组织培养繁殖的程序分哪几步？

组织培养繁殖方法的主要程序有如下几步：

（1）配制培养基

培养基是向培养植物提供养分的基质，由植物生长所必须的大量元素、微量元素、有机物质、蔗拦游扒糖、琼脂（固体培养基用）等物质所组成，称为基本培养基。为了调节培养物的生长和分化，还需附加不同植物生长调节剂，如萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）、6-苄基嘌呤（RA），激动素（KT）以及2，4-1）等。将各种物质配制好，装入三角瓶或试管，高压消毒后备用。

（2）接种材料（外植体）的消毒和接种

从田间将匍匐茎段采回，利用消毒剂（升汞、漂白粉、次氯酸钠等）对茎段进行消毒，杀灭上面所带的细菌和真菌。然后在超净工作台上在无菌条件下剥离茎尖，接种到已配制好的培养基上。置于25℃左右的恒温和16小时光照的条件下培养。

（3）初代培养

是对刚接入的匍匐茎尖（外植体）的培养，目的是使仅为分生组织的茎尖分化出芽和无根小植株。培养基中加的激素是有利于分化的激素，这种培养基叫分化培养基。外植体经30天以上的培养，一个茎尖即可分化出若干无根小植株。

（4）继代培养（增殖培养）

将初代培养形成的无根植株，转入继代培养基上继续培养，使其增殖，经45天左右，会有20～30个无根小苗发生。经过多次的继代培养，使增殖的数量达到一定的要求，即可将无根苗转入生根培养基上，使其生根，形成完整的植株。

（5）生根培养

生根培养基与增殖培养基不同之处是降简昌低或去掉了细胞分裂素类的激素，加入了有利于生根的激素，如吲哚丁酸（IBA）等。无根植株在这磨闹种培养基上不再增殖，而是在每株无根苗基部发生若干不定根，形成可以向外移栽的完整秧苗。

（6）移栽

试管苗生根后可直接移栽到温室的土壤中。移栽后的两周内应覆盖薄膜和遮荫，以保持土壤和空气的湿润。

经过上述阶段的培养，一瓶初代培养的苗经几代的增殖可培养出几千株成苗。

生姜良种繁育的基本程序是：

（1）建立良种繁育制度。近年来，姜的栽培面积逐年扩大，老姜区由于留种不适和连年重茬，姜瘟病危害严重；不少新姜区则由于盲目引种，种姜带菌，也有病害发生。为此，必须建立良好的繁育种姜制度，做好无病姜种的繁育和优良品种的保纯、提纯工作。

根据姜的特点，应建立两级繁育制度，即将姜的繁殖分成繁殖用种与生产用种，分别采取不同的繁育措施，保证余顷原种与生产种均有较高的质量。具体做法是：第一年用原种的第二代或上年大田株选良种建一级种子田，从其中再选优株供下年一级竖段陆种子田用种，其余去杂去劣后，供下年二级种子田用种，二级种子田再经片选作为大田低种，如此逐年进行，不断生产高质量的种姜。其程序如下：

（2）原种生产。姜原种的纯度要求99%，等级一级，提供给生产上繁殖的二代原种纯度不低于97%，等级不低于二级，其产量和品质应高于原生产用种，原种由选育单位供给的原原种繁殖，所得的原种第二、三代再繁殖后供生产上用。几年后，可能发生混杂退化，可采用母系提纯法生产原种，实行品种更新。母系提纯法的主要程序是单株选择、分系比较、中选优系混合繁殖、生产原种。

注意，姜原种的选择应从根茎选起，因为姜块可带菌传播姜瘟病，只有从无病姜块选起，才能保证防除病害。

①姜种选择。种姜应选色泽鲜黄、有光泽、组织细密、无病无伤、无霉烂、无潮解发汗的姜块200块以上，入选种圃单行种植。

②单行选择。除按品种的标准性状进行选择外，主要注意抗姜瘟病及耐贮性的选择。首先在旺盛生长中期选株丛大，全行生长整齐，叶片肥厚、无萎蔫的姜行150行以上。盛长后期再按上述标准复选100行以上。收获期选姜燃冲球无霉烂、无水浸状姜行的姜块入窖单贮。最后，在出窖催芽后选芽多而姜块完整的行系50个以上，入株系圃选种。

③行系比较。各行系分区种植，以原品种作对照，经比较鉴定，选出优良株系。

④混系繁殖。将分系比较后当选的行系混藏，下年在原种圃繁殖生产原种。

（3）原种繁育技术。姜易感姜瘟病且种姜可能带菌，因此繁育原种首先应进行种姜消毒。选晴天从姜窖中取出姜种，晒2～3天，以促进姜芽萌发，并清除在窖中变质的姜块，选取健壮种姜进行消毒处理，消毒药剂可选用40%甲醛溶液或0.5%高锰酸钾溶液浸泡30分钟，也可用20%草木灰浸出液处理10～20分钟。

原种繁殖田应选择排灌方便、富含有机质的微酸性壤土，实行3年以上轮作，以防姜瘟病发生。

其他播种和田间管理技术同常规大田生产。

野生动物驯养繁殖许可证的办理程序：

一、办理野生动物驯养繁殖许可证，事前要根据国家法律法规检查所要驯养繁殖的野生动物具备的条件：

1、有适宜驯养繁殖野生动物的固定场所和必需的设施；

2、具备与驯养繁殖野生动物种类、数量相适应的人员和技术；

3、驯养繁殖野生动物的饲料来源有保证。

具备了上述条件，向当地县级林业行政主管部门申领国家重点保护野生动物驯养繁殖许可证 。

二、 驯养繁含烂此殖野生动物的单位和个人，向所在地县级政府野生动物行政主管部门提出书面申请，提交材料，并填写《国家重点保护野生动物驯养繁殖许可证申请表》。提交材料：

1、申请书（村社、乡镇或街道签字盖章）；

2、申请人身份z复印件；

3、申请驯养繁殖的野生动物种源来源证明，包括引种协议书或意向书、有效批准文件、进出口证明书、收容救护处理文书等； 

4、证明其对驯养繁殖固定场所具有相应使用权的有效文件或材料；

5、名称预先核准通知书复印件； 

6、驯养繁殖所需资金来源证明； 

7、饲养人员技术能力证明；

8、兽医资格证复印件；

9、野生动物饲料来源说明材料；

10、从事野生动物驯养繁殖的可行性研究报告或总体规划（54种名录以外的物种）；

11、申请驯养繁殖的各种野生动物的固定场所、防逃逸设施历宏、笼舍、隔离墙（网）等图片，及面积、规格、安全性的说明材料；

12、提供种源单位的资质证明：企业法人营业执照、驯养繁殖许可证、组织机构代码、税务登记证等；

13、增加驯养繁殖的提交已经取得的驯养繁殖许可证和相关批准文件复印件，原有驯养繁殖的种类、数量和健康状况说明材料。

三、县级政府野生动物行政主管部门接到书面申请，在十五个工作日内完成审核工作。审核程序：当地林业部门对外办公室受理→林政科核查、林业局意见→市林业主管部门意见→省林业厅或野生动植物自然保护站审核发证。

四、审批权限：凡驯养繁殖国家一级保护野生动物的，由省、自治区、直辖市政府林业行政主管部门报林业部审批；凡驯养繁殖国家二级保护野生动物的，由省、自治区、直辖市政府林业行政主管部门审批。

批准驯养繁殖野生动物的，作出行政许可决定的林业行政主管部门应当核发《驯养繁殖许可证》。

《驯养繁殖许可证》和《国谈迅家重点保护野生动物驯养繁殖许可证申请表》由林业部统一印制。

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