RT-PCR反应受多个因素影响,如硫酸镁的浓度, 引物退火的温度,扩增的循环数等。
1、建议选择05-30 mM (相差05 mM)的硫酸镁作初步实验。
2、对于具有较高Tm的引物,增加退火和延伸时的温度对反应有利。较高的温度有利于减少非特异的引物结合,因而提高特异产物的得率。
3、大多数目标RNA经40轮PCR反应就能观察到。但如果目标RNA太稀少,或者只有很少的起始材料,有必要增加扩增的次数到45-50次。
rtpcr的基本含义是逆转录-聚合酶链反应。根据查询相关公开信息显示,RT-PCR即逆转录-聚合酶链反应。原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。
可能这得看你的运气了~我每次反转录三四个都没有问题的~ 因为大部分的引物序列都是一样的~所以没事~不会错配~但是并不排除发生错配的可能~ 我们就有人反转录不出来~U6都出不来~那就分开弄~我没也就是普通的反转录的酶~m-MLV矮Ace矮都。
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