DNA的检测的目的主要是判断目前患者病毒复制程度的大小,也是传染性大小,尤其在判断乙肝的转归,以及用药前后的疗效的判断有很重要的作用,也是重要的用药指征之一,尤其是抗病毒治疗。现在这种基因的检测技术已经广泛的应用于临床。
检测结果的临床意义参考:
1、定性
“+”:阳性,体内病毒存在复制。
对应于定量方式中HBV-DNA>1x10E3 copies/ml。
“-”:阴性,病毒的复制程度低于检测限。
对应于定量方式中HBV-DNA<1x10E3 copies/ml。
2、定量(准确性较差,但精度较高。采用PCR聚合酶链反应,体外扩增)
HBV-DNA定量单位在报告单上通常用“copies/ml”、“拷贝数/ml”或“IV/ml”表示,表示每毫升的血清或血浆中病毒基因组的个数,该数据越大,表明病毒在人体的复制越厉害,例如“HBV-DNA=43x10E3 copies/ml”代表每毫升血清中有43乘以10的3次方,也即4300个乙肝病毒。
a x 10Eb copies/ml判断血清或血浆中病毒含量主要看上式中的“b”,b越大,表示含量越高,治疗过程中,b变小说明病毒的复制得到控制,治疗有效。通常如果病毒含量下降至b<3,说明病毒基本得到控制;如果病毒含量降至“0”,则说明病毒在血清或血浆中不存在,病毒的复制已被抑制。
注意事项:
1、对于阴性的标准,我们一般认为是10的3次方,但不能一概而论,这个参考值也会因为各家医院的仪器和试剂的不同而有变化,应该视化验单上具体给出的参考值而定。阴性最准确的表达方式是,未检测到,化验单表示为<参考值copies/ml,并没有具体的数值。
2、DNA复制程度的大小并不代表肝脏实际损害的程度,DNA复制程度高,并非就代表损害严重。是否有损伤或损伤的程度请参考生化检查结果或肝活检的结果。
3、关于单位的换算。最常见的单位是copies/ml,也有重量的单位,比如fg/ml、pg/ml。1 pg = 1000 fg,那么1 pg/ml = 283,000 copies/ml。
4、由于PCR的方法虽然精确度高,但是误差相对较大,而且假阳性率也比较高,所以,对于每次检查的结果,在两个数量级之内的变化,通常会认为没有变化或变化不大。而且DNA也在不断的波动,所以不能以一次或两次的检查结果酒简单的判断是否好转,应该综合其它结果以及DNA的变化趋势。
值得注意的是,一些无良的欺骗性的医院,以“基因检测治疗”作为幌子,骗取患者的信任。其实这只是一种应用广泛的检测而已,并非什么基因疗法。另外提醒一下,PCR的实验室的规范是非常严格的,一些小的医院并不具备这样的条件,而且现在很多骗子医院常常用这个来篇患者的钱,这个就要求患者尽量去大医院检查,不要图便宜、图快,最值得注意的是,很多骗钱的诊所和医院,常常利用检验作假,让您的指标每一次化验看上去都在好转,但实际上并非如此。TB-PCR是结核分枝杆菌检测项目,我也不明白为什么给你做这个,ct值是0说明是阴性结果,就是你没有结核感染,HBV-DNA检测是乙肝病毒遗传物质的检测,反应出乙肝病毒的病毒载量或者说活跃程度,具有指导用药的意义,你的结果主要每毫升血液中含有乙肝病毒748E+04(74800)IU,每个IU是56个病毒个数,你自己算吧,算是病毒复制比较活跃吧;
另外在做实验过程会带入的一组标准物质,比如10×104IU/ml、10×105IU/ml、10×106IU/ml、10×107IU/ml,这一组标准物质和你的标本一同检测,这一组标准物质会扩增出来一系列ct值,这些CT值与标准物质取对数的值就会绘制出标准曲线,得出一个标准曲线的方程,均方差和相关系数是反应这个方程可靠程度的,相关系数10说明实验做的很不错,方程是有意义的。将你的CT值2648带入方程式,就计算出拷贝数,进而得出病毒载量的IU数,就是748E+04(74800)每毫升,不清楚你的专业背景,也不清楚你能不能看懂,其实你只要关心748E+04(74800)每毫升这一项就够了,其他的都不是重点。根据你的问题简洁回答一下:
第一从你两对半的数据可以证明你是乙肝大三阳患者一般来说,大三阳的病人体内的病毒量较小三阳大,病毒量越大,传染性也就越强 HBV-DNA定量10x10^7 IU/ml 也可以完全证明以上所说的情况
第二从你的肝功能数据可以证明你的肝功能基本正常所以你的情况暂时不用治疗,应该定期检查肝功能来确定最好进行抗病毒治疗的最好时期
第三你的肝功能有个别出现偏高一点点,出现这样的情况的原因有:剧烈运动、过于劳累或者近期吃过油腻食物,伤寒、肠伤寒 酒精等情况
第四1饮食方面主要是戒酒、戒烟、避免辛辣刺激食品;2避免过度劳累,要注意休息;3 饮食清淡、营养均衡;4保持乐观的心理状态,养成良好的生活习惯。
祝你健康!
1、如果有标准曲线,按照标准曲线计算。
2、一般都是相对量,则用delta delta CT方法来计算。
3、举例如下:对照组基因A的CT值为20, 内参(比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18,内参CT值14。
4、首先算加样量:delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。基因A: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是说基因A的量在实验组是对照组的4倍。但是由于加样量是2倍,所以4处以2=2,最后的相对量是2倍。
5、几点注意:必须确定扩增的特异性,只有相同目标的CT值才能相减(扩增效率有可能不同),2的某次方只是理论值,实际扩增效率低于2,最好不用Syber Green。
扩展资料:
PCR原理:
1、PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
2、PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成:
①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;
②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
③引物的延伸:DNA模板-引物结合物在72℃、DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基互补配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
参考资料来源:百度百科--PCR反应
不用担心,你没有超过正常值。HBV DNA正常值是<10的3次方(或<10E+003拷贝/ML是正常值,此值仅供参考,以检测医院数据为准)。HBV-DNA是乙肝病毒感染最直接、特异性强和灵敏性高的指标,HBV-DNA阳性,提示乙肝病毒有复制和会传染。HBV DNA浓度越高表明病毒复制越活跃。因此,HBV DNA为阳性的乙肝小三阳会传染,如果转氨酶高,很可能是乙肝病毒变异引起的,传染性较强。HBV DNA阴性的乙肝小三阳也会传染,只是传染性弱。
无论HBV-DNA阳性还是阴性,都只是代表了乙肝病毒的复制和传染性强弱,HBV-DNA值的多少和肝损伤的程度没有直接的关系。HBV-DNA阳性的乙肝病毒携带者不一定需要治疗,还要结合转氨酶(ALT)水平。一般来说,只有当转氨酶大于正常值的2倍时,才应考虑治疗。
当HBV-DNA阳性时,表示病人体内乙肝病毒复制活跃,传染性强,此时小三阳会传染,大三阳也会传染。要看你出现的双峰是个别碱基还是所有碱基,如果是个别碱基,那么也有可能是基因多态性,可能还有重大发现呢。如果是测序结果开始没有问题,后面出现问题,有可能是测序本身的问题,再试试看。如果所有位置都有双峰,那问题比较倾向于实验本身的问题,还要看你实验目的是什么:如果RT-PCR结果是用来分析基因的表达,那么两种不同片段都被计算在表达量上了,因此就彻底没有什么用了,重新开始吧。如果你是想克隆一个基因或者一个基因片段,那么没有关系,把RT-PCR扩增的片断纯化后装到任何一个载体里面,转化大肠杆菌,获得阳性克隆。按照概率,其中一部分应该是你需要的目的基因,酶切后进行测序鉴定,找出你需要的克隆就可以了。
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