基因扩增程序设定是什么

基因扩增技术的具体方法和程序

试剂（1）引物：决定扩增的特异性。根据检测的DNA不同，选用不同引物，每种病原微生物都有自己特异的引物。（2）耐热的DNA聚合酶：此酶是从耐热细菌中分离出来的，能耐受高温90℃-100℃。（3）10×PCR缓冲液：500mmol/l KCl;100mmol/L Tris-HCl(pH84,20℃)150mmol/L MgCl2,1mg/ml明胶。10×PCR缓冲液随酶一起购买。（4）5mmol/L dNTP贮备液：将dATP、dCTP、dGTP和dTTP钠盐各100mg合并，加入灭菌去离子水溶解，用NaOH调pH至中性，分装每份300μl，-20℃保存。dNTP浓度最好用UV吸收法精确测定。现用dNTP溶液均有商品化产品。（5）DNA模板：用处理液将待测标本处理，不同处理方法、 *** 作各异，但目的是暴露标本中被检测的DNA。 *** 作程序过去标准的PCR *** 作程序是将PCR必需反应成份分别加入一微量离心管中，然后置于一定的循环参数条件下进阅读全文

基因扩增技术的具体方法和程序

试剂（1）引物：决定扩增的特异性。根据检测的DNA不同，选用不同引物，每种病原微生物都有自己特异的引物。（2）耐热的DNA聚合酶：此酶是从耐热细菌中分离出来的，能耐受高温90℃-100℃。（3）10×PCR缓冲液：500mmol/l KCl;100mmol/L Tris-HCl(pH84,20℃)

2022-09-06 17:05News WIKI 相关搜索

PCR基因扩增仪的原理和程序

  PCR技术即基因扩增技术。     PCR基因扩增仪扩增DNA的原理是：先将含有所需扩增分析序列的靶DNA双链经热变性处理解开为两个寡聚核苷酸单链，然后加入一对根据已知DNA序列由人工合成的与所扩增的DNA两端邻近序列互补的寡聚核苷酸片段作为引物，即左右引物。此引物范围就在包括所欲扩增的DNA片

2019-03-01 22:25News WIKI 相关搜索

100%有奖调查：聚合物的表征分析技术

什么是基因扩增？基因扩增的应用和技术优势

又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法,是基因扩增技术的一次重大革新。可将极微量的靶DNA特异地扩增上百万倍,

138KB还是138bp？你这个先弄清楚。

扩不出来主要是你引物的问题吧。和扩增程序没多大关系。

你变性30s、退火20s，延伸45s就行。

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你这两个引物Tm差异比较大。不过我想在55~57℃退火，用我上面给你的程序应该是能够成功的。一般的real-time PCR的扩增产物也就150bp左右。如果低于55℃还是P不出来，那估计就是你的引物有问题或者模板降解了。

1、PCR引物设计

PCR反应中有两条引物，即5′端引物和3′引物。设计引物时以一条DNA单链为基准（常以信息链为基准），5′端引物与位于待扩增片段5′端上的一小段DNA序列相同；3′端引物与位于待扩增片段3′端的一小段DNA序列互补。

引物设计的基本原则：引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C 过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列参照。

引物内部不应出现互补序列。两个引物之间不应存在互补序列，尤其是避免3 ′端的互补重叠。引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70%，引物3′末端连续8个碱基在待扩增区以外不能有完全互补序列，否则易导致非特异性扩增。

引物3′端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，最佳选择是G和C。引物的5′端可以修饰。如附加限制酶位点，引入突变位点，用生物素、荧光物质、地高辛标记，加入其它短序列，包括起始密码子、终止密码子等。

2、模板的制备

PCR的模板可以是DNA，也可以是RNA。模板的取材主要依据PCR的扩增对象，可以是病原体标本如病毒、细菌、真菌等。也可以是病理生理标本如细胞、血液、羊水细胞等。法医学标本有血斑、精斑、毛发等。

标本处理的基本要求是除去杂质，并部分纯化标本中的核酸。多数样品需要经过SDS和蛋白酶K处理。难以破碎的细菌，可用溶菌酶加EDTA处理。所得到的粗制DNA，经酚、氯仿抽提纯化，再用乙醇沉淀后用作PCR反应模板。

引物tm是设值和合成引物时的tm值,

也就是理论值。

而pcr产物tm值是在实际 *** 作中摸索出来的温度值

引物tm值与pcr产物tm值这两个不同的引物当然退火温度也不相同,一般在设计引物的时候,程序就会显示出tm值是多少在做pcr的时候,将退火温度设定的稍微低于tm值一点,降低引物的特异性,可能会好点

当然,做pcr有一定的运气成分,同样的条件有时能扩出基因来,有时候却不能一般来说,一直无法p出基因的话,首先就要检查引物设计是否有问题,如果没有问题,或者以前p出来过那么检查下退火温度,多试几个温度再就是mg离子的浓度,模板不要太多多尝试一下

总之,设定退火温度的时候略微比tm低一点,适当的调整,多多尝试,就好了

朋友，这是你的电脑误删了系统文件，或系统文件被顽固木马破坏！（答案原

创，原作者：力王历史）提示：急救箱无法联网，就用：“离线模式”！

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一步法,使用特殊引物,全程只设置一个温度即可完成扩增这种特殊引物有专利

二步法即循环扩增中设置2个步骤,这个方法主要扩增短片段,一个是95度变性,另一个是退火与扩增的温度,一般设置在55~60之间,当然也有例外

三步法就是平常见到的方法,扩增循环有三步,变性,退火,延伸

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