细胞融合是在自发或人工诱导下,两个细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。基本过程包括细胞融合形成异核体(heterokaryon)、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核的杂种细胞。细胞融合可作为一种实验方法被广泛适用于单克隆抗体的制备,膜蛋白的研究。
融合过程
细胞膜有内外两层,细胞融合首先发生在外层,然后再到内层,由此就出现了两种融合通道,细胞体内物质通过这两种通道转移。病毒膜与目标细胞融合时,只出现一种融合通道,即导致融合的基因只能在病毒中找到,而在目标细胞中却找不到。但是,通过EFF-1发生的细胞融合则是一个双向融合过程,需要EFF-1出现在两个相互融合的细胞中。
细胞融合方法
同种细胞在培养时2个靠在一起的细胞自发合并,称自发融合;异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合,称诱发融合。
1、仙台病毒法融合
①两种细胞在一起培养,加入病毒,在4℃条件下病毒附着在细胞
膜上。并使两细胞相互凝聚;
②在37℃中,病毒与细胞膜发生反应,细胞膜受到破环,此时需
要Ca2+和Mg2+,最适PH为8.0一8.2;
②细胞膜连接部穿通,周边连接部修复,此时需Ca2+和ATP;
④融合成巨大细胞,仍需ATP。
2、聚乙二醇法
聚乙二醇结构为:HOH2C,分子量小的PEG,融合效应差,又有毒性,分子量过大,则粘性太大,不易 *** 作。
3、电融合法
在直流电脉冲的诱导下,细胞膜表面的氧化还原电位发生改变,使异种细胞粘合并发生质膜瞬间破裂,进而质膜开始连接,直到闭和成完整的膜,形成融合体。
优点:融合率高、重复性强、对细胞伤害小;
装置精巧、方法简单、可在显微镜下观察或录像观察融合过程;
免去PEG诱导后的洗涤过程、诱导过程可控性强。
4、离心振动
物理方法之一,使用离心机等机器实现细胞之间的融合。
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