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网织红细胞中的血红蛋白在核糖体结构内合成。即网织红细胞,具有各种细胞器,血红蛋白此时在细胞内的核糖体上合成,随着细胞的成熟,血红蛋白数量增加,细胞会逐渐失去各种细胞器,完全成熟的红细胞就会红蛋白在核糖体中合成。血红蛋白及其衍生物的吸收光谱测定 目的要求 掌握722型分光光度计的使用 了解血红蛋白及其衍生物的吸收光谱的测定 掌握血红蛋白标准曲线的绘制 实验原理 溶液中的物质在光的照射激发下,产生了对光吸收的效应,物质对光的吸收是具有选择性的,各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱,因此当某单色光通过溶液时,其能量就会被吸收而减弱,光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系,也即符合于比色原理朗伯-比耳定律 比色皿的使用 手持毛玻璃面,不可触碰光滑面 使用前要再用少量(大约1-2ml)待测溶液润洗1次 使用时比色皿光滑面对准光路 使用后及时清洗(用海绵刷沾取肥皂液清洗比色皿,并用自来水冲洗干净,随后用蒸馏水润洗1-2次) 血红蛋白及其衍生物的吸收光谱测定 血红蛋白(Hb)与O2结合生成氧合血红蛋白(HbO2),与CO结合生成碳氧血红蛋白(HbCO)。 因其血红蛋白分子结构不同,当光线分别透过各种Hb溶液时,所吸收的光波也各异,可显出特有的吸收光谱。这些吸收光谱可作为它们定性和定量分析的基础。 如HbO2在可见光波长400~600nm范围内有3个特征的吸收峰,其峰值分别在415、541和576nm处,当氧合血红蛋白转为碳氧血红蛋白(HbCO),此时光谱发生改变,在波长419、540和569nm处出现三个特征的吸收峰,其中在500~600nm范围内2个特征的吸收峰如下图。 本实验先制备Hb及其衍生物,然后在不同波长下测其光吸收度,以吸光度(A)(又称光密度)为纵坐标,波长为横坐标绘制成吸收光谱曲线,由此可以确定它们最大的吸收波长。 仪器和试剂 1.仪器:试管;吸量管; 量筒;722型分光光度计;CO发生器。2.试剂: (1)浓H2SO4; (2)甲酸; (3)蒸馏水; (4)血红蛋白溶液。 (5)NaOH; 实验 *** 作 用草酸钾抗凝,取静脉血,边取边轻轻摇动,即制得全血。
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