石蜡切片制作过程是怎样的

1取材

确定所取材料的来源及部位，纵切还是横切；

取材要迅速，防止阻止发生进一步变化，材料体积要适宜。

2固定

（1） 固定液的选择

最常用的固定液为FAA（万用固定液）。

它的优点是材料固定时间不受限制，固定时间短则数小时，长则数月或数年。（可做材料保存液）

配方： 50％或70％酒精 90ml

冰醋酸 5 ml

福尔马林 5 ml

(柔软材料用50％酒精，坚硬材料用70％酒精配制)

（2）材料固定后的处理

冲洗或漂洗：组织固定后应充分水洗，除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响以后的染色效果。

(材料固定后，若暂时不能进行下一步 *** 作，可于70%的酒精溶液或直接与FAA固定液中，于冰箱中4℃存放。)

下图为固定液浸泡的组织切块。3脱水

目的：水和透明剂不能互溶，只有脱去水分后，才能让透明剂进入。

试剂：梯度酒精溶液

流程：70%---85%---95%--100%---

100% 每步1h-2h左右。

注意事项：保证脱水梯度和每一步脱水时间，水要完全脱净，但也不能过度脱水（过久使组织变脆、收缩，这个时间大家可以根据自己的实验来摸索一下，不必完全按照本 *** 作来）。

下图为自动组织脱水机，适于大量样品组织脱水用。如果材料体积及样品量较少可用小烧杯做容器来进行逐级脱水。04

4透明

目的：纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的媒浸液，替换出组织内的酒精。

(二甲苯是最常用的透明剂，可以很好地与石蜡互溶)

流程：二甲苯与酒精的等体积混合液1h---纯二甲苯1h---纯二甲苯1h。

05

5浸蜡与包埋

目的：用石蜡取代透明剂，使石蜡浸入组织而起支持作用。

浸蜡程序:(恒温)

（1）低温浸蜡（36℃）：接上步，在有二甲苯和材料的烧杯中逐步加碎蜡至过饱和（石蜡不能溶解），过夜12-24h。

（2）高温浸蜡（55-60℃，高于石蜡熔点3℃ ）：

将上步二甲苯与石蜡的混合液倒出，不要倒掉材料，将烧杯中加入纯石蜡，共5-24h。纯石蜡需要更换三次。

关于石蜡的选择石蜡熔点：

对于较硬的材料，用熔点较高的石蜡进行包埋；

当切片较薄时（在8μm以下），选用熔点较高的石蜡包埋；

夏季宜采用熔点较高的石蜡（56,58℃）,冬季宜选用熔点较低的石蜡（52,54℃）。切片

传统的切片方法是将包埋好的蜡块用刀片修成规整的梯形，粘于小木块上，上机切片。

新型的切片方法是将包埋框（见下图）代替木块的支撑作用，上机切片。

切片的厚度可以根据自己的实验要求来确定，一般在8μm-20μm范围内。

（下图为传统切片机与新型自动切片机）07

7粘片与烤片

粘片：用粘片剂将蜡片牢附于载玻片上，防止在后续的 *** 作中材料脱落。

在载玻片上涂抹粘片剂（甲液），再滴蒸馏水（乙液），放上蜡片，用滤纸吸取多余的水分。

烤片：将载玻片放于40℃展片台中烤干。

常用的粘片剂为郝伯特(Haupt) 配方：

甲液：明胶 1g 乙液：甲醛 4 ml

蒸馏水 100ml 蒸馏水 100ml

甘油 15 ml

苯酚 2g08

8脱蜡与复水、染色

脱蜡目的：干燥后的切片需脱蜡及复水才能在水溶性染液中进行染色。

复水目的：脱蜡后的材料，如果不经过复水，直接进入染色剂中，材料将会严重变形，甚至难以染色。

染色目的：使细胞组织内的不同结构呈现不同的颜色和足够强的差异以便于观察。

总体流程：二甲苯1/2 二甲苯+1/2纯酒精100%酒精95％酒精85％酒精番红（4h以上）95％酒精固绿（迅速）95％酒精（迅速）100%酒精1/2 二甲苯+1/2纯酒精二甲苯二甲苯，以上各级约需5～10分钟，已注明时间的除外。

染色剂：1%番红（85%酒精配制）

05%固绿（95%酒精配制）09

9切片脱水、透明和封固

接上步，在载玻片上滴加适量（1～2滴）中性树胶，再将洁净盖玻片倾斜放下，进行封片。

切片放入42℃温箱中干燥过夜。镜检，将合格的切片贴上标签。

封固剂选择加拿大树胶（Canada balsam）或中性树胶

至此，植物组织的石蜡切片大功告成！

石蜡切片法 ：

石蜡切片法是以石蜡作包埋剂,用旋转切片机将材料切成薄片,经一系列处理制成永久制片的方法在研究植物的细胞,组织,胚胎以及形态等方面石蜡切片法是最理想的制片方法

石蜡切片法的一般流程为:取材→固定→抽气→洗涤→脱水→透明→浸蜡→包埋→修块→切片→粘片→染色→封片

取材

用锋利的刀片切取新鲜的植物材料,选定适宜的材料,立即固定

取材的注意事项如下:

(1)取材料要新鲜动作要迅速,以免挤压损坏组织;取病理材料时,应设置对照材料

(2)所取材料大小要适当:根和茎一般直径≤5mm,切取成5-10mm小段;叶片一般取过中脉处,切成2-5mm宽,5-8mm长在切材料时,必须注意刀片与中轴成直角,两切面平行,否则制成的切片细胞是斜的 雌,雄蕊一般不需分割

(3)取材时间可根据切片要求有所区别如:在进行植物发育的研究过程时,需要找到细胞分裂相,一般在晴天的早晨9:00-10:00时取材,此时植物细胞分裂活动较明显

(4)取材不易过老,否则制片有难度(过老的材料须在滑走切片机上进行);对纵切的材料适当多取材,如根尖,茎尖等,因为切到材料正中的概率较低

(二)固定

将已切好的材料尽快地浸入相当于材料10-15倍体积的固定液中借助固定液的作用,使细胞的新陈代谢瞬时停止,并保持细胞或组织的形态构造及其内含物的状态不发生变化从而达到使组织变硬从而便于切片,增强内含物的折光度,令细胞易于着色的目的,同时具有防腐作用以新鲜配制固定液效果较好固定的时间依材料的种类,性质,大小等而定材料固定完毕,保存于加盖的容器内,贴上标签

良好的固定剂,应是穿透力强,使细胞立刻致死,原生质全部凝固;不发生任何变形,增强折光率,并且不妨碍染色

常用固定液:

简单固定液 以一种化学药品配制的固定液

⑴ 乙醇 为凝固型固定剂常用无水乙醇或95%乙醇

⑵ 甲醛 为非凝固性固定剂具强烈刺激性气味纯净的甲醛为无色透明液体固定用的浓度为4%-10%

⑶ 醋酸 为凝固型固定剂为无色透明的液体,刺激性极强,低温下凝结成冰,故又名冰醋酸

2 混合固定液:

由几种试剂,适量配制而成混合遵循原则:① 优缺点互补;② 膨胀与收缩相互平衡;③ 强氧化剂与还原剂应分别配置

常用混合固定液有下列几种:

⑴ FAA 固定液(福尔马林-冰醋酸-乙醇) 广泛适用于根,茎,叶,花药,子房的组织切片,所以又称为万能固定液一般固定时间不低于24 h该固定液优点是在较低温度下(10℃左右)适用于材料的长期保存,可兼作保存液并且固定的材料,不妨碍染色,但用于细胞学上的固定效果较差

⑵ 纳瓦兴(Navaschjn's)固定液 1912年首创适用于细胞学与组织学研究的切片观察但渗透慢,不能长期保存;主要用于显示分裂相

(三)抽气

植物材料内部多由于含有空气,导致固定液不能完全深入材料投入固定液后需要立即抽气以便让固定液有效透入材料组织中,并排除材料内气泡的干扰

一般抽气时间为20-30 min抽过气的材料在停止抽气,应沉入底部

(四)洗涤

固定液中的成分有可能会妨碍染色或发生沉淀或结晶,影响观察;有的还会继续作用,使材料变质等因此,在使用材料时,需根据固定液的种类,用水,缓冲液或70%乙醇洗去渗入细胞内部的固定液如:用FAA固定的材料在脱水时用70%乙醇反复洗涤数次如用水洗涤,可将材料自固定液中取出,放入指形管,加入半管水,用纱布将管口扎紧,置于水槽内,进行流水冲洗流水冲洗时间一般为12-24 h

(五)脱水

材料经洗涤后含有部分水分,会使材料分解而且透明剂与水是不相混合的,不利于材料的透明和包埋等后期处理因此需用脱水剂逐渐除去材料中的水分,以便让石蜡渗透进细胞所以,脱水是制片的关键环节脱水剂要求能与水混合,而且能与其他有机溶剂互相替代

脱水必须在有盖的玻璃器皿中进行,防止吸收空气中的水分;在更换高一级的脱水剂时,最好不要移动材料,以免损坏材料

(六)透明

透明剂要具有既能与脱水剂相混合又能和石蜡相混合的性质,可以将材料中的脱水剂置换出来,使石蜡能顺利进入材料中

二甲苯是目前应用最广的透明剂,作用迅速,但易使材料变脆

(七)浸蜡

是指逐步清除材料中的透明剂,以使石蜡充分渗透于材料内部的过程这样,材料的各部分都能保持原来的结构与位置,切片不致发生破裂或其他变形

浸蜡是一个渐进的过程,常用的正丁醇

每次浸蜡的时间,视材料大小而调节

(八)包埋

材料经过足够时间的浸蜡后,需包入蜡块,以备切片

*** 作方法:根据切片材料大小,确定所需纸盒的尺寸,用表面光滑的磅纸预先叠好纸盒

(九)切片

即将包埋好的材料块用切片机切成所需厚度的切片带

(十)贴片

是用黏贴剂把切片平铺贴在载玻片上,以便于染色和观察

常用的粘片剂有下列二种:

(1) 明胶黏片剂

(2) 蛋清黏片剂

(十一) 染色

即根据植物细胞中不同的化学性质,用染料分别进行染色,以利于观察切片中细胞与组织的形态与构造及其内含物等染色基本程序为脱蜡,染色,分色封片

染色方法可分为下列几类:

① 单染 只用一种染料染色

② 双重染色 两种染料染色,如番红--固绿;苏木精---曙红

③ 多重染色 多种染料染色,如番红—固绿—桔红G;酸性品红—苯胺蓝—桔红G等

(十二) 封藏

封藏于中性树胶中,使材料能在显微镜下清晰地显示出来,并能长期保存

方法:将含材料的载玻片放在吸水纸上(切片一面向上),迅速地在切片的中央滴一滴树胶(必须在二甲苯干燥前进行),用右手持小镊子轻轻地夹住盖玻片的右侧,稍微倾斜使其左侧与封藏剂接触,然后再缓慢地放下,避免产生气泡

冷冻切片法：

冷冻切片的制作方法

（1）低温恒冷箱冷冻切片制作法

1．本室现有Shandon As 620 E型恒温箱冷冻切片机的主要性能。该机的箱面上有电子控制板，装有即时冷冻键和除霜键，启动即时冷冻键，机器马上进行工作状态，并可持续10mins。启动即时除霜键，可将工作间顶部后面的制冷栅上的霜除掉，并可持续15mins。有照明键一个，启动该键可照明工作间，有利工作及观察组织的冰冻状况。配有消毒键一个，当进行一周的工作或者一天的工作后，启动该键，可对工作间进行消毒。当每天工作完毕时，可启动密锁键，锁住工作间。除此之外，箱面的左边有四个按键，两个为快速自动进退键，两个为微小进退键，还有一个手动旋钮，调节修组织块时的进退。

冷冻箱内左边的冷冻台，温度可达-60℃左右，冷冻箱的中间为一台切片机，工作间的温度在0-30℃间可任意调节，并在箱面上的荧屏显示出来。

2． *** 作方法及步骤：

①取材，未能固定的组织取材，不能太大太厚，厚者冰冻费时，大者难以切完整，最好为24×24×2mm。

②取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上，冰冻。小组织的应先取一支承器，滴上包埋剂让其冷冻，形成一个小台后，再放上细小组织，滴上包埋剂。

③将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。

④调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在5～10um间。

⑤调好防卷板。制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求 *** 作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。切片时，切出的切片能在第一时间顺利地通过刀防卷板间的通道，平整地躺在持刀器的铁板上。这时便可掀起防卷板，取一载玻片，将其附贴上即可。

⑥应视不同的组织选择不同的冷冻度。冷冻箱中冷冻度的高低，主要根据不同的组织而定，不能一概而论。如：切未经固定的脑组织，肝组织和淋巴结时，冷冻箱中的温度不能调太低，在-10- -15℃左右，切甲状腺、脾、肾、肌肉等组织时，可调在-15～20℃左右，切带脂肪的组织时，应调至-25℃左右，切含大量的脂肪时，应调至-30℃。

3．冰冻切片时的注意事项：

①防卷板及切片刀和持刀架上的板块应保持干净，需经常用毛笔挑除切片残余和用柔软的纸张擦。有时需要每切完一张切片后就用纸擦一次。因为这个地方是切片通过和附贴的地方，如果有残余的包埋剂粘于刀或板上，将会破坏甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。

②多例多块组织同时需做冰冻切片时，可各自放于不同的支承器上，于冷冻台上冻起来，然后依据不同的编号，依序切片，这样做既不费时也不会乱。

③放置组织冰冻前，应视组织的形状及走势来放置，所谓“砍柴看柴势”，切片也是如此，如果胡乱放置，就不能收到很好的效果。

④组织块不须经各种固定液固定，尤其是含水的固定液，在未达到固定前，更不能使用。临床快速冰冻切片，不须要预先固定，一是为了争取时间，二是固定了的组织，反而增加了切片的难度。如果使用未完全固定的组织做冰冻切片，就会出现冰晶。这是因为含水的固定液在组织未经固定前，其中的水份也可渗入到组织中去，当冰冻发生时，这些水份就存留于组织中，形成了冰晶。

⑤当切片时，如果发现冰冻过度时，可将冰冻的组织连同支承器取出来，在室温停留片刻，再行切片，或者用口中哈气，或者用大拇指按压组织块，以此来软化组织，再行切片。另者，调高冰冻点。

⑥用于附贴切片的载玻片，不能存放于冷冻处，于室温存放即可。因为当附贴切片时，从室温中取出的载玻片与冷冻箱中的切片有一种温度差，当温度较高的载玻片附贴上温度较低的切片时，由于两种物质间温度的差别，当它们碰撞在一起时，分子彼此间发生转移而产生了一种吸附力，使切片与载玻片牢固地附贴在一起。如果使用冷藏的载玻片来附贴切片，由于温度相同，没有发生上述的现象。

4．冰冻切片的快速染色法

冰冻切片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定1分钟后即可染色。以往，为了防止切片脱落，当切片附贴于载玻片后，即用电吹风吹干后再固定。根据实验对比认为这种做法欠妥未经固定的切片，强热作用后，蛋白发生变性，核内含有的物质由于热的作用融合在一起，染色后镜下分辨不出核内的各种物质。冰冻切片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定，这样可以使切片中细胞内各种物质都在没有任何变化的情况下被固定起来，经一年多来1000例冰冻切片的制作实践认为这样制作固定切片好，核染色质清晰，核仁明显，其他物质都完好保存。

方法：

① 切片固定30秒－1分钟。

② 水洗。

③ 染苏木素3－5分钟。

④分化。

⑤ 于碱水中返蓝20秒。

⑥ 伊红染色10－20秒。

⑦脱水，透明，中性树胶封固。

冰冻组织1－2分钟，切片1分钟，固定1分钟，染色共五分钟。总共在10分钟内完成快速制片过程，结果与石蜡切片不相上下。

冰冻切片的方法还有很多种，如甲醇循环的半导体冰冻切片法，二氧化碳冰冻切片法，半导体冰冻切片法和氯乙烷冰冻切片法等，这些方法在目前来说已很少使用，因此在这里不作阐述。

石蜡切片 *** 作步骤：

1、取材

2、固定

3、脱水：30%--50%---70%（每步60分钟）---85%---95%--100%---100%（每步30钟）。

4、透明：转入1/2二甲苯＋1/2无水酒精混合液20ml透明1h，纯二甲苯20ml透明1h，再用纯二甲苯20ml透明40min，并回收各液。

5、浸蜡：

（1）将材料分别放入25%、50%、75%的石蜡-二甲苯溶液中，每级30分钟。该过程在高于石蜡熔点3℃的温箱中进行；

（2）将材料放入溶解的纯蜡中，时间为30分钟，该过程再重复两次。在高于石蜡熔点3℃的温箱中进行。

6、包埋

（1）将溶解好的石蜡在加入预先折好的纸船中，石蜡溶解后应过滤后使用，以免含杂质影响切片；

（2）材料放入纸船，并摆好在蜡中的位置，如果包埋的组织块较多，应进行编号；

（3）将纸船放置在冷水上加速冷却过程。

7、切片

（1）修整：用刀片修成方形或长方形蜡块；

（2）以少许热蜡液，将蜡块底部粘附于小木块上，以少许石蜡融化在蜡块边缘，加强粘附的强度；

（3）木块粘附于切片机上，调整切片机，使蜡块切面与切片刀刃平行；

（4）切成连续的蜡带，切片刀的锐利度、蜡块的硬度都会影响切片质量，可用热水或冷水适当改变石蜡的硬度，也可在冰箱中放置一段时间；

（5）分割蜡带，分开的蜡片放在45℃温水上，使蜡片展开。

8、粘片与烤片

（1）可用粘片剂防止蜡片滑脱，但粘附剂通常容易被染色而使切片背景有颜色，影响观察，实验表明，载玻片洗的足够干净，一般不会滑片；

（2）用载玻片捞取展开后的蜡片，调整蜡片的位置使位于载玻片中央，自然干燥。

9、脱蜡与醇化

（1）将切片放入纯二甲苯溶液中10分钟，使石蜡完全溶解，共2次；

（2）溶去石蜡的切片依次放入75%、50%、25%二甲苯-乙醇溶液中，每级10分钟；

（3）再将切片依次放入100%、95%、90%、80%、70%、60%、50%的乙醇溶液中进行醇化，每级10分钟。

10、染色

（1）将切片放入番红染液中30分钟，番红染色后，将切片依次放入50%、60%、70%、80%的乙醇溶液中分级洗脱，每级10分钟；

（2）洗脱后的切片放入固绿染液中染色1分钟；

11、脱水、透明与封片

（1）染色后的切片依次放入90%、90%、95%、100%乙醇溶液中分级洗脱，每级10分钟；

（2）洗脱后的切片依次放入25%、50%、75%、100%、100%二甲苯溶液中透明，每级10分钟，出现浑浊表示脱水不彻底，需重来；

（3）滴1-2滴中性树胶，将洁净的盖玻片倾斜放下，封片，镜检，选择好的贴上标签，性切片制作完成。

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印制线路板切片测试方法 1目的

用于评估电镀孔质量和评估线路板表面和孔壁及覆盖层的金相切片，也可以用于装配或其它区域。 2测试样品

从线路板上或测试模上切下一块样品，样品检查区域周围应留有空白地带，以免损伤检查区域，建议每块样品至少包含三个最小孔位的电镀孔。 3设备

1）样板裁切机

2）凹模（有减压的啤孔）

3）锣机或锯床

4）固定带

5）光滑装配台

6）防粘剂

7）样板支撑架

8）金相抛光台

9）砂带磨光机

10）金相图

11）室温处理封装物质

12）金刚砂纸

13）用于抛光轮的步

14）抛光润滑剂

15）微酸液

16）用于清洁及微蚀的棉纱

17）酒精

18）微蚀剂 4程序

1）样品的准备：在180－220或320粒度的轮上研磨，并控制研磨深度在0050inch范围内（近似），安装前须去毛刺。

2）安装金相样板

清洁，干燥装配台表面，然后，在台上及安装环内注入防粘剂将样品装入安装环，并将其固定。必要时，将需检查的表面面对装配表面。小心将封装材料注入装配环，确保样板竖立，孔内充满封装材料。树脂封装材料可以要求真空除气，容许样品在室温下固化，用蚀刻或其它永久性方法在样板上作标记。全文地址： >

应该是“切面编程”吧。在软件业，AOP为Aspect Oriented Programming的缩写，意为：面向切面编程，通过预编译方式和运行期间动态代理实现程序功能的统一维护的一种技术。AOP是OOP的延续，是软件开发中的一个热点，也是Spring框架中的一个重要内容，是函数式编程的一种衍生范型

干天麻要蒸多久才能切片的问题，蒸的目的主要是为了蒸软了才能切得动，一般可用小火蒸上半个小时就可以发软切片，如果是没有制过的干天麻，在蒸时要在天麻上放上生姜片，这样可以降低天麻的毒性，这种方法叫姜制。

你好，我是网页设计师，希望我的回答能为你带来帮助！

CSS切片这个词不是这么说的：第一，CSS是新式，也就是样式结构表，用来定义网页布局，进行网页美化的样式。

第二，切片，就是用PS画的，只是用切片工具进行切片，也可以直接复制那个进行保存，切片，直接说就是一道过程，要把进行切割而已，为什么会用么切片就是因为PS画的效果图是分层的，有时候在层次上需要几个图层一起下来，用切片就方便一点，不过我不喜欢切片，我喜欢把图保存一张高质量的JPG后再进行复制，这只是设计师的爱好而已。

因为一个PS效果图要做成一个网页，不切片的话上传上去就是一个的形式了，就不会出现文字，所以要进行切片排版，这样才可以输出文字，当然这得靠我们的程序员了。

切好片之后的排版，就要用到CSS样式来进行文字，或的控制，这就是CSS定义样式，起到美化的作用。

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