电动飞达上的按键功能

电动飞达上有按键，可以控制飞达的运行。

飞达是（feeder）中文译名，也叫送料器、喂料器，主要负责将SMD料供给贴装头吸料的传输装置，就是自动给贴片头供应元器件的装置。贴片机是一种高科技机器，SMT表面贴装元器件的设备，将SMD快速准确的贴装到电路板指定的焊盘上，目前主流的贴片机都是全自动化，并且贴装的元器件都越来越细小，不仅提高了产能生产效率，更加提高了电子产品的精密细小化，为电子行业的发展提供了源动力。贴片机将元器件贴装到电路板则需要飞达（feeder），也称喂料器将元器件送到指定位置，然后贴片机的贴装头吸嘴吸住指定的电子元件贴装到电路板指定的位置，下面托普科小编为大家详细介绍下飞达定义及分类。

不同的ES配方多少有些差异.基础培养基一般用DMEM或DF12.（以下为DMEM培养基为例）

1、提前一天将分装好的FBS从—20℃冰箱取出，放于4℃冰箱化冻

2、在细胞间中将FBS以及其它需要添加的成分(如，丙酮酸钠、抗生素等)，按照比例加入dmem培养基中，作好标签放入4℃冰箱保存。

ES细胞培养方法：

化冻

将血清(Fetal Bovine Serum，Hyclone)从-20℃冰箱取出，放于4℃冰箱化冻过夜也可室温(或浸于自来水中)化冻，化冻后若不马上灭活，可以放入4℃冰箱暂时保存

灭活

(1) 放入室温的水浴锅内开始加热(同时放入一个内装200 ml自来水的血清瓶，插入一根温度计，温度监控以此为准)

(2) 当温度计显示56℃时，控制在此温度30分钟±3分钟若不小心使温度上升超过56℃，则：若仍未超过60℃，且时间很短(比如：不超过5分钟)，则仍可使用若超过60℃，或者时间较长，则弃去不用，或者尝试用于ME

胞的培养

(2) 取出，自然冷却至室温(约需1-3小时)，可分装或-20℃继续冻存

分装

(1)转入细胞间，用移液器将血清分装，注意预先要将血清轻轻摇动数周、混匀吹出血清时要注意：不要吹出气泡(血清很粘稠，很容易产生气泡如果已产生气泡，则在酒精灯火焰上过一下)标好批号和日期

(2)放入-20℃冰箱冻存(分装一次大约可以使用1—2个月)。

原代胚胎成纤维细胞(ME)的制备

1.取12.5-13.5dpc孕鼠，断颈处死

2.将鼠腹面向上放置，70% 酒精润湿、消毒腹部(防止腹毛飞扬，污染内脏及子宫)，剪开皮肤层、肌肉层，打开腹腔，将连接在子宫上的结缔组织及脂肪剪去，将子宫取出，转入无菌10cm平皿中

3. 把平皿转入超净台

4. 用镊子打开子宫壁，挤出鼠胚，并与胚外组织、胎盘等分离，除去鼠胚的头、四肢及各种内脏(主要为肝脏、肺脏、心脏和肠胃等)

5. 将鼠胚移入另一新的无菌皿，用PBS洗三次

6. 弃去PBS，用弯头剪将鼠胚剪碎，加入PBS洗至溶液基本无色(1-4次)

7. 加入适量Trypsin-EDTA(0.25% Gibco 25520，下同)，体积约等于组织块体积

8. 用滴管轻轻吹匀，室温下消化1-10分钟(或消化至溶液浑浊变粘)，加入与消化液等体积培养基，轻轻吹打混匀(5-10次)，静置

9. 沉降后将上部溶液轻轻吸出，转入离心管中。

10. 将细胞悬液管离心(1000转5分钟)

11. 弃去上清，向沉淀中加入适量培养基，轻轻吹打重悬，将其分种至10 cm细胞培养皿，补加适量培养基，作标签(ME-0注意：若冻存，则可以使用复苏后的0代ME制作Feeder若直接使用则最好不用0代ME细胞做Feeder，要传到一代以后再用来制作Feeder比较好)，转入培养箱培养

12. 视细胞生长情况换液(一般3天换液一次)，若细胞已长满，则冻存，或者1：3-5传代(视细胞疏密而定)，放入培养箱继续培养(此后不用再换液)1-5代的ME细胞均可用来制作Feeder。

饲养层细胞(Feeder)的制备

注：含10 ug/ml丝裂霉素C的DMEM血清培养基(FBS占10%)(实验室所用MMC为10 mg/mL，Calbiochem)

弃去细胞培养皿中的培养液，加入适量含10ug/ml丝裂霉素C的培养基(DMEM+10% FBS)

放入培养箱培养3小时(2-4小时)

用0.1% 明胶处理培养皿(将明胶加入，摇动使明胶覆盖全部皿底，然后吸出明胶弃去即可)，室温放置2小时以上，至皿底明胶干燥为止

弃去含有丝裂霉素C的培养基，加入2-3 mL PBS，轻轻摇动，弃去PBS，如此洗3-5次(必须洗3次以上，以便彻底洗去残存的丝裂霉素，丝裂霉素是有丝分裂抑制剂，因而对ES细胞有毒性)

加入适量胰酶消化30秒，吸去消化液，静置至细胞层出现裂缝或明显滑壁为止，加入培养基，吹打，种至明胶处理过的培养皿中即可(如细胞过稀，可再补加丝裂霉素处理过的细胞)，半小时后即可使用(如果急用，则可以用ES细胞培养基终止消化，然后与ES细胞一起转入明胶处理过的新板上)，可使用6-10天，用前更换培养液(如未用明胶处理培养皿，则需在培养箱中放置2小时以上方可使用最好是前一天下午制作Feeder，第二天上午使用，这时的Feeder状态最好，最适于ES细胞贴壁生长，而且万一制作的Feeder在第二天早上发现出了问题，还可以赶紧补做)。

ES细胞的复苏

提前制备好相应数量的Feeder

准备37-39℃的热水，从液氮罐中取出所需冻存管(冻存细胞)，迅速投入热水中，迅速剧烈摇动直至冻存液全部融化

转入无菌间，1000转/分钟离心5-10分钟

弃上清，加入1 ml ES培养液轻轻吹打重悬，转入铺有饲养层细胞的培养皿中(冻存前细胞来自多大的培养皿，复苏时就用相应大小的培养皿)，补加适量培养液

转入培养箱培养，次日换液此后每24小时换一次液，每48小时传一次代(视生长情况)。

ES细胞的换液

1. 提前半小时左右将培养基从4℃冰箱取出，放于室温(或者放于37℃温箱内)；

2.细胞培养皿从培养箱内取出，相差显微镜下作常规观察(判断生长情况，并确证未发生污染)后转入无菌 *** 作台内

3. 将ES细胞培养皿内的液体吸出、弃去，换新鲜培养基(6 cm培养皿约5 mL，3.5 cm培养皿约3 mL培养基若死细胞较多则可以先用PBS洗一次，再加培养基)

4. 放回培养箱继续培养。

ES细胞的传代

前一天下午做好所需数量的Feeder细胞板

提前半小时左右将培养基从4℃冰箱取出，放于室温(或者放于37℃温箱内)

将ES细胞培养皿、Feeder细胞培养皿从培养箱内取出(相差显微镜下作常规观察，Feeder细胞应生长良好，细胞覆盖95%左右，至少90%以上的培养皿面积)ES细胞应生长良好，接近长满培养皿，细胞集落大小一致、疏密均匀，集落形状规则、呈椭圆形、边缘光滑、表面光滑，细胞生长致密、核大、胞质少

将ES细胞培养皿内的液体吸出、弃去，用PBS 1 mL左右洗一遍，加入胰蛋白酶溶液，作用约30秒，小心吸出胰蛋白酶溶液，弃去再作用1—5分钟，不时观察，待细胞层(皿底一层白色脏东西样膜)出现裂缝并明显开始下滑时，补加培养基，适度吹打(视消化程度及管口粗细而定，至看不到明显的大的细胞团块为止)平均分到Feeder培养皿中(滴加，以免将Feeder细胞吹脱落下来)，滴加补加培养基至5 ml左右(滴加，以免将Feeder细胞吹脱落下来若为3.5cm培养皿，则补加至3ml左右)，作好标签

前后左右水平晃动培养皿，使ES细胞均匀分布于培养皿中，放入培养箱继续培养。

ES细胞的冻存

常规方法将细胞消化成单细胞悬液

转入试管，1000转/分钟离心5分钟

配适量冻存液(为含10% 二甲亚砜(DMSO)，10% FBS的DMEM培养液)

弃上清，每管加入1ml冻存液，吹打成细胞悬液(只要使ES细胞分散成3—5个细胞的小团块即可)，转入冻存管，作好标签

放入程序冻存盒内24小时后转入液氮罐中冻存。

---