农杆菌转化法适用于什么植物

农杆菌转化法适用于什么植物 农杆菌转化法中，植物体必须受损吗？

当然是必要的！所谓的植物受损是为了暴露出表皮以内的柔嫩的部分，这部分细菌才能很好的侵蚀进入。

至于表皮是一层致密的保护层，是难以入侵的，只有受损以后，伤口部位才更容易感染农杆菌。

人工转化中，可以认为切口，或者打孔或者打点滴，这都是可以的。

但是无论哪一种方法，都会破坏表皮的。

此外，至于表皮是没有可以让细菌利用的营养物质的，一旦植物受损，那么必然会就出汁液，这些汁液里面含有细菌生存所需的糖类和无机盐等，可以让细菌生活在里面并且大量导致，只有细菌大量繁殖以后才有机会完成转化过程。

因为这种转化不是必然成功的，是一个概率事件，所以细菌数量够大，机会也就大了很多。

如果植物没有受伤，那么它们就有了表皮这样的天然屏障，农杆菌很难进去，自然也就无法导致，并完成转化过程，因此损伤是必要的。

这个问题涉及到遗传转化体系中受体材料的选择和处理。

农杆菌（属于革兰氏阴性细菌）作为一种天然高效的转基因载体，在植物的遗传转化上具有广泛的应用。

它能在一定条件下趋化性地感染植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。

自然界中存在的农杆菌包括根癌农杆菌 (A.tumefaciens) 和发根农杆菌(A.rhizogenes) 。

根癌农杆菌的Ti质粒基因转化是最常见、应用最广泛的基因转化途径，转基因植物中80%以上是利用根癌农杆菌介导的，它具有遗传稳定、易于转化大片段DNA、 *** 作简单、成本低廉等优点。

目前农杆菌介导的遗传转化体系，已经成功在多种作物中建立。

比如水稻、小麦、玉米、谷子、大豆、糜子、早熟禾、拟南芥、烟草、茶树、马铃薯、甜椒、双孢菇、铁棍山药、黄瓜、南瓜、羽衣甘蓝、苹果、橘子、葡萄、薄皮甜瓜等……农杆菌菌株的侵染能力是转化成功的前提。

目前在遗传转化体系的研究中，应用最广泛的农杆菌菌株有EHA105、GV3101、LBA4404、C58、A281等。

虽然目前用于遗传转化的农杆菌类型很多，但不同的农杆菌，侵染后胚的再生能力存在差异，侵染后受体材料脱分化快慢不一，转化效率和抗性植株比例不同。

因此针对不同种质选择合适的农杆菌菌株是获得转基因材料的重要前提。

我们平时做的多的是水稻和拟南芥的遗传转化。

对于基因功能研究，转基因是一项很重要的技术手段。

水稻遗传转化时常用的菌株是EHA105，拟南芥遗传转化时常用的菌株是GV3101。

开展遗传转化的首要任务就是要建立良好的受体系统。

受体系统是将用于转化的外植体通过组织培养或非组培途径获得的，能高效、稳定地再生无性系，并能接受外源DNA整合，对转化选择抗生素敏感的再生系统。

好的受体系统必须满足以下几个条件：1.分化及再生能力强；2.遗传稳定性较高；3.外植体或植物组织来源稳定；4.外源基因的导入易于 *** 作；5.对选择性筛选剂敏感。

对于不同植物材料的转基因，选取的受体系统是不一样的。

有的受体系统基本不需要损伤，有的需要切出伤口，有的需要制备成愈伤组织。

转化拟南芥，最简单快捷的方法就是浸花法，用抽薹开花的花序作转基因受体进行浸染，将花序浸泡在含有农杆菌的侵染液中数分钟，期间来回翻动，将植株上所有的花骨朵和花蕾浸染完全，然后等果荚成熟收获筛选即可。

转化水稻、小麦、谷子、早熟禾、甜椒、山药等大多数植物，最常用的是以愈伤组织作为转化受体，对幼胚或种子进行诱导，获得胚性愈伤组织，用农杆菌菌液对其浸泡，进而培养、分化、筛选，得到转基因材料。

转化水稻、荞麦，还可以用切除胚芽鞘/子叶片后剩下的茎尖作转基因受体，用农杆菌菌液对其浸泡，进而培养、分化、筛选，得到转基因材料。

转化油菜、羽衣甘蓝，可以用子叶、子叶片、子叶柄、下胚轴等作转基因受体，用农杆菌菌液对其浸泡，进而培养、分化、筛选，得到转基因材料。

子叶柄易于长出不定芽，下胚轴和子叶片需要先从基部或切口长出愈伤而后分化为不定芽。

其他受体系统：如原生质体、悬浮细胞、未成熟的幼胚等。

植物伤口所释放的酚类物质是诱导细菌附着到受体的重要因子之一，酚类物质能够活化Vir基因，为后续的T-DNA转运和整合做好准备。

已有研究证实,乙酰丁香酮、羟基乙酰丁香酮、间二羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸、儿茶酚、原儿茶酸、没食子酸、香草醛等酚类物质是有效转化诱导物质。

我们也经常在侵染液中添加乙酰丁香酮增强转化效果。

微生物侵染植物，可以从伤口侵入，也可以从自然孔口（如气孔、皮孔、花粉管等）侵入。

像浸花法侵染拟南芥，就不需要对植物造成额外的伤害。

所以，并不是所有的受体材料都要受损伤。