试验、低频重复电刺激及单纤维肌电图等确诊,无其他自身免疫性疾病,未经其他免疫抑制治疗,并参照1994年版《中医病证诊断疗效标准》辨证为脾肾虚型。正常人血清取自同时期健康志愿者。-70 ℃冰箱冷冻保存备用。
12 主要试剂 固相pH梯度干胶条IPG strip(Amersham公司产品, 非线性pH 3~10, 7 cm)。3-〔3-(胆酰胺基丙基)二甲氨基〕丙磺酸盐{3-〔(3-cholamidopropyl) dimethylamino〕-1-propanesul-fonate, CHAPS},二硫苏糖醇(DL-dithiothreitol, DTT),三丁基膦(tributyl phosphine, TBP),尿素,硫脲,碘乙酰胺(iodoacetamide, IAA),丙烯酰胺(acrylamide)、甲双丙烯酰胺(N, N'-methylenebi-sacrylamide),四甲基乙二胺(N, N, N, N-tetram-ethyl-ethylenediamine, TEMED),过硫酰胺(am-monium persulfate, APS),三羟甲基氨基甲烷〔tris (hydroxymethyl) aminomethane〕、甘氨酸(glycine, Gly)和十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate, SDS)均为Bio-Rad公司产品。琼脂糖为华美生物公司产品。其他试剂均使用国产分析纯试剂。所有溶液均用MilliQ水配制。
13 主要仪器 高速冷冻离心机,德国Eppendorf公司产品;EttanTMIPGphorⅡ,Amersham Biosci-ences公司产品;P-2000分光光度仪,Hitachi公司产品;SE-600电泳仪,Amersham公司产品;纯水装置,Millipore公司产品;GS-710光密度扫描仪,Bio-Rad公司产品;冷却水循环系统,Cole-Parmer公司产品;Bruker-Daltonics AutoFlex TOF-TOF LIFTMass Spectrometer,美国Bruker-Daltonics公司产品;LCQ Deca XP Plus,美国Thermo Finnigan公司产品。
14 双向电泳
141 血清总蛋白质的提取及定量 血清-70 ℃反复冻融4次后,用Agilent Multiple Affinity Re-moval Column处理去除高丰度蛋白。使用Agilent 5K超滤管进行浓缩除盐,冻干回收的样品,-70 ℃保存。用裂解液(9 mol/L 尿素、4% CHAPS、 65 mmol/L DTT和cocktail酶抑制剂)进行复溶,并采用考马斯亮蓝法进行蛋白质定量。
142 等电聚焦 自-20 ℃取出的胶条,室温下平衡10 min,以500 μg上样量在每份样本中加入上样缓冲液(8 mol/L尿素、2% CHAPS、1% Bio-lyte和1% TBP)以及标准蛋白质分子,上样于泡胀槽中,加入矿物油覆盖。程序设置如下:30 V 12 h,500 V 1 h,1 000 V 1 h,8 000 V 6 h。恒温20 ℃。等电聚焦电泳后IPG胶条在平衡液1(Tris-base 50 mol/L 、尿素 6 mol/L、甘油 30%、SDS 2%、溴酚蓝0002%和DTT 100 mg)中于振荡器上振荡 15 min; 然后置入平衡液2(成分同平衡液1,用 400 mg 碘乙酰胺代替100 mg DTT)同样于振荡器上振荡15 min。
143 SDS-PAGE垂直电泳 采用125%的均匀SDS2聚丙烯酰胺凝胶(水232 ml,30%丙烯酰胺溶液3246 ml,15 mol/L Tris-HCl缓冲液pH 88 20 ml,10% SDS 08 ml,10% APS 04 ml,TEMED 376 μl,胶总体积80 ml)。将平衡后的IPG胶条移至凝胶的上方,胶条一端放入低分子量蛋白质标准,05%的琼脂糖封胶。上下槽加入电极缓冲液(Tris 5 mmol/L,Gly 192 mmol/L和SDS 01%)。初始电流为每块胶40 mA,电泳20 min,然后以每块胶60 mA电流,直至溴酚蓝前沿。
144 银染色 电泳结束后,采用硝酸银染色法,通过固定,硝酸银染色,显影,停显及脱色,至背景清晰。
15 图像分析 每个样品常规进行3次二维电泳,用GS-710光密度扫描仪对电泳后的胶图分别进行扫描,所得扫描图像输入计算机,采用Image-master软件对图像进行背景消减、蛋白质点检测和校正,获取蛋白质点的位置坐标和表达量等分析。选取 Ratio ≥15的蛋白质点认为有差异。所有数据的统计分析均采用SPSS 120软件,统计学分析采用 t 检验。
16 基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱分析 用手术刀片切下胶上目标条带,进行切胶、胶上胰蛋白酶酶解 20 h ,抽提酶解肽段,Zip Tip脱盐后点样,行基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS)分析(飞行管长27 m,加速电压 20 kV ,反射电压23 kV)。将第1级质谱得到的肽片段质量指纹图谱、肽质量指纹图谱与第2级质谱得到的肽序列信息一起用来检索蛋白质数据库,找出匹配的蛋白质。
17 数据库检索 将质谱鉴定所得的肽质量指纹谱(peptide mass fingerprinting, PMF)数据于Bio-Works(Thermo Finnigan, San Jose, CA)软件搜索相应的库。搜索使用的数据库为IPI human蛋白库(SEQUEST结果过滤参数为:当Charge+1,Xcorr≥19;当Charge+2,Xcorr≥22;当Charge+3,Xcorr≥375;其中DelCN≥01)以及NCBI上 Homo sapiens的非冗余蛋白库(redundant data-base)。检索参数为胰蛋白酶解;氨基酸固定修饰方式为脲甲基半胱氨酸;模式为单同位素峰;肽片断最大误差控制在100 ppm;肽片断最大分子量误差为±05 Da;每个肽允许有1个不完全裂解位点。
2 结果
21 脾肾虚型重症肌无力患者血清双向电泳图谱 的建立及分析 经2-DE技术及银染色后,得到了两组血清的双向凝胶电泳图,并于相同的条件下重复实验3次。在正常对照组细胞蛋白质组双向电泳图谱上可观察到1 463±179个蛋白点,而脾肾虚型重症肌无力组可见到1 508±89个蛋白点
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