293T细胞为什么经常用于转染、蛋白质表达？

许多真核表达载体如pcDNA3.1中含有SV40病毒的复制起始位点，可以在表达SV40病毒T抗原的细胞系中复制，从而提高外源基因的表达水平。293T细胞就是一种表达SV40病毒T抗原的细胞系，它来源于人胚胎肾细胞293HEK。

经改造后在其中插入了T抗原，因此用293T细胞做转染可以获得较高的表达水平。 293T细胞也可以作为普通的哺乳细胞用于筛选稳定表达的细胞系，不过它贴壁性差，容易脱落，不利于筛选。 3T3细胞是小鼠胚胎成纤维细胞系，它具有明显的接触抑制作用，所以易于识别已发生转化的细胞。

293细胞是人肾上皮细胞系，有多种衍生株，比如HEK293，293T/17等，来源都是人胚胎肾细胞，其极少表达细胞外配体所需的内生受体，且比较容易转染，是一个很常用的表达研究外源基因的细胞株。

293T细胞由293细胞通过基因技术派生出的细胞系，是经过腺病毒E1A基因的转染，能表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区。

扩展资料：

293T细胞的转染技术：

常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。

一般来说，超螺旋质粒DNA转染效率较高，在转染后24-72小时内（依赖于各种不同的构建）分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定转染，外源DNA既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体（episome）存在。

尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整合率高。外源DNA整合到染色体中概率很小，大约1/104转染细胞能整合，通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B磷酸转移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。

参考资料来源：百度百科-T淋巴细胞

参考资料来源：百度百科-239细胞

参考资料来源：百度百科-转染

293T细胞的冻存

1.

随着传代的次数增加，293T细胞会出现生长状态下降，出现突变等。所以要在细胞购进时就进行大量冻存，以保证实验的稳定性和持续性。

2.

在细胞对数生长期进行冻存，增加细胞复苏成活率。

3.

倒去细胞上清液，加入D-Hank's液洗去残留的培养基。

4.

加入0.25%的胰酶，消化10-20s后倒去。

5.

镜下观察细胞变圆，细胞间间隙加大时，加入新鲜培养基吹打混匀。

详细的步骤可以到生物帮了解下，

http://www.bio1000.com/reseach/

生命科学研究成果,分子,细胞生物学研究进展,生命科学研究进展。

原代动物细胞培养：

1、实验材料要新鲜，从活体分离材料后要低温保存，并尽快进行细胞分离实验。

2、无菌 *** 作。 *** 作时用的培养液，可加平时细胞培养液5倍含量的青链霉素。

3、用酶法分离细胞时，注意酶液的浓度和控制消化时间。

贴块法分离细胞时，注意动作要轻柔，不要伤到细胞组织，组织块边缘尽量平整有利于细胞游离。

4、培养液的选择。不同的细胞有对培养液中营养的要求不同，根据所分离细胞的特性选择。

传代细胞培养：

1、无菌 *** 作

2、控制消化时间

3、及时关注细胞生长状态

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