一个高通量实验数据CLIP-Seq(或称为HITS-CLIP,PAR-CLIP,iCLIP)和mRNA降解组测序数据支持的microRNA靶标数据库,包含了miRNA-mRNA,miRNA-lncRNA,miRNA-circRNA,miRNA-ceRNA 和RNA-protein等的调控关系。整合和构建多个流行的靶标预测软件的交集和调控关系。最新版本发布时间:2013年11月。
2、miRbase
众所周知的microRNA基因注释数据库。目前miRBase只提供了microRNA的靶标的预测软件的链接(如:PicTar)。最新版本发布时间:2010年9月。
3、ChIPBase
整合CLIP-Seq和ChIP-Seq的数据探讨microRNA的转录和转录后调控,构建转录因子->microRNA->靶标的调控网络。最新版本发布时间:2012年11月。
4、Tarbase
一个收集已被实验验证的microRNA靶标数据库。最新版本发布时间:2009年1月。
5、miRecords
一个整合的microRNA靶标数据库。整合多个靶标预测软件的调控关系。最新版本发布时间:2010年11月。
6、targetScan
基于靶mRNA序列的进化保守等特征搜寻动物的microRNA靶基因。是预测microRNA靶标假阳性率较低的软件。而且是microRNA领域大牛Bartel实验室开发的。最新版本发布时间:2009年4月。
7、PicTar
基于microRNA或microRNA靶标联合作用等特征开发的搜寻动物的microRNA靶基因。假阳性率也较低。是microRNA领域大牛Rajewsky实验室开发的。最新版本发布时间:2007年3月。
8、PITA
基于靶位点的可接性和自由能预测microRNA的靶标。是著名的生物信息学家Segal实验室开发的。最新版本发布时间:2008年8月。
9、RNA22
基于序列特征预测microRNA的结合位点。是几个流行的microRNA靶标预测软件的其中一个。IBM公司的研究团队开发的。最新版本发布时间:2007年。
10、miRanda和microRNA.org
是著名的MemorialSloan-Kettering 癌症研究中心的研究人员开发的软件和数据库。miRanda的最新版本又叫mirSVR。最新版本发布时间:2010年8月。
11、MicroCosm
EMBL-EBI的Enright 实验室开发的microRNA靶标数据库。最新版本发布时间:2010年8月。
12、miRTarBase
整合实验证实的microRNA靶标的数据库。最新版本发布时间:2010年10月。
13、miRGator v2.0
整合microRNA表达、靶标和疾病相关信息的数据库。最新版本发布时间:2010年11月。
14、MiRNAMap
动物的microRNA基因及其靶标的数据库。最新版本发布时间:2008年1月。
15、miRDB
动物microRNA靶标预测和功能注释数据库。最新版本发布时间:2010年8月。
16、RNAhybrid
一个基于miRNA-target配对自由能预测microRNA的靶标。最新版本发布时间:2011年6月。
17、miRGen
microRNA基因和microRNA靶标数据库。最新版本发布时间:2007年1月。
你还在为想不到国自然基金课题而发愁?作为硕士研究生、博士研究生,很快就要开题了,但是自己没有找到课题的头绪,整天在为开题的事情而发愁?现在好了,我们将铜死亡相关的ceRNA课题设计思路分享给你,助你申请国自然基金或者博硕开题一臂之力!
有人会说:ceRNA好像已经烂大街了,还值得研究吗?的确如此,传统的ceRNA已经沦为基础研究批量生产SCI的工具,变得不值钱了, 但是铜死亡相关的ceRNA是空白的,这就是我们的创新点。
如何将铜死亡与ceRNA联系起来?我们可以采用倒推法来找到我们的课题:
具体分析思路(全程基于TCGA数据的生信分析,只适合肿瘤分析):
一、确定一个值得研究的铜死亡相关基因
1、差异分析
2、单因素Cox分析
3、KM生存分析
4、表达与临床的相关性分析
二、筛选上游的miRNA
1、差异分析(miRNA)
2、单因素Cox分析(miRNA)
3、KM生存分析(miRNA)
4、相关性分析(miRNA-mRNA)
5、表达与临床的相关性分(miRNA)
三、筛选上游的lncRNA
1、差异分析(lncRNA)
2、单因素Cox分析(lncRNA)
3、KM生存分析(lncRNA)
4、相关性分析(lncRNA-miRNA)
5、相关性分析(lncRNA-mRNA)
6、表达与临床的相关性分(lncRNA)
通过上面的分析就形成了我们的 科学假说:lncRNAxx3通过吸附miRNAxx2调控铜死亡相关基因xx1促进xx癌的发生发展 ,一个课题的前期工作就差不多做好了,剩下就是实验验证的事情了,你学会了吗?
当LncRNA HOTAIR低表达时,miR-331-3p与ago2结合到HER2 Mrna的3’-UTR抑制翻译;当LncRNAHOTAIR高表达时,LncRNAHOTAIR竞争性的结合miR-3313p-ago2,使HER2mRNA的翻译不受抑制,从而促进了HER2蛋白的表达。
本文旨在说明LncRNA HOTAIR结合miR-331-3p后解除其对HER2mRNA翻译的抑制从而促进HER2蛋白表达。作者首先根据临床样本进行Q-PCR检测正常组织细胞核胃癌细胞的LncRNAHOTAIR的表达和存活率与LncRNAHOTAIR表达量关系的分析筛选出本文的主体LncRNAHOTAIR。再进行功能和作用机制两方面的研究。
(1)功能实验:通过建立LncRNAHOTAIR过表达/敲低稳定细胞株,分别进行MTT实验、Hoechst染色、流式细胞仪、Transwell、动物体内成瘤实验验证LncRNAHOTAIR对细胞增殖,细胞凋亡的影响。
(2)机制实验:生物信息学分析表明LncRNAHOTAIR有与microRNA的结合位点,作者通过荧光素酶实验验证了LncRNAHOTAIR与miR-331-3p的结合,同样的用荧光素酶实验检测HER23’-UTR与miR-331-3P的关系,然后用Ago2-RIP技术验证了LncRNAHOTAIR与miR-331-3p-Ago2结合。最后通过使用WB检测LncRNAHOTAIR过表达/敲低后的HER2蛋白的表达验证了LncRNAHOTAIR对HER2的促进作用。
三、核心****FIGURE
Figure1说明LncRNAHOTAIR以miR-331-3p为靶标来调控HER2的表达。
A、 生物信息学预测LncRNA HOTAIR与microRNA的结合位点。
B、荧光素酶实验,将连接LncRNA的荧光素酶报告质粒与microRNA转染细胞,检测荧光素酶活性,结果表明LncRNAHOTAIR与miR-331-3p的荧光素酶活性显著降低,说明LncRNAHOTAIR与miR-331-3p高度结合。
C、荧光素酶实验,将HER2 3’-utr连到荧光素酶报告质粒上,与LncRNAHOTAIR表达质粒共转染,然后转染miR-331-3p检测荧光素酶活性。表明miR-331-3p抑制荧光素酶活性,HOTAIR促进荧光素酶活性。
D、 Ago2-RIP,用Ago2蛋白抗体钓取与Ago2-结合的RNA,然后通过q-pcr检测表明Ago2结合LncRNAHOTAIR和miR-331-3p。
E、 通过WB检测miR-331-3p过表、HOTAIR敲低和过表达细胞的HER2的表达,说明miR-331-3p抑制HER2表达,而HOTAIR促进HER2的表达。
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