1:94度 5min
2:94度 1min
3:65度 1min(然后连按向右的方向键3下,进入到另一个界面,在
标闪烁处(也就是3的后面)输入-0.5(其上方为dt),
其他的不管,然后,再连续按enter键回到编程的主页
面,此时(65 度 1min 后面会显示一个加号)
4:72度 1min 2 19(Biometra PCR 本身加一个反应即20个循环)
5:94度 1min
6: 55度 1min
7: 72度 1min 5 4(Biometra PCR 本身加一个反应即5个循环)
8:72度 10min
9 :4度 10h
好了,一个touchdown程序就设好了,本来想照了图片对应说,但是借别人的相机,界面照得不清楚,只好这样写出来了,也不知道说清楚了没有。
1. 保持反应冷静在热循环开始之前保持所有反应低温对于避免非特异性启动至关重要,即使是使用TouchdownPCR。
2.使用热启动设置
一旦您的反应准备就绪,最好使用热启动设置,进一步减少初始循环期间的非特异性相互作用。
3.考虑添加剂
如果使用Touchdown PCR 时仍然遇到问题,请考虑将其与添加剂结合使用。
4. 保持低周期数
太多循环会导致凝胶中出现非特异性条带,表明非特异性扩增。为限制这种情况,请将 PCR 扩增循环的总数保持在 35 以下。
5. 添加一个额外的变性循环
在 96°C 或 97°C 下额外 1 分钟的变性循环对于困难的模板可能非常有用。
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