科研人员为什么要做细胞株鉴定

细胞株（Cell lines）作为科研工作者常用的工具，主要用于生物医学研究的体外实验（In vitro）研究。截止目前，被ATCC及DSMZ官方数据库收录的商用细胞株约为4000种左右。近年来，随着细胞株的广泛应用，细胞株被错误鉴定和交叉污染问题显得尤为突出。为了确保实验结果的可重复性，NIH和ATCC近期对此发出呼吁，要求研究者对细胞株进行鉴定，已明确所使用细胞的身份。多种主流杂志也纷纷要求作者在投稿时提交细胞株鉴定（Cell Line Authentication）报告，有些杂志甚至要求作者提供实验前、实验中和实验后等不同阶段的细胞株鉴定报告。

大量研究表明STR Profiling方法是进行细胞交叉污染和性质鉴定的最有效和准确的方法之一，STR Profiling应用于细胞鉴定已被ATCC等机构强烈推荐。苏州鉴达生物科技（Genetic Testing Biotechnology(Suzhou)）目前采用六色荧光复合扩增体系，可同时检测20余个STR基因座，获得每个基因座的STR分型结果。根据ATCC推荐的8个核心STR基因座数据进行检索匹配，来确定细胞株身份。该方法灵敏度高，可检测低至10ng的基因组DNA，且能排除非人源DNA的污染，为广大科研工作者提供了方便快捷的细胞株鉴定绿色通道。

用户只需提交细胞悬液样本，直接送检或邮寄细胞样本。一般一个工作日出具英文鉴定报告，报告可直接用于外文杂志投稿。目前应用苏州鉴达生物科技报告已发表的论文期刊包括Caner Res，Carcinogenesis，Intl J Cancer等。

培养某一类型细胞没有固定的培养条件.在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长.总之,首选MEM做粘附细胞培养RPMI-1640做悬浮细胞和人白血病细胞单层培养是一个好的开始,它也广泛应用于哺乳动物细胞和杂交瘤细胞的培养,如人骨髓瘤细胞、鼠杂交瘤细胞、人白细胞以及B细胞和T细胞各种目的无血清培养最好首选AIM V(12005)培养基(SFM).选择细胞的培养基也可以到ATCC上查询,ATCC (American Type Culture Collection) 收集了绝大多数细胞的详细资料.打开ATCC网页的Cells and hybridomas链接,输入细胞名称就可以搜索ATCC的细胞数据库.数据库中有每一种细胞的详细描述,包括细胞的来源,培养和冻存条件,以及相关文献等资料. 同一种培养基也会因其添加物的不同而应用于不同的细胞培养和不同的实验需求,下面就详细介绍下培养基中各种添加剂的功能.1. L-谷氨酰胺(L-Glutamine)在细胞培养中重要吗?它在溶液中不稳定吗?是细胞生长的必须氨基酸,为培养的细胞提供重要的能量来源.脱掉氨基后,L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢.L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解,降解率随保存温度而变.L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成,而氨对于一些细胞具有毒性.2. GlutaMAX-I是什么?培养细胞如何利用GlutaMAX-I?这个二肽有多稳定?GlutaMAX-I 即谷丙氨酸二肽,是一个L-谷氨酰胺的衍生物,其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护.一种肽酶逐渐裂解二肽,释放L-谷氨酰胺供利用.GlutaMAX-I二肽非常稳定,即使在121磅灭菌20分钟,GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解,如果在相同条件下,L-谷氨酰胺几乎完全降解.3. 培养基中丙酮酸钠的作用是什么?丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源,尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源,但是,如果没有葡萄糖的话,细胞也可以代谢丙酮酸钠.4. Hank′s 平衡盐溶液(HBS)和Earle′s平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别?HBS和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagle′s (2.2g/L)中比在Hanks′ (0.35g/L) 中高.碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡,以维持溶液的PH值.Eagle′s液在空气水平的CO2 中,溶液会变碱,Hanks′液在CO2培养箱中会变酸.如果希望在CO2培养箱中保存组织,需要用Eagle′s液,.如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织,用Hanks′液就可以了.5. 培养液pH对细胞生长的影响?由于大多数细胞适宜pH为7.2-7.4,偏离此范围可能对细胞生长将产生有害的影响.但各种细胞对pH的要求也不完全相同,原代培养细胞一般对pH变动耐受差,无限细胞系耐受力强.但总体来说,细胞耐酸性比耐碱性强一些.在配制培养用液时,需要注意一点：培新配的培养基在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时,溶液的pH还会向上浮动0.2左右.6. 培养细胞时应使用5%还是10%CO2,或者根本没有影响?答：一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统,而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度.当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7g时,细胞培养时应使用10% CO2当培养基中NaHCO3为每公升1.5g 时,则应使用5%CO2培养细胞.7. Hepes的作用HEPES溶液：是一种弱酸,中文名字是羟乙基哌秦乙硫磺酸,主要作用是防止培养基pH迅速变动.在开放式培养条件下,观察细胞时培养基脱离了 5%CO2的环境,CO2气体迅速逸出,pH迅速升高,若加了HEPES,此时可以维持pH7.0左右.一般在进行克隆化培养时要添加HEPES.神经细胞原代培养的过程中能用到8. NaHCO3培养基中使用了NaHCO3-CO2缓冲系统,并采用开放培养,使细胞代谢产生的CO2及时溢出培养瓶,再通过稳定调节温箱中CO2浓度(5%),与培养基中的NaHCO3处于平衡状态,从而调节培养基的PH值.9. NEAA：非必须氨基酸NEAA(非必需氨基酸)是含几种非必需氨基酸的合剂,添加到的原培养基不同,NEAA也有不同的种类,比如添加至MEM的NEAA,含L-Alanine、L-Asparagine、 L-Aspartic Acid、L-Glutamic Acid、L-Glycine、L-Proline、L-Serine.10. 氯化钙氯化钙对成骨细胞培养有毒性,所以成骨细胞的培养基中应不含氯化钙.11. 什么培养基中可以省去加酚红?酚红在培养基中用作pH值的指示剂：中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色.酚红本身对生物制品质量并不会产生影响,可以通过纯化技术去除,但酚红在无血清培养基可能带来胞内钠/钾失衡,影响细胞生长,当然这种作用能被血清所中和或减轻.酚红并不是培养基中必需的一种成分,很多国外的疫苗或抗体生产企业在生产过程中都使用无酚红培养基.研究表明,酚红可以模拟固醇类激素的作用,(特别是雌激素).为避免固醇类反应,培养细胞,尤其是哺乳类细胞时,用不加酚红的培养基.由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时,不使用加有酚红的培养基. 你可以到生物帮那里详细的了解一下,那里有介绍的,如果有问题,那里还有在线交流核心版块,可以帮助你找到答案,看看 www.bio1000.com/zt/cell/45828.html 会有帮助的.

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