高通量ITS测序成真菌性角膜炎诊断补充方法，原理是什么呢

真菌性角膜炎是由病原真菌引起的高度致盲性角膜炎。随着抗生素和糖皮质激素的广泛使用，发病率不断上升。培养法曾作为真菌性角膜炎诊断的金标准，但实际诊断效果并不理想。在真核生物的核糖体DNA中，ITS序列是一个非编码区，其长度和序列在不同物种之间有很大差异，因此可以用于不同真菌的分类和鉴定。

山东第一医科大学附属青岛眼科医院教授黄宇森及其团队在《临床微生物学与感染》上发表研究论文，通过高通量ITS测序描述了健康人眼表面的共生真菌群落。结果表明，桔青霉、黑曲霉、木霉。和木霉属。用培养基法从89%正常人的结膜囊中分离。ITS序列测定法可在属水平上鉴定94种真菌。

高通量测序方法为进一步研究真菌菌群在眼睛健康和疾病中的潜在作用奠定了基础，也提示眼表共生真菌的存在似乎削弱了常规培养方法作为疾病病原学诊断的可信度。结果表明，高通量ITS测序方法在一定程度上质疑了真菌培养物中病原菌鉴定的准确性。高通量ITS序列测定可作为真菌性角膜炎病原学诊断的辅助方法。研究人员指出，尽管培养法一直被认为是真菌性角膜炎病原学诊断的金标准，但它仍有许多缺点。

首先，不同的真菌有时会表现出相似的外观，而同一种真菌也可以表现出不同的形态特征，所以对培养结果的判断很大程度上取决于检验者的经验。第二，真菌通常生长缓慢。第三，一些病原真菌不适合医院使用的普通真菌培养基。第四，一些经验性处理或入院前处理会降低真菌的活性，影响培养结果。第五，培养方法的结果可能是眼表共生真菌群落中最适合所选培养基的真菌。

Blast（Basic Local Alignment Search Tool）是一套在蛋白质数据库或DNA数据库中进行相似性比较的分析工具。BLAST程序能迅速与公开数据库进行相似性序列比较。BLAST结果中的得分是对一种对相似性的统计说明。 BLAST 采用一种局部的算法获得两个序列中具有相似性的序列。 Blast中常用的程序介绍： 1、BLASTP是蛋白序列到蛋白库中的一种查询。库中存在的每条已知序列将逐一地同每条所查序列作一对一的序列比对。 2、BLASTX是核酸序列到蛋白库中的一种查询。先将核酸序列翻译成蛋白序列（一条核酸序列会被翻译成可能的六条蛋白），再对每一条作一对一的蛋白序列比对。 3、BLASTN是核酸序列到核酸库中的一种查询。库中存在的每条已知序列都将同所查序列作一对一地核酸序列比对。 4、TBLASTN是蛋白序列到核酸库中的一种查询。与BLASTX相反，它是将库中的核酸序列翻译成蛋白序列，再同所查序列作蛋白与蛋白的比对。 5、TBLASTX是核酸序列到核酸库中的一种查询。此种查询将库中的核酸序列和所查的核酸序列都翻译成蛋白（每条核酸序列会产生6条可能的蛋白序列），这样每次比对会产生36种比对阵列。

rDNA 上的5 8 、18 和28 SrRNA 基因有极大的保守性, 即存在着广泛的异种同源性。而由于ITS 区不加入成熟核糖体, 所以ITS 片段在进化过程中承受的自然选择压力非常小,因此能容忍更多的变异。在绝大多数的真核生物中表现出了极为广泛的序列多态性, 即使是亲缘关系非常接近的2 个种都能在ITS 序列上表现出差异, 显示最近的进化特征。研究表明,ITS 片段的进化速率是18 S rDNA 的10 倍。这就是ITS 序列在微生物种类鉴定和群落分析的理论基础。ITS1 和ITS2 是中度保守区域, 其保守性基本上表现为种内相对一致, 种间差异比较明显。这种特点使ITS 适合于真菌物种的分子鉴定以及属内物种间或种内差异较明显的菌群间的系统发育关系分析。由于ITS 的序列分析能实质性地反映出属间、种间以及菌株间的碱基对差异, 此外ITS 序列片段较小、易于分析, 目前已被广泛应用于真菌属内不同种间或近似属间的系统发育研究中。ITS 的序列分析还有效地解决Lenti nul a 、Suill us 、Tuber 、Cer at ocystis 和Oi diodendron等真菌应用形态学特征进行分类所引起的纷争, 弥补了传统分类上的一些不足。

一类单细胞或多细胞微生物。不含叶绿素，大都能形成硬的多糖细胞壁。属于真核生物，最常见的真菌是各类蕈类，另外真菌也包括霉菌和酵母。现在已经发现了七万多种真菌，估计只是所有存在的一小半。大多真菌原先被分入动物或植物，现在成为自己的界，分为四门。

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