除了改良苯酚品红染色,还有哪些染色方法可以检测植物细胞程序性死亡,其原理是

用台盼蓝染色，死细胞会被染成蓝色，而活细胞不着色，从而判断细胞死活

死细胞的鉴别一般通过DNA结合染料排除，利用死细胞膜通透性增大、不破膜的情况下DNA染料即可进入的特点区分出死细胞，但所用染料浓度、时间远远低于细胞周期所用的浓度，并且不需要固定。

常用的核酸结合死活鉴别染料包括：

碘化丙啶（propidium iodide，PI）

4'，6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐（4',6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride，DAPI）

7-氨基 - 放线菌素D（7-amino-actinomycin D ，7-AAD）

DRAQ7

SYTOX

不过对于一些胞内抗原（细胞因子、转录因子），由于需要固定、破膜，所以上述染料中，除了一些胺类染料（如Live/Dead、Ghost等）和新型蒽醌类染料CyTRAK Orange外，其它染料不再适合此类标本的细胞死活鉴别。

这里，只向大家讲解一下用PI、7-AAD、DAPI的染色方法，其它商品化死活染料请按照说明书 *** 作：

1 用05ml 1×PBS重悬细胞。

2 加入PI或DAPI或7-AAD，终浓度分别为PI（5 µg/ml）、DAPI（500-1000 ng/ml）、7-AAD（25 µM）

3 加入上述染料后，尽快上机，一般不要超过5分钟（有些厂家说明书写着10分钟，可能与浓度有关，可按照说明书 *** 作）。

PI检测通道：使用488 nm激发，用610/20 BP收集

DAPI检测通道：最好用355nm激发，用440/40BP收集；也可以用405nm激发，450/50BP收集

7-AAD检测通道：用488nm激发，用670/14BP收集

下图是用PI检测细胞死活的结果图：

1、细胞死亡：细胞死亡作为生物体的一种常见现象，在动物细胞中有三种方式：凋亡（apoptosis），自噬（autophagy）和坏死（necrosis）。前两种类型属于细胞程序性死亡（programmed cell death，PCD）。细胞坏死是细胞在遭受极度刺激时引起的细胞死亡，以细胞质膜的破裂为特征，造成内含物的炎性泄露，是一种非正常死亡。细胞的PCD是细胞的一种“主动性”死亡行为，从形态上和功能上都与细胞坏死有很大的不同。

2、植物中细胞程序性死亡（PCD）：目前可依据液泡膜破裂后，是否在细胞质中发生快速降解将PCD分为两个大类。第一类为自溶性（autolytic）PCD，与液泡中的水解酶的释放有关，在液泡破裂后，导致细胞质的快速清除。第二种为非自溶PCD，（non-autolytic），即液泡膜破裂但是没有出现快速的细胞质的清除。目前鉴定细胞的PCD类型，还是以细胞形态学为主。

3、动植物细胞凋亡标准：动物：凋亡：凋亡小体，或者在细胞表面的水泡，感染病原体后在其他细胞中的降解。自噬：自噬小体，自溶酶体，和小的促进细胞溶解的液泡数目的增加坏死：没有上面的定义的标准。植物：自溶：植物膜破裂之后对细胞质的快速清理。非自溶：没有对细胞质的快速清理。其他：染色质浓缩细胞核破裂自我标记信号自食信号细胞膨胀，细胞器膨胀，质膜破裂染色质浓缩。液泡体积增加（细胞质体积减小）需要Ca2+的内流，细胞质皱缩，细胞器膨胀，小泡增多但体积不增加。

细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用；它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。细胞发生凋亡时，就像树叶或花的自然凋落一样，对于这种生物学观察，借用希腊“Apoptosis”来表示，意思是像树叶或花的自然凋落，可译为细胞凋亡。 细胞凋亡与细胞程序性死亡（PCD） 从严格的词学意义上来说，细胞程序性死亡与细胞凋亡是有很大区别的。细胞程序性死亡的概念是1956 年提出的，PCD 是个功能性概念，描述在一个多细胞生物体中某些细胞死亡是个体发育中的一个预定的、并受到严格程序控制的正常组成部分。例如蝌蚪变成青蛙，其变态过程中尾部的消失伴随大量细胞死亡，高等哺乳类动物指间蹼的消失、颚融合、视网膜发育以及免疫系统的正常发育都必须有细胞死亡的参与。这些形形色色的在机体发育过程中出现的细胞死亡有一个共同特征：即散在的、逐个地从正常组织中死亡和消失，机体无炎症反应，而且对整个机体的发育是有利和必须的。因此认为动物发育过程中存在的细胞程序性死亡是一个发育学概念，而细胞凋亡则是一个形态学的概念，描述一件有着一整套形态学特征的与坏死完全不同的细胞死亡形式。但是一般认为凋亡和程序性死亡两个概念可以交互使用，具有同等意义。 细胞凋亡与坏死的区别 虽然凋亡与坏死的最终结果极为相似，但它们的过程与表现却有很大差别。 坏死（necrosis）：坏死是细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程。表现为细胞胀大，胞膜破裂，细胞内容物外溢，核变化较慢，DNA 降解不充分，引起局部严重的炎症反应。 凋亡是细胞对环境的生理性病理性刺激信号，环境条件的变化或缓和性损伤产生的应答有序变化的死亡过程。其细胞及组织的变化与坏死有明显的不同

当然不是相同的，一个是现场控制设备，顾名思义就是在工程现场进行控制的（是设备），一个是可编程控制器，使你可以对它进行程序的烧写和编译，可以执行你要做的事，是器件。最后一个不是用来控制的！

kerr（

1972）最先提出凋亡的概念，与细胞坏死的区别是：①细胞通过出芽的方式形成许多凋亡小体；②凋亡小体内有结构完整的细胞器；

③不引起炎症；④线粒体无变化，溶酶体活性不增加；⑤内切酶活化，dna有控降解，凝胶电泳图谱呈梯状；⑥凋亡通常是生理性变化，而细胞坏死是病理性变化。

细胞程序性死亡（programmed

cell

death，pcd）是一种基因指导的细胞自我消亡方式。pcd和细胞凋亡的区别在以下方面：pcd是功能性概念，凋亡是形态学概念；pcd的最终结果是细胞凋亡，但细胞凋亡并非都是程序化的；pcd存在于胚胎发育过程中。

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